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实用肝脏病杂志2016 年 7 月第 19 卷第 4 期 J Prac Hepatol，Jul 2016.Vol.19 No.4 · ··短篇论著·102 例慢性 HBV感染者病毒基因变异情况分析*张撷华，林爱清，胡忆玲，韦丽琴【摘要】 目的 探讨乙型肝炎病毒感染者病毒基因分型和变异情况及其临床意义。方法 我院住院和门诊诊治的慢性HBV 携带者 53 例和慢性乙型肝炎患者 49 例，取血清，送往北京地坛医院肝病研究所进行 HBV DNA 基因测序。结果 在 102 例慢性 HBV 感染者中，HBV B 型 36 例（35.29%），C 型 59 例（57.84%），B/C 混合型 4 例，未定型 3 例。慢性乙型肝炎组 B 型 17 例，C型 28 例，B/C 混合型 3 例，未定型 1 例，携带者组 B 型 19 例、C 型 31 例、B/C 混合型 1 例、未定型 2 例（ x 2 =0.32 P=0.57）；在 53 例携带者中，检出耐药位点 5 例（9.4%），其中 3 例为 rtA181T，1 例为 rtL180M+rtM204V，1 例为 rtM/V207I 突变，在 49 例慢性乙型肝炎患者中，共检出耐药位点 13 例（26.5%)，其中 5 例为 rtA181T，1 例为 rtL180M+rtM204V，2 例为 rtM/V207I，2 例为 rtN236T，1 例为 rtA181T+rtM204I+rts202N，1 例为 rtI169V+rtV173D，1 例为 rtM204I+rtM204L。结论 在 HBV 携带者和慢性乙型肝炎患者均检出耐药位点变异，其意义有待于进一步探讨。【关键词】 慢性乙型肝炎；病毒基因型；基因耐药DOI：10.3969/j.issn.1672-5069.2016.03.025Hepatitis B viral gene mutation in 102 patients with hepatitis B viral infection Zhang Xiehua，Lin Aiqing，Hu Yiling，etal. Department of Infectious Diseases，First Affiliated Hospital，Baotou Medical College，Baotou 014010，Inner MongoliaAutonomous Region，China【Key words】 Hepatitis B；Genotypes；Viral mutation*基金项目：内蒙古自治区高等学校科学研究项目（编号：NJZZ11173）作者单位：014010内蒙古自治区包头市 包头医学院第一附属医院感染病科（张撷华，林爱清，胡忆玲）；包头医学院（韦丽琴）第一作者：张撷华，女，30岁，硕士研究生，住院医师。E-mail:zhangxiehua187448@163.com通讯作者：林爱清，E-mail:linda5335@sina.com乙型肝炎病毒属嗜肝 DNA 病毒科，为双链 DNA 病毒，其长链（负链）携带了病毒的全部遗传信息，包含 4 个部分重叠的开放读码框架。由于乙型肝炎病毒聚合酶/逆转录酶缺乏纠错功能，导致病毒基因变异的发生十分常见。乙型肝炎病毒基因变异可以引起病毒生物学特性的改变，导致疾病临床表现、诊断、治疗和预后等方面出现一系列新问题。抗病毒是治疗关键，然而不同病毒基因型及基因变异对药物的应答率存在显著差异，严重影响药物的效果，耐药及无应答患者预后差，进展为肝硬化和肝癌的概率高 [1] 。本文探讨了慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒基因分型和变异的临床意义。1 资料与方法1.1 研究对象 本研究共纳入 102 例慢性乙型肝炎病毒感染者，均为 2012 年～2013 年我院住院及肝病门诊患者，诊断符合《慢性乙型肝炎防治指南》[2] ，其中慢性 HBV 携带者 53 例，男 35 例，女 18 例，平均年龄 33.8±9.2 岁，血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶正常，在入选前未接受过抗病毒治疗，HBVDNA>1×10 7 copies/ml，HBeAg 阳性 39 例；慢性乙型肝炎患者49 例，男 39 例，女 10 例，平均年龄 48.2±15.7 岁，HBeAg 阳性27 例。入选标准： （1）核苷类似物治疗 3 个月以上，HBV DNA仍阳性； （2）治疗过程中转氨酶出现反复波动； （3）治疗过程中曾出现过 HBV DNA 下降或低于检测值下线后再次升高。1.2 治疗方法 给予慢性乙型肝炎患者拉米夫定【葛兰素史克制药（苏州） 有限公司】100 mg，1 次/d 或阿德福韦酯 10mg，1 次/d，单用或联用治疗失败者考虑为耐药，且拉米夫定或阿德福韦酯单用或联用抗病毒治疗时间为 3 个月以上，并在半年内未用过干扰素和其他免疫抑制剂。1.3 血清 HBV DNA 基因测序 取患者血清，离心，-70℃保存，定期加干冰送往北京地坛医院肝病研究所。检测方法：①使用德国 Roche MagNA Pure LC 全自动核酸提取、加样系统，获得 HBV DNA；②在美国 PE9600 扩增仪扩增；③用Promega 公司的PCR 产物纯化试剂盒纯化 PCR 产物；④纯化产物经Beckman 测序试剂盒进行测序反应，然后在美国Beckman Coulter CEQ8000 Genetic Analysis System 上得到HBV DNA 的序列和图谱。1.4 统计学分析 应用 SPSS 17.0 统计学软件进行分析，率的比较采用 x 2 检验，正态分布的计量资料以 x±s 表示，采用 t检验，对可能引起基因耐药变异的各因素采用 Logistic 多元回归分析，P<0.05 被认为具有统计学意义。2 结果2.1 慢性 HBV 感染者基因型分型分布 在纳入的 102 例慢480