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    188宝金博页面版: 用18S rRNA 序列探讨 8 种绿藻分子系统发育

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    内容提示： 第 24 卷第 1 期2 0 0 9 年 2 月·研究简报·用 18S rRNA 序列探讨 8 种绿藻分子系统发育张耀东, 沈颂东, 林阿朋, 张劲(苏州大学 医学部基础医学与生物科学学院,江苏 苏州 215123)大连 水 产 学 院 学 报JOURNAL OF DALIAN FISHERIES UNIVERSITYVol.24 No. 1Feb . 2 0 0 9文章编号:1000-9957(2009)01-0076-03摘要: 测定了宽礁膜 Monostroma latissimum、 浒苔 Enteromorpha prolifera、 孔石莼 Ulva pertusa 的18S rRNA 基因序列, 并与肠浒苔 E郾 intestinalis、 穿孔石莼 U郾 fenesrtata、 石莼 U郾 lactuca、 礁膜 M郾 nitidum 和格氏礁膜Monostrom...

    文档格式：PDF | 页数：3 | 浏览次数：30 | 上传日期：2015-07-10 15:44:15 | 文档星级：
    第 24 卷第 1 期2 0 0 9 年 2 月·研究简报·用 18S rRNA 序列探讨 8 种绿藻分子系统发育张耀东, 沈颂东, 林阿朋, 张劲(苏州大学 医学部基础医学与生物科学学院,江苏 苏州 215123)大连 水 产 学 院 学 报JOURNAL OF DALIAN FISHERIES UNIVERSITYVol.24 No. 1Feb . 2 0 0 9文章编号:1000-9957(2009)01-0076-03摘要: 测定了宽礁膜 Monostroma latissimum、 浒苔 Enteromorpha prolifera、 孔石莼 Ulva pertusa 的18S rRNA 基因序列, 并与肠浒苔 E郾 intestinalis、 穿孔石莼 U郾 fenesrtata、 石莼 U郾 lactuca、 礁膜 M郾 nitidum 和格氏礁膜Monostroma grevillei 5 种已知的大型海洋绿藻的同一基因序列合并进行比较, 分析了核苷酸序列差异和碱基替换特点, 并构建系统发生树。 结果表明: 浒苔与肠浒苔之间的 Kimura 双参数距离大于浒苔与石莼属 3 个物种之间的 Kimura 双参数距离; 用 UPGMA 法和 MP 法构建的系统树基本一致, 在构建的系统发生树中,浒苔与石莼属物种聚为一类, 表现出与石莼属物种更近的亲缘关系。关键词: 石莼属; 浒苔属; 礁膜属; 18S rRNA; 序列变异; 系统发育中图分类号: Q789摇 摇 摇 摇 文献标志码: A摇 摇 目前, 国外有学者用 18S rRNA 基因对有关绿藻系统学进行研究。 如 Hayden 等[1]对石莼科各个属编码叶绿体 RUBISCO 大亚基基因和 rDNA 小亚基基因的序列进行比较研究, 结果表明, 石莼属和浒苔属是相近的, 但不是单一起源的类群。 Blom鄄ster 等[2]对浒苔属的两个假定物种进行了序列对比研究, 建 议 将 同 一 起 源 的 Entermopha muscoides( Clemente et Rubio ) Cremades 和 Enteromorphaclathrata Roth (Greville) 归并成一个种。 但国内利用 18S rRNA 序列进行绿藻系统分析尚未见报道。大型海洋绿藻主要包括石莼目、 礁膜科的礁膜属 Monostroma 以及石莼科的石莼属 Ulva 和浒苔属Enteromorpha 3 个属[3], 其中许多物种都有较高的经济价值。 关于这 3 个属某些物种的分类一直存在不同观点。 如缘管浒苔是由 Linnaeus (1753) 发现并列入石莼属, 曾呈奎等许多学者认同将其列入石莼属[4]; 而瑞典分类学家 Agardh 根据缘管浒苔特征将其转入浒苔属, 也有大批学者支持这一观点。为此, 作者以 18S rRNA 基因为分子标记对石莼目的系统发育关系进行了研究, 以期为了解石莼属、浒苔属和礁膜属的系统进化关系提供分子依据。1摇材料与方法1郾 1摇 材料试验用孔石莼 Ulva pertusa、 浒苔 Enteromorphaprolifera 和宽礁膜 Monostroma latissimum 均于 2007年下半年采自山东青岛海区。 用蒸馏水仔细清洗新鲜藻体, 洗去泥沙和其他附着物, 然后晾干, -20益下保存, 随取随用。1郾 2摇 DNA 的提取将冷冻样品进行恢复培养和消毒处理, 再切成小的碎片, 放入 2 mol/ L 的葡萄糖和体积分数为1%的海螺酶液中, 在 25 益下酶解 3 h。 将解离的绿藻细胞用筛绢过滤, 用离心机沉淀分离细胞和原生质体。 用去离子水反复洗涤离心, 以彻底去除酶液。 将沉淀转移至 1郾 5 mL 离心管中, 加入 500 mL提取缓冲液 (30 g/ L CTAB, 100 mmol/ L Tris HCl,20 mmol/ L EDTA (pH 8郾 0), 2 g/ L 巯基乙醇, 10g/ L PVP, 1郾 4 mmol/ L NaCl), 于 60 益 下温育 30min, 再加入 1/3 体积的 5 mol/ L KAC, 充分混匀,加入等体积的氯仿 颐异戊醇 (24 颐1), 轻缓摇匀后,以 8 000 r/ min 离心 10 min。 将上清液移至新管,并加入 2/3 体积的异丙醇, 将 DNA 沉降下来, 用体积分数为 70% 乙醇洗涤 2 次后, 在无菌风下吹干, 溶于去离子水中备用。1郾 3摇 扩增前样品 DNA 完整性、 浓度和纯度的测定扩增前将总 DNA 抽提物用 10 g/ L 琼脂胶电泳(电压为 5 V/ cm , 电泳时间约 1 h) , 测定样品DNA 的完整性, 确定其相对分子质量。 将完整的摇 收稿日期: 2008-03-10摇 基金项目: 江苏省海洋生物技术重点建设实验室开放课题 (2005HS006)摇 作者简介: 张耀东 (1981-), 男, 硕士研究生。 摇 通信作者: 沈颂东 (1968-), 男, 教授。 E-mail: shensongdong@ suda郾 edu郾 cn

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