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2 0 1 5 V o1．34 No ．5 ·7 8 · Serial No．279 C hina B re w ing Researc h R ep ort 海藻酸钠与羧甲基纤维素钠 固定化高温碱性脂肪酶 虞凤慧 ，马韵升 ，刘圣鹏 ，徐泽平 。 ，李锋 ，刘结磊 (1．黄河三角洲京博化工研究院有限公司，山东 滨州 256500；2．山东京博控股股份有限公司，山东 滨州 256500； 3．滨州市环境微生物技术工程研究中心，山东 滨州 256500) 摘要 ：以海藻酸钠和羧甲基纤维素钠为复合载体，研究包埋法固定化毕赤酵母高温碱性脂肪酶 。通过单因素试验考察了不同载体 、 载体浓度、酶与载体配 比等 因子对脂肪酶固定化的影响，并采用正交试验对脂肪酶固定化条件进行了优化。结果表明，包埋法固定化 脂肪酶的最优条件为海藻酸钠含量1．0％、羧甲基纤维素钠含量0．25％、加酶量50 W(g载体)、CaC1：浓度0．4 mol／L ，固定化时间40 min。 在最优固定化条件下 ，固定化脂肪酶酶活收率达99．50％。 关键词：海藻酸钠 ；羧 甲基纤维素钠；脂肪酶；包埋法 ；固定化 中图分类号：Q8 14．2 文献标识码：A 文章编号：0254—5071(2015) 05—0078—04 doi：l 0．1 1882／j．issn．0254- 5071．2015．05．018 Imm obi lization of hi gh -temperatu re alkal in e lipase by sodium algin ate and c arboxym ethy l cellulose sodium Y U F eng hui ，M A Y unsheng ，L 1U Shengpeng ，X U Z eping 斗 ，L I F eng ，L IU Ji elei ( 1．Y ellow R iver D elta J in gbo R esearch Institute of Chemical Industry Co．，L td．，Binzhou 25650~ China； 2 ．S handong C ham br oad H ol di ng C o．，L td．，B inzhou 2 565 0 0, Chi na； 3．BinzhouEnvironmental Microbial Technology andEngineering R esearch Center, B inzhou25650~ Chin a) A b stract ．S odi um algin ate and carb oxym ethyl cellu lo se sod iu m w ere u sed as carri ers to research th e imm ob il ization of h igh —tem perature al kalin e l i— p ase fr om P ichi a p asto ri s．E f ects of d if erent carr iers，carri er con centration ，enzym e—to —carrier rati o on th e lip ase i mm obi lization w er e inv estigated by singl e factor ex perim ents，an d th e optimu m cond itio ns for imm ob ili zati on w ere determ ined by orth ogon al experim ent．T h e resul ts in dicated th at th e op tim ized con ditions fo r im m obil ized lip ase w ere sod ium alg inate 1．O％ ，carbo xym ethyl cellul ose so dium 0．25％ ，enzym e addition 50 U ／g，C aC12 con cen tr atio n 0 ．4 m ol／L ，an d i mm obi lizat ion tim e 40 m in．A ccord in g to th e optimum co ndi tion s，th e recov ery of th e im mob il ized lip ase activity reac hed 99 ．50 ％． K ey w ords：sod ium alginat e；carb oxym ethyl cel lulo se sod ium ；lip ase；im bedd ing meth od；imm ob ilizat io n 脂 肪酶 (1ipase，EC3．1．1．3) 全称 即三酰基 甘油 酰基水 解 酶，能在油．水界面上 催化酯 水解或醇解 、酯合 成、酯交 换[1_3]、多肽 等有机合成 反应[41，是 目前 被重点研 究的酶催化 剂 。随着研究 的逐渐深入 ，脂肪酶的生产技术 日趋成熟， 应 用越来越广 ，但游离 脂肪酶存在 易失活 、不 易回收 、难 重复使用等 问题_8]。因此，在有机反应体系 中，游 离脂肪酶 作为催化剂 难 以大规模应 用 。而 固定化 酶可解决 以上 问 题 ，与游离 酶相 比，固定化 酶在保 持其 高效专一及温 和的 酶催化反应特性的同时[9-Ⅻ，又呈现操作稳定性高、分离回 收容 易、可多次重 复使用 、操作连 续可控和工 艺简便等优 点?。 ，已成 为 目前研 究的热点之一 。近 年来 ，脂肪酶 固定 化 的研究 日益增加 ，并广泛应 用于食 品、洗涤 剂 、油脂和 制药等领域 ，在生物柴油制备方面也有重要应用f14]。 脂肪 酶 固定化 的方法 主要有包埋法 、吸 附法 、共价 结 合法和交联法等【 旧。包埋法具有不改变酶的结构、酶活收 率 高等优点 ，且包 埋常用载 体．海 藻酸钠 ，因其价 格低廉 、 具有 良好 的生物 相溶性而受到广泛重视 fl1】。目前 ，海藻酸 钠 单独作 为固定化载体 的研究较多 ，而海藻酸钠与羧 甲基 纤维素钠 共 同作为载 体的报道还 不多见 。本研究拟 采用 包埋法、以海藻酸钠和羧 甲基纤维素钠为复合载体进行脂 肪酶的固定化，通过单 因素及正交试验筛选最优的固定化 条件，期望 为固定化脂肪酶 的生产及应用提供参考 。 1 材料与方法 1．1 材料 与试剂 脂肪酶为毕赤酵母 产高温碱性脂肪酶 (70 kU／mL) ：实 验室 自制 ；其余试剂均为 国产分析纯 。 1．2 仪 器与设备 HH．1型数显恒温水浴锅 ：江苏省金坛市荣华仪器制造 收稿 日期：2015-04—06 基金项 目：山东省技术创 新项 目(201340516010) 作者简介 ：虞凤慧 (1982．) ，女 ，工程师 ，硕士，研究方 向为生物制药 。 通讯作者 ：徐泽平 (1963一) ，男，研究员，硕士，研究方 向为真菌资源利用。