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742017年第4期中国食品添加剂China Food Additives 试验研究嗜热果糖苷酶的基因克隆及表达优化毕云枫，徐琳琳，姜珊，李娜，王溪竹，王玉华*（吉林农业大学食品科学与工程学院，长春 130118）摘 要：从嗜热菌 Thermotoga neapolitana DSM4359 得到嗜热果糖苷酶基因片段，以 pET-28a（+）为表达载体，在 Escherichia. coil BL21（DE3）中高效表达。由 SDS-PAGE 检测可得构建后嗜热果糖苷酶的分子量约为 60 KDa。通过单因素试验和响应面法对该嗜热果糖苷酶的产酶培养基进行优化选择，最终确定最佳产酶培养基为：蔗糖 10.11 g/L，硝酸铵 12.30 g/L，安琪酵母浸粉 FM905 8.24 g/L，MgSO 4 · 7H 2 O 5.61 mmol/L，NaCl 10 g/L。相比优化前，经优化后的培养基所产嗜热果糖苷酶酶活提高了近 2.1 倍。达到了提高嗜热果糖苷酶表达量的目的。关键词：嗜热果糖苷酶；基因克。槐泶铮挥呕型挤掷嗪：TS201.3 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2017）04-0074-09Cloning and optimization expression for thermophilic fructosidase BI Yun-feng，XU Lin-lin，JIANG Shan，LI Na，WANG Xi-zhu，WANG Yu-hua *（College of Food Science and Engineering，Jilin Agriculture University，Changchun 130118 ）Abstract：Genes of fructosidase was extracted from thermophilic Thermotoga neapolitana DSM4359，pET-28a（+）expression vector was used and overexpressed in Escherichia. coil BL21（DE3）. SDS-PAGE shows the molecular weight of the thermophilic fructosidase is 60 KDa. In order to increase thermophilic fructosidase expression volume，the expression conditions were optimized. By single factor tests and response surface method the best medium was：sucrose 10.11 g/L，ammonium nitrate 12.30 g/L，angel yeast extract FM905 8.24 g/L，MgSO 4 · 7H 2 O 5.61 mmol/L，NaCl 10 g/L. The optimized medium can increase thermophilic fructosidase activity to 2.1 times. The results meet the purpose of improving the expression of thermophilic fructosidase.Key words：thermophilic fructosidase；cloning；expression；optimized 收稿日期：2016-09-29基金项目： 吉林省188宝金博页面版厅“十二五”科学技术研究项目（吉教科合字［2015］第 207 号）；吉林省科技厅科技创新人才培育计划项目（项目编号：20140519011JH）。作者简介：毕云枫（1976-），男，博士，副教授，研究方向：食品酶学。E-mail：yunfeng5609@sohu.com。*通信作者：王玉华（1972-），女，博士，教授，研究方向：食品微生物学及功能性食品研究。E-mail：43814037@qq.com。果 糖 苷 酶（EC.3.2.1.26）， 又 称 β- 果 糖 苷酶，β-D- 呋喃果糖苷酶，蔗糖酶，转化酶，英文 名 称 β-D-fructofuranoside fructohydrolase，β-fructofuranosidase，β-fructosidase。 来 源 主 要以微生物为主，如酵母菌、大肠杆菌、霉菌等。果糖苷酶属胞外酶，水解酶，能够特异性催化水解果聚糖非还原性末端 β-（1 → 2）糖苷键和β-（2 → 6）糖苷键，也可水解蔗糖生成一分子的 α-D- 葡萄糖和一分子的 β-D- 果糖，不仅如此，果糖苷酶还具有转化糖基的作用，可将蔗糖结构中的 β-D- 呋喃果糖基催化转移到其他糖类、醇类、脂类、蛋白类等物质上，形成新的糖网络出版时间：2017-05-02 15:04:14网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.3542.TS.20170502.1504.006.html