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    188宝金博页面版: 盐酸四环素人工抗原的合成及鉴定 synthesis and identification of artificial antigen against tetracycline hydrochloride

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    内容提示： 中国畜牧兽医2010年第37卷第3期疾病防治- 171·盐酸四环素人工抗原的合成及鉴定张桂贤( 山东临沂师范学院生命科学学院，临沂276005)摘要：本试验旨在合成盐酸四环素人T抗原，为其单克隆抗体的制备奠定试验基础。将盐酸四环素( TCH ) 发生霍夫曼降解和重氮化反应生成重氮盐，再与蛋白质载体( BSA，O VA) 偶联生成免疫原和包被原，对偶联产物采用三氯化铁及紫外扫描法鉴定偶联成功，且免疫原和包被原的摩尔结合比分别约为3．4t1和4．2；1。用免疫原免疫BAI。B／c小鼠，用间接EI，ISA检测抗体效价，采用竞争ELISA法测IC。。，获得了效价为1。51200、IC。。为16．91 ng／m L的多克隆抗体，最终...

    文档格式：PDF | 页数：4 | 浏览次数：21 | 上传日期：2015-02-25 09:29:39 | 文档星级：
    中国畜牧兽医2010年第37卷第3期疾病防治- 171·盐酸四环素人工抗原的合成及鉴定张桂贤( 山东临沂师范学院生命科学学院，临沂276005)摘要：本试验旨在合成盐酸四环素人T抗原，为其单克隆抗体的制备奠定试验基础。将盐酸四环素( TCH ) 发生霍夫曼降解和重氮化反应生成重氮盐，再与蛋白质载体( BSA，O VA) 偶联生成免疫原和包被原，对偶联产物采用三氯化铁及紫外扫描法鉴定偶联成功，且免疫原和包被原的摩尔结合比分别约为3．4t1和4．2；1。用免疫原免疫BAI。B／c小鼠，用间接EI，ISA检测抗体效价，采用竞争ELISA法测IC。。，获得了效价为1。51200、IC。。为16．91 ng／m L的多克隆抗体，最终证明人工抗原制备成功。关键词：盐酸四环素；霍夫曼；重氮化；偶联；载体中图分类号：s859．79+6文献标识码：A文章编号：1671—7236( 2010) 03—0171—04四环素是以四并苯为母核的一类抗生素，具有抗菌谱广、毒性小和过敏反应少的特点，能抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、立克次体、病毒和原虫等( 尤启冬，2004) ，被广泛应用于畜牧业。但因该类药物的滥用已给动物性食品安全带来隐患，其在动物体内的残留对人类健康造成威胁。目前动物源性食品中，四环素类抗生素的检测普遍采用高效液相色谱法( 卢运战等，2006) ，此法操作复杂，所需试剂设备昂贵，因此不能推广，而免疫分析法具有简便、快速、准确等优点，因此建立四环素类抗生素在动物性食品中的免疫学检测法具有重要意义。四环素类抗生素具有两性，以其盐酸盐应用最广( 顾觉奋，2001) ，本试验以盐酸四环素( Tetracycl i ne hydro—chl ori de，TCH ) 作为研究对象，合成人工抗原并免疫BALB／c小鼠获得了多克隆抗体，为该类药物单克隆抗体的制备奠定试验基础。1材料与方法1．1试验材料1．1．1主要试剂盐酸四环素( TCH ) 购自北京鼎国生物公司；牛血清白蛋白( BSA) 为中国医药上海化学试剂公司产品；卵清蛋白( O VA) 购自Si gm a公司；H RP标记羊抗鼠IgG 购自北京鼎国生物公司；邻苯二胺( O PD) 购自上海白鹤化工厂；弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂购自北京鼎国生物公司。1．1．2主要溶液盐酸四环素溶液：准确称取盐酸四环素纯品15 m g，加入2 m L双蒸水，置于4℃冰收稿日期：2009—10-14作者简介：张桂贤( 1977一) ．女，新疆人，助教，硕士生，研究方向：动物疫病诊疗技术。箱保存。蛋白质载体溶液：分别准确称取BSA和0VA 20m g于1 m L双蒸水中，置4℃冰箱保存。三氯化铁试液：准确称取FeCl 。9 g，加双蒸水溶解至100 m L，置4℃冰箱保存，限2 d内使用。次溴酸钠试液：准确称取N aO H 20g，加双蒸水75m L溶解后，加入溴水5 m L，再加双蒸水至100 m L，现用现配。10％亚硝酸钠溶液：准确称取N aN O ：10g，加双蒸水溶解至100 m L，置4℃冰箱保存。包被缓冲液：准确称取N aC03 0．85 g，N aH C03 1．4双蒸水定容至500 m L，4℃冰箱保存。洗涤液：每g，100 m L PH7．4 PBS中加入50灶L的Tw een-20，摇匀即可，4℃冰箱保存。封闭液( 5％脱脂乳) ：准确称取5 g脱脂奶粉溶于100 m L pH7．4 PBS中，4℃冰箱保存。抗体稀释液：pH 7．4，0．01 m ol ／L的PBS，4℃冰箱保存。底物缓冲液( 枸橼酸一磷酸缓冲液) ：枸橼酸0．51 g，1．84 g N a2 H PO 。·定容于100 m L纯水中，4℃冰箱保存。显色液：准确称取O PD ( 邻苯二胺) 5 m g，溶于10 m L底物缓冲液中，再加入30％ddH ：O 15ⅡL，混匀即可，现配现用，终止液( 10％硫酸) ：量取浓硫酸10 m L，逐滴加入到90 m L双蒸水中，混匀，室温保存。主要器材U 一1800型紫外分光光度计为日本日立公司产品；SU N RISE型酶标仪为瑞士TE—CAN 公司产品；96孔可拆式酶标板购自浙江省临12H 201．1．3海市华威分析仪器有限公司；TG L-16G 型台式离心机为上海安亭科学仪器厂生产；J A2003A型电子天平为上海精天电子仪器有限公司产品；SZ-97自动三重纯水蒸馏器为上海亚荣生化仪器厂生产。1．1．4试验动物SPF级6～8周龄雌性BALB／c小鼠4只，由临沂师范学院实验中心提供。 万方数据

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