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中 国 人 兽 共 患 病 杂 志 Chi nese J ou~ ml of Z oonoses 2 003 ， 19 ( 3 ) 文章绾号 ： 1002 —2694( 2003) 03 —0086 —03 鼠疫菌质粒变异菌株外膜蛋 白谱的比较 * 祁芝珍金丽霞 于守鸿 祁美英 席亚芳 摘要： 目的 研究鼠疫菌外膜蛋 白与其所携带的质粒之间是否存在相关性。方法 28" (3 下杀死 鼠疫 菌后 。 采用 T zion一200 改进 法进行外膜蛋 白的提取。 以 4％积 层胶、 12％分 离胶行十二烷基硫 酸钠聚 丙烯酰 胺凝胶(∞ S —PA GE ) 电泳。根据低分子量标准蛋 白和被试菌株 的泳距 作相 关分析， 得 出各 6 条 蛋 白带 的相对分 子量。结 果 缺失 6MD 质粒且 PstI 的菌株， 在 32kD 和 39k 这 两条外膜蛋 白带处含量 较少， 其它质粒 变异株未发现特殊。结论用终浓度为 t0mg／ n~ 的氰霉素 6MD 质 粒缺失且 Pstl 的 鼠疫 菌株 外膜蛋 白谱与标准 141株相 比有明显不 同。 关键词 ： 鼠疫杆菌 ； 质粒 ； 外膜蛋 白 中图分类号 ： R378． 6 1文献标识码 ： A C om pa r ing s tudy on out er- m em br an e p rot ein p ed igr ees of the p lasm id- aber r anced Y er sina p estis of C h in a Q I Zhizhen， J IN L ix ia， Y U Shouhong， Q I M eiying， X I Y afang ( Qinghai I t for E ndemic D iseases Control ， X ining 811602) AB ACT ： T 0 study the r el ationshi p between outer-membrane prot eins and plasm／ ds of Y er sinia pestis ． M e~ ods B eing killed by l Omg／ ~chloromycetin O il 28"(3， the oute r -me m brane proteins of ． pestis was picked up by T rion-200 irnpmve d method． A nd SD A -PA G E d ectrophoresis was tak en． A naly~ d the relativity with th e distances of low er molecular weig ht standard protein and teste d straiil8。 obtaine d the comparative molecular weig ht of each protein ba n d． R esult T he strains w hich expressed PstI a n d lacke d 6M D plasmid。 the r e were a few c o nte n ts at the site of 32kD and 39kD bands ． T he others c o uldn ’ t be found spec~． C onch tion T he s口ains Whieh expressed PstI —and lack e d 6MD plaid is differe n t from th e standard 8tl" l~rl 141． K E Y W ． 0 R D S ： Y ersi nla pesti s ： plamn／ d； oute rmembrane prote i n s 质粒是独立于寄主细菌染色体复制的双链环状 DNA 分子 【 1 】 。近年来证明， 许多细菌特性是由质粒 携带的基因控制， 为了解 鼠疫菌的外膜蛋 白与其所 携带的质粒之间是 否存有 内在联系， 我们对不 同类 型质粒变异菌株与典型 鼠疫菌株外膜蛋 白谱进了比 较， 从而探索质粒与外膜蛋 白的关系。 1材料 1， 1 菌株我国鼠疫菌不同类型质粒变异株52株。 鼠疫强毒标准株 141， 均 由中国医学细菌保藏管理 中心 鼠疫菌专业实验室提供。 1， 2培养基赫氏琼脂、 肉汤、 毒力因子用培养基 均按常规制做， 由青海省地方病预防控制所培养基 室提供。 1． 3动物体重18- - 20g 健康小 白鼠， 由青海省动 物实验 中心提供 。 1． 4氯霉素西安京西制药厂， 批号 9908。 1． 5低分子量标准蛋 白兔磷酸化酶 (97 400) 、 牛 血清白蛋白(66 200) 、 兔肌动蛋白( 43 ooo) 、 牛碳酸 酐酶(31 ooo) 和胰蛋 白抑制剂 (20 100) 由上海丽珠 东风生物技术有限公司提供。 2方 法 2． 1 鼠疫菌外膜蛋 白提取分离方法 2． 1． 1 外膜蛋白的提取血平板 28℃培养 24h， 用 5ml PBS( pH7． 4) 制成均匀 菌悬液后， 加入终浓度为 10mg／ ml 的氯霉素充分摇 匀后置 28℃杀菌 24h， 生长试验无活菌后进行外膜 蛋 白的提取。①上述菌悬液 4 O 00r／ min、 4℃离心 15r a in， 收集菌体后用 PBS( pH7． 4) 洗涤 2 次 ； ② 将 菌体沉淀悬浮于 5ml II 液 ( 1O mrnol／ L Tris—H C1 、 5mmol／ L E DT A 、 Immol／ L B 一巯 基 乙醇、 pI- - 1 7． 6) 中， 经超声波细胞破碎仪 4． 5mA 的振幅破碎菌体 将被试菌株接种于赫 氏 * 青海 省科委专家基金资助项 目( 批准号： 6394082810001) 作者单位 ： 青 海 省 地方 病 预 防控 制 所 鼠疫 菌 专 业 实 验 室 ( 西 宁， 811602) 维普资讯 http://www.cqvip.com