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    188宝金博页面版: 小尾寒羊犬新孢子虫病血清学诊断

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    内容提示： 青海畜牧兽医杂志142006年第36卷第1期( 总第181期)小尾寒羊犬新孢子虫病血清学诊断+马利青(青海省畜牧兽医科学院，西宁，810016)摘要：应用酶联免疫吸附实验，对民和县引进小尾寒羊224份血清样品进行了犬新孢子虫病的检铡。结果，被检的224份血清中，检出犬新孢子虫抗体阳性血清16份，阳性率分别为7．14％。表明引入青海省的小尾寒羊中存在犬新孢子虫病。关键词：犬新孢子虫。幻噶庖呶绞匝椋，卜尾寒羊；抗体中围分类号：$852．72+文献标识码：A文章编号：10, 33-7950(2006)01-0014．02Serodiag删sof N eosporosi si nH an．Sheepw i th Sm al l -tai lM ALi —qi I培(Q嘞8i^cad伽吖ofAn...

    文档格式：PDF | 页数：2 | 浏览次数：435 | 上传日期：2014-12-28 01:31:44 | 文档星级：
    青海畜牧兽医杂志142006年第36卷第1期( 总第181期)小尾寒羊犬新孢子虫病血清学诊断+马利青(青海省畜牧兽医科学院，西宁，810016)摘要：应用酶联免疫吸附实验，对民和县引进小尾寒羊224份血清样品进行了犬新孢子虫病的检铡。结果，被检的224份血清中，检出犬新孢子虫抗体阳性血清16份，阳性率分别为7．14％。表明引入青海省的小尾寒羊中存在犬新孢子虫病。关键词：犬新孢子虫。幻噶庖呶绞匝椋，卜尾寒羊；抗体中围分类号：$852．72+文献标识码：A文章编号：10, 33-7950(2006)01-0014．02Serodiag删sof N eosporosi si nH an．Sheepw i th Sm al l -tai lM ALi —qi I培(Q嘞8i^cad伽吖ofAni m al andveteri l l ary Sci ence-)fi ni ng，810016)Abstract：224 sel qJ M lsam pl escol l ected fj omH an· sheepw i th 8m 8]]-tai l i ntroduced i nto M i nhecounty"re used to detecttheanti body ofnoD sporosi s by em ym edl nkedhnm unosorbentassay．Theresul ts show edthatanti body agai nstneosporosi si nH an-sheepw i th sm al l -tai l i ntw dueedi ntoQiTl鲥province．Key w ords：N eespom si s；Enzym e-l i nkedi rm m nl osorbent16 8evdrl lsam pl esw ereposi ti veforN eosporacani m Lm i n 224sam pl esexam i ned．the posi ti ve rate w as 7．14percent· suggesti ng．thereW aS theassay；H art-sheepw i thsm al l -tai l ；Anti body犬新孢子虫( N eospora con洳m )是原生动物顶器门一种原生动物性寄生虫，它最早是在一条发生瘫痪的狗上被确诊的? 。直到1988年，人们一直错误地把N ．cani num 当作Toxopl asm a gondi i ，因为这两个寄生虫在形态学上是极为相似的“ 1。认为N ．cani num 是引起胎儿流产和新生犊牛死亡以及狗的神经肌肉麻痹症的主要原因” ‘ 4J 。就现在掌握的资料，狗是唯一的能够排泄N ．cani aum 卵囊的终末宿主” ’ 。N ．cani num 首次在羊上确诊是在英国o】。这是在历史上首次报道，小反刍动物疑似N ．ctut／nv37t感染。羔羊出生时表现虚弱，部分共济失调，一周后死亡，在腹侧角有单侧的灰色变形。这种病例在以前也报道过，它主要归咎于弓形虫体引起的自然残疾” ’ 。在多种动物(包括人)上仅仅观察到了组织包囊，但没有观察到速殖子。随后，在El 本报道了羊发生新孢子虫病l 临J 未报道” 10。在本研究中进行了ELISA诊断方法的建立，并且用纯化的G ST-N cSAG h作为ELISA诊断抗原，进行了小尾寒羊N ．ct2／如zm 抗体的检测。1材料和方法GST-N cSAGIt在以前的研究中进行了克隆、表达和纯化” ’ ；阴、阳性标准血清，均为日本国家原虫中心玄学南博士惠赠，青海省畜牧兽医科学院兽医所生物技术研究室保存。1．2被检血清的采集和处理1．2．1224份被检血清均采自青海省民和县种畜场的羊群，其中：9l 份为2005年引进的小尾寒羊；133份为当地繁殖的小尾寒羊。1．2．2采血时均空腹、颈静脉采集，采集后摆成斜面，置4℃冰箱5h后，放在室温待血清析出后收集血清，1．1· 基金项目：本项目为中国外国专家局引智项目。项目序号：20856300018裘是台霸；i翟馨：蛩产间主要原生动物疾病流行情况的调查及对策。 万方数据一20qc冷冻保存待检。1．3其他试剂和耗材均购自国内和Si gm a公司供应商。1．4ELISA1．4．1抗原的包被抗原GST-N cSAGIt和GST，按5耐甜剂量加到包被液中( 50 n' am l ／L ead) 0nal e—bi carbonatebuffer，pH 9．6) ，混匀后加到96孔平底微量板( N unc，Den—吐) 的孔里，每孔50m ，并且在4℃条件下培养过夜。1．4．2封阻用含有0．05％吐温．20的P陷冲洗液冲洗一次后，残留的粘附物的部位用含3％脱脂乳的封阻液进行封阻，每孔l oota，并在” ℃条件下培养l h。1．4．3加样随后微量板用冲洗液冲洗一次，在封阻液中按1：100滴度稀释被检血清后，每个样品平行加到微量板的两个孔中，每孔跏l，并在37‘ c条件下培养1ho1．4．43n- 抗用冲洗液冲洗6次后，在封阻液中按1：4000滴度稀释辣根过氧化物酶结合了兔抗羊的I鼬抗体(Bethyl Laboratori es，U SA) ，稀释后每孔加50m ，并在37℃条件下培养1h。1．4．5底物用冲洗液冲洗6次后．每孔加100m 底物，每毫升底物中含有0．3H19的2，2' -azi no—bl s(3．ethyl benz-thi a0．2tool 的磷酸缓冲液和0．003％H2Q ，每孔加1009l 。1．4．6读数用W el l scanM K3酶标读数仪(脚tem sDrago．，Fi 出11d)在光吸收值0D4。Ym , l 条件下测定光吸收值。1．4．7判定标准ELISA滴度表示成最大稀释度的倒数，且展示EL／SA值是等于或大于0．1．在抗原csr_N cSAGh孔和c, sri L之间的光密度吸收值是不同的，两孔rel i ne-6．sul foni c aci d) ，0．1m ol 柠檬酸，

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