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    188宝金博页面版: 双酚A残留酶联免疫分析方法的研究及应用.

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    内容提示： 2 3 4 文章编号 ：1000—8551( 2014 ) 02~ 234—06 核 农 学 报 2014，28(2) ：0234 —0239 J ouraal of Nuclear Agricultural Sciences 双酚 A 残留酶联免疫分析方法的研究及应用 张丽莎 吕型超 陈涵倩 邓 杰 潘 熙萍 施曼玲 ( 杭州师范大学生命与环境科 学学院，浙江 杭州 310036) 摘 要：为了建立双酚 A 残留的酶联免疫分析方法，采用碳化二亚胺法将半抗原双酚酸( BHPVA ) 分别与 卵清蛋 白( OVA ) 和牛血清蛋白( BSA ) 偶联 ，制备免疫原 BHPVA—OVA 和包被原 BHPVA ．BSA 。基质辅助 激光解析 电离飞行时间质谱( MALDI—TOF．MS ) 检测表 明 BHPVA 与 BSA 和 OVA ...

    文档格式：PDF | 页数：6 | 浏览次数：61 | 上传日期：2015-12-02 22:56:17 | 文档星级：
    2 3 4 文章编号 ：1000—8551( 2014 ) 02~ 234—06 核 农 学 报 2014，28(2) ：0234 —0239 J ouraal of Nuclear Agricultural Sciences 双酚 A 残留酶联免疫分析方法的研究及应用 张丽莎 吕型超 陈涵倩 邓 杰 潘 熙萍 施曼玲 ( 杭州师范大学生命与环境科 学学院，浙江 杭州 310036) 摘 要：为了建立双酚 A 残留的酶联免疫分析方法，采用碳化二亚胺法将半抗原双酚酸( BHPVA ) 分别与 卵清蛋 白( OVA ) 和牛血清蛋白( BSA ) 偶联 ，制备免疫原 BHPVA—OVA 和包被原 BHPVA ．BSA 。基质辅助 激光解析 电离飞行时间质谱( MALDI—TOF．MS ) 检测表 明 BHPVA 与 BSA 和 OVA 的偶联 比分别为 12：1 和 16：1。BHPV A．OVA 免 疫 新 西兰 大 白兔获 得抗 双酚 A 的 多克 隆抗体 ，抗 体 E LISA 效 价 为 1：1 × 10 。 基 于该抗 体 建立双 酚 A 间接 竞 争 ELISA ( ciELISA ) 检 测 方法 ，其检 测的 线性 范 围为 0．02 ～100ng· mL ～， 线性 回归方 程 Y = 9．0326 In + 39．105 ，R = 0．9975 ，双 酚 A 的检 测 限 为 IC 。= 0．04ng·mL ～。采 用所 建 立 的 ciE LISA 方 法均检 测 出 8 种 塑料 食 品袋 中的双 酚 A 残 留，迁 移析 出量 分 别从 4．9 到 31mg· L ～， 批 内和批 间变异 系数 均 小于 12．48 ％ ，说 明本 试 验 所 建立 ciELISA 法 可有 效地 用 于塑料 食 品 袋 中的双 酚 A 迁移量的测定，不仅具有 高度的灵敏性 ，而且具有较好的稳定性 。 关键词 ：双酚 A ；多克 隆抗体 ；间接 竞 争酶联 免疫 吸 附法 ；塑料食 品 袋 DOI ：10．1 1869／j ．issn．100—8551．20 14．02．0234 双 酚 A ( Bisphenol A ，BPA ) 学 名 为 2 ，2 一二 ( 4 一 羟基苯基) 丙烷 ，主要用于合成聚碳酸酯( PC) 、环氧树 脂 、聚砜 树 脂 和不 饱 和 聚 酯树 脂 等 多 种 高 分 子材 料 ¨ ，也 可用 于生 产增 塑剂 、阻燃 剂 、抗 氧化 剂 等精 细 化 工产 品 ，被广 泛 用 于 生 产 各种 塑料 制 品 I4 。 双 酚 A 是近年从食品包装材料中新发 现的一种环境 激 素类物质 ，可通过食 品包装材料 、容器 、餐具 、饮水杯 、 供水管、奶瓶 以及塑料薄膜等渗入 食品而进入体 内。 双酚 A 具有拟雌激素的特点 ，大量的研究证明它对哺 乳动物的神经系统 、免疫系统 、生殖系统都会产生一系 列的不 良影响 。 ，对我们的健康存在着较大的风险。 据报 道 ，双 酚 A 已被 一些 国家 列入 优 先 污染 物 的 黑名 单 ，2008 年 l0 月 加拿 大 成 为 首 个 将 双 酚 A 视 为 有毒 物 质 的 国 家 。2009 年 至 今 ，针 对 儿 童 产 品 和 玩 具 ，美 国有 超过 20 个 州 已发 布 了不 同 的双 酚 A 禁令 。 日本《食品卫生法》规定 聚碳酸酯食 品容器 中的双酚 A 溶 出限量 为 2．5mg· kg 。2011 年 欧盟 颁布 2011／ 8／E U 指令 ，修改 2002／72／EC 中关于双酚 A 允许迁移 量不得高于 3r a g·kg 的条例 ，禁止所有含双酚 A 的奶 瓶 进入 欧盟 市场 ，规 定对 于其 他 与 食 品接 触 的材 料 和 物品，双酚 A 的迁移限值不得高于 0．6r a g·kg 。我 国国家标准 GB14942 —94( 食品容器 、包装材料用聚碳 酸酯 成型 品卫 生标 准》规定 了碳 酸酯 树 脂 和成 型 品 中 酚 的 溶 出 量 ( 蒸 馏 水 ，回 流 6h ) 不 大 于 0．05mg · kg 。国标 GB5749 —2006( 生活饮用水卫生标准》 明确 规定 了 饮 用 水 中双 酚 A 含 量 不 得 超 过 0．01mg· L 。从 2011 年 6 月 1 日起 ，我 国禁 止 生 产 聚碳 酸 酯婴幼儿奶瓶和其他含双酚 A 的婴幼儿奶瓶 。 目前双酚 A 残留的检测方法主要有 ：高效液相色 谱 法 、液相色 谱 一质谱 联用 法 ，气相 色谱 法 、气 相 色谱 一质谱 联 用法 、极 谱 法 、荧 光法 等 。 以上 这些检测 方法虽 精确 度 高 、选 择性 好 ，但 存 在样 品前 处 理复杂，对仪器设备依赖程度高 ，分析成本昂贵等缺点， 无法适应 生产实践上 双酚 A 高通量 和快速检测 的需 要 。 近年，以抗原抗体特异性反应为核心的酶联免疫吸附试 验 技 术 ( Enzyme-linked immunosorbert assay，ELISA ) 发 展迅 速 ，并 成为最 具 有竞 争力 的微量 检测 技 术 ，它 具 有 特异性强、灵敏度高 、便捷快速、适于现场监控、高通量 收稿 日期 ：2013-07-29 接受 日期：2013．12．19 基金项 目：浙江省科技厅公益技术研究农业项 目( 2011C22100) ，浙江省环境保护厅科研计划项 目(2013BO12) 作者简介 ：张丽莎，女，主要从事农药残 留免疫检测研究 。E-mail：zhang—lisa66@ 126．com 通讯作者 ：施 曼玲，女 ，教授 ，主要从事微生物学研究 。E ·mail：smiling1969@ 163．cor n

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