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    188宝金博页面版: 测定鸡蛋蛋清中溶菌酶含量和活力标准方法的建立

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    内容提示： 201 0年 第46卷 第3期 AnimN Production · 掏燕 测定鸡蛋蛋清中溶菌酶含量和 活力标准方法的建立 侯启瑞， 王金玉 ， 谢凯舟 ， 戴国俊 ， 刘大林 ( 扬州大学动物科学与技术学院， 江苏扬州 225009) 摘鸡蛋蛋清中溶菌酶的含量和活力， 并对该方法的精密度、 准确度、 灵敏度和可重复性进行验证。结果表 明： 本方法 的精密度(R SD < 4％)、 准确度(R > 95％) 、 灵敏度(LOq 5 t xg／ mL ， LO D 0． 3 t xg／ mL ) 、 可重复性(R SD < 7％)均符合 方法评估实验要求， 所测鸡蛋蛋清溶茵酶含量为2． 93～ 4． 07 mg／ mL 、 活力为 13 832． 54～ 20 842． 74 U ／ mg。研究证明， 本方法能科学地估计...

    文档格式：PDF | 页数：4 | 浏览次数：152 | 上传日期：2010-09-28 17:12:31 | 文档星级：
    201 0年 第46卷 第3期 AnimN Production · 掏燕 测定鸡蛋蛋清中溶菌酶含量和 活力标准方法的建立 侯启瑞， 王金玉 ， 谢凯舟 ， 戴国俊 ， 刘大林 ( 扬州大学动物科学与技术学院， 江苏扬州 225009) 摘鸡蛋蛋清中溶菌酶的含量和活力， 并对该方法的精密度、 准确度、 灵敏度和可重复性进行验证。结果表 明： 本方法 的精密度(R SD < 4％)、 准确度(R > 95％) 、 灵敏度(LOq 5 t xg／ mL ， LO D 0． 3 t xg／ mL ) 、 可重复性(R SD < 7％)均符合 方法评估实验要求， 所测鸡蛋蛋清溶茵酶含量为2． 93～ 4． 07 mg／ mL 、 活力为 13 832． 54～ 20 842． 74 U ／ mg。研究证明， 本方法能科学地估计蛋清中的溶茵酶含量和活力， 是一种操作性强、 易于掌握、 结果可靠稳定的测定方法 ， 可以作 为测定鸡蛋蛋清中溶菌酶含量和活力的标准方法。 关键词 ： 蛋清； 溶菌酶； 溶壁微球菌； 酶活力 中图分类号：$831． 5； TS201． 2+ 5 文献标识码 ： B 要 ： 研究测定鸡蛋蛋清中溶茵酶含量和活力的标准方法。 在比浊法的基础上 ， 用紫外 一可见分光光度计测定 文章编号 ： 0258— 7033( 2010 )03— 0049— 04 溶菌酶 (1 ysozyme) 是一种能够水解细胞壁成 分 中 N一乙酰胞 壁酸与 N一乙酰葡萄糖胺之间的 一 1， 4 糖苷键的酶 ， 被广泛应用 于医药 、 食 品工业 、 生物 工程等方面 ，现从鸡蛋蛋清 中提取溶菌酶已达到工 业化生产水平【 ”。蛋清 中的溶菌酶含量越高 ， 酶 活 力越强 ， 越 有利于鸡蛋的保存 ， 因此测定鸡蛋 蛋清 中的溶菌酶对我 国溶菌酶生产 、禽蛋产品加工有 重要 的指导 作用 ，也为蛋品质评定 提供 了一个重 要参数。对溶菌酶的研究始于 20 世纪初，英国细菌 学家弗莱明[2 ]在 1922 年发现人的鼻涕、 唾液 、 眼泪有 强大的溶菌活性 ，并把其溶菌作用 的因子命名为溶 菌酶。此后研究者在人和动物的多种组织、 分泌液及 某些植物 、 微生物中也发现了溶菌酶的存在 ， 其中鸡 蛋蛋清的溶菌酶含量最高( 约含 0． 3％)l3 J。鸡蛋蛋清 已成为溶菌酶生产的主要原料 ，但是蛋清 中溶菌酶 的定量测定还没有一个较便捷的方法 ，传统的方法 是先提取蛋清 中的溶菌酶 【 4 】 ， 再测定提取液 中的蛋 白含量I 5J。由于不可能完全提取出蛋清中的溶菌酶 ， 这种方法计算出的蛋清溶菌酶含量往往比实际的数 值小。溶菌酶活力的测定方法很多 ， 目前 ， 国内常用 的有琼脂板扩散法 、 比色法 、 高效液相色谱法等 ， 而 收稿 ! El期 ： 2009— 03— 05； 修 回 日期 ： 2009— 08— 28 基金项 目： 国家标 准( 20079762一 T一 326) 作者简介 ： 侯启瑞( 1983一 ) ， 女 ， 河南开封人， 博士研究生 通讯作 者 国外多用 比浊法测定溶菌酶活力 。本研究在 比浊法 的基础上 ，针对鸡蛋蛋清中溶菌酶的含量和活力设 计 出一套系统的测定方法 ，为蛋清中的溶菌酶测定 提供一个标准方法 ， 规范我 国禽蛋中溶菌酶的测定。 l材 料 与方 法 1． 1 国 Sigma公 司 ； 溶壁微球菌( M． Lysodeikticus) 购 自中 国科学院微生物研究所 ， 菌种编号 1． 634； 其他试剂 均 为分 析纯 级 。 1． 2溶菌酶含量的测定 1． 2． 1标准 曲线的制备释成不 同梯度浓度 ( 0、 0． 2、 0． 4、 0． 8、 1 mg／ mL ) ， 以溶 菌酶工作液浓度为横 坐标 ， 281 Dm波长处 吸光度为 纵坐标绘制标准曲线 ， 并求出回归方程 。 1． 2． 1 蛋清溶液的测定乙酸调溶液至 pH 4． 5， 77℃水浴 10 min 后取 出 ， 静 置 1 h。离心取上清 ， 按照标准曲线绘制的操作测得 OD丝 值 ， 由标准曲线 回归方程计算蛋清溶液中溶菌 酶的含量 ( C ) ， 再乘 以稀释倍数 即为蛋清 中溶菌酶 的含 量 ( P) 。 1． 3溶菌酶活力的测定 1． 3． 1 底 物 的制 备 溶壁 微球 菌用 0． 2 mol／ L pH 6． 2 磷 酸盐 缓 冲液 悬浮 ，调 至 OD4 m在 1． 3 左右 ， 2～ 8℃放置。 材料鸡蛋蛋清溶菌酶( 20 000 U／ mg)购 自美 溶菌酶用 0． 9％氯化钠稀 蛋清用 0． 9％氯化钠稀释 ， 中固荔 教系 葱 《 》

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