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环境与健康杂志 2013 年 6 月第 3O卷第 6 期 J Environ Health，June 2013，V o1． 30，No． 6 · 481 · ·基 础 与 应 用 · 双酚 A 对大鼠睾丸支持细胞 P3 8 丝裂原活化蛋白激酶 及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶一3 表达的影响 付 文娟 ，王 承敏 ，全超 ，杨 克敌 华中科技大学同济医学院公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学系 188宝金博页面版部环境与健康重点实验室，湖北 武汉 430030 摘要 ：目的 研究双酚 A (bisphenol A ，BPA ) 对离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞 P38 丝裂原活化蛋白激酶 (mitogenactivated protein kinase，MAPK )、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶一3(caspase一3)及相关凋亡基因表达的影响。方法 将 睾丸支持细胞分别暴露于0(溶剂对照) 、30、50、70 Ixmol／L 的BPA 。采用 MTT 法检测离体培养细胞活力，采用 RT—PCR 的 方法检测 p38 MAPK 、caspase一3、FasL 、肿瘤坏死因子 仅 (tumor necrosis factom，TNF —d )mRNA 的相对表达情况 ，采用 western—blotting 的方法检测细胞中P38 MAPK 、磷酸化 P38 MAPK 和 caspase一3 酶原蛋白的表达情况。结果 与溶剂对照 组相比，30 Ixmol／L BPA 组支持细胞 p38 MAPK mRNA 的相对表达量升高 ，而 50 I~mol／L BPA 组 p38 MAPK 的表达明显降 低(P<0．05) ；各浓度 BPA 染毒组 caspase一3 mRNA 的相对表达量均较高(P<0．05) ；仅 50 txmol／L BPA 组 TNF一 mRNA 的 相对表达量增加 (P<0．05) ；50、70 txmol／L BPA 组 FasL mRNA 的相对表达量增加 (P<0．05)；各剂量 BPA 染毒组总 P38 MAPK 蛋白的相对表达量无显著变化；50 和 70 txmol／L BPA 组磷酸化 P38 MAPK 蛋白的相对表达量均明显升高 (P< 0．05)；仅 70 p~mol／L BPA 组 caspase一3酶原蛋白的相对表达量下降(尸<0．05)。结论 BPA 可激活离体培养青春前期大鼠 睾丸支持细胞 p38 MAPK ，并诱发 caspase一3活化，导致细胞凋亡，这可能是通过 FasL 凋亡途径介导的。 关键词：双酚A ；支持细胞；细胞凋亡；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 中图分类号 ：R994．6 文献标志码 ：A 文章编号 ：1001—5914(2013)06—048l 一05 E ffects of bi sphnol A on ex pr ession of P3 8 M A P K a nd caspa se 3 in cul tur ed pri ma ry S er toli cel ls of r ats FU W en— uan，WANG Cheng —min，QUAN Chao．Y ANG Ke -di． MoE Key Laboratory of E nvironment and Health，Department of Occupa t ional and E nvironmenta l Hea l th，School of Public Hea l th，Tont~i Medica l College ，Huazhong University of Science and Technology ，W uha n．H ube 43 0 030 ， i na Corresponding author ：Y ANG K e—di ，E—maif：yangkd@mails．tj mu．edu．cn A bstract：O ective To study the effects of bisphenol A (BPA) o11 the expression of p38 MAPK ，caspase - 3 and apoptosis—related genes in the cultured Sertoli cells of rats．Methods Sertoli cells were collected from prepuberty rats(18—2 1 d1．The cuhured cells were treated with BPA at the doses of 0 ，30 ，5O，70 I ~mol／L respectively．MTr was used to detect cell vi abil ity．T he rati os of expressions of p38 M A PK ．caspase 一3 ．F asL and T NF 一0【mR NA were detected by R T —PCR ．A nd western—blotting was used to inv esti gate the protein l evels of total P38 MA PK ．phosphoryl ated P3 8 MA PK a nd pro—caspa se3 ． R esult s Compared with contro1．the expr essi on of p3 8 M A PK mR NA incre ased signifi cantl y after exposure for 24 h in group of 3 0 txmol／L BPA ．whereas it decrease d signif i cantl y i n group of 5 0 txmol／L BPA ；T he expressi on of caspa se一3 mR NA increased signi f i cantly in groups of all doses of BPA ；T he expr essi on level of T NF 一 mR NA i ncreased si gnif i cantl y onl y i n the group of 5 0 ~ mol／L B PA ：T he expression of F asL mR NA i ncreased si gnif i cantly only i n the groups of 50 ，7 0 ~ moY L BPA ；T he difference of the expressi on of total P38 MA PK protei n was not observe d among al 1 groups ：T he expression of phosphoryl ated P38 M A PK protein increased signif i cantly in the groups of 50 ，70 txmol／L BPA ；T he ex pression of pro —caspase 一3 protein decreased signi f i cantly in the group of 7 0 ~ mol／L BPA ．C onclusi on A ccordi ng to the r esul ts of this research ，BPA may i nduce P38 M A P K activ ation in S ertol i cell s an d activate F asL - related casp ase一3 w hi ch w ill resu lt i n cell ap optosi s． K ey wor ds ：B isphenol A ：Sertol i cel ls ；A poptosi s；Caspase 双 酚 A (bisphenol A ，BPA ) 主要用 于生 产聚碳 酸 酯、环氧树脂 、不饱和聚酯树脂等多种高分子材料 1。 有研究证明，受热时未聚合的 BPA 单体可溢出到食物 和水 中，也 可从牙齿封闭剂释放人唾液 中，人类 可通 过皮肤 、消化道等途径暴露于 BPA 。 目前 ，在人类 的 血、尿及乳液等生物样本中均可检测到 BPA E 。作为 一种环境 内分泌干扰物 ，BPA 具有类雌激素和抗雄激 基金项 目：国家 自然科学基金( 81172623) 作者简介：付文娟( 1987一) ，女，硕士研究生，从事环境毒理学研究。 通讯作者 ：杨克敌 ，E—mail ：yangkd@mails． tjmu．edu．cn 素的作用 ，可干扰啮齿类动物 的生殖发育功能[4_51。 目 前的研究主要针对 BPA 对 啮齿类动物生殖细胞 的作 用 ，而关于生精小管中唯一的体细胞——支持细胞 的 研究较少。虽然邓茂先等[5I研究表明，BPA 可导致雄性 啮齿类动物支持细胞空泡化 ，波形蛋 白消失 ；但是 BPA 对支持细胞的毒性作用机制还需进一步阐明。本 研究分离培养青春前期雄性大鼠睾丸支持细胞，观察 BPA 对与细胞增殖、分化、凋亡等密切相关的丝裂原 活化蛋 白激酶( mitogen activated protein kinase，MAPK ) 信号转导通路和凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶一