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中国皮肤性病学杂志２０ ０ ７ 年８ 月 第２１卷第８ 期Ｃ ｈ ｉｎＪＤ ｅ ｒ ｍＶ ｅｎ ｅｒ ｅｏ ｌ， Ａ ｕ ｇ ． ２０ ０ ７ ， Ｖ ０ １． ２１， Ｎ ｏ ． ８甲真菌病分离菌株体外角蛋白酶活性的测定李筱芳， 刘维达， 陈辉， 陈先进， 沈永年， 吕桂霞［ 摘要］目的对甲真菌病常见分离菌株进行体外降解角蛋白能力的比较， 以初步探讨该病的， 临床表现与角蛋白酶的相关性。 方法角蛋白酶的诱导培养基为舍甲培养基， 测定的底物为ｋ ｅｒａ ｔｉｎ － ａ ｚｕ ｒｅ， 以Ａ ５９ ５ｎ ｍ 值衡量角蛋白酶的活性。 结果①皮肤癣菌与非皮肤癣菌的角蛋白酶活性无显著性差异（ Ｐ ＝ ０ ． １２）； ②红色毛癣菌角蛋白酶活性显著高于其他受试真菌（ Ｐ ＜ ０ ． ０ ０ １）； ③不同Ｓ Ｃ ＩＯ 积分段的甲真菌病红色毛癣菌临床分离株角蛋白酶活性的差异无显著性（ Ｐ ＝０ ． ６８ ）。 结论甲真菌病的发病与角蛋白酶有一定相关性， 但仅用角蛋白酶尚不能完全解释该病的发病机制。［ 关键词］甲真菌。 角蛋白酶［ 中图分类号］Ｒ７ ５６ ． ４［ 文献标识码］Ａ［ 文章编号］１０ ０ １—７ ０ ８ ９ （ ２０ ０ ７ ）０ ８ —０ ４ ５５—０ ３Ｄ ｅ ｔｅ ｒ ｍ ｉｎ ａ ｔｉｏ ｎ ｏ ｆ Ｋ ｅ ｒ ａ ｔｉｎＤ ｅ ｇ ｒ ａ ｄ ａ ｔ ｉｏ ｎｂ ｙＦ ｕ ｎ ｇ ｉＩｓｏ ｌａ ｔｅ ｄＦ ｒ ｏ ｍＯ ｎ ｙ ｃ ｈ ｏ ｍ ｙ ｃ ｏ ｓｉｓＬ ＩＸ ｉａ ｏ —ｆ ａ ｎ ｇ ， Ｌ ＩＵＷ ｅｉ—ｄ ａ ， Ｃ Ｈ Ｅ ＮＨ ｕ ｉ， ｅ ｔａ ｌ（ Ｄ ｅｐ ａ ｒｔｍ ｅｎ ｔｏ ｆ Ｍ ｙ ｃｏ ｌｏ ｇ ｙ ， Ｉｎ ｓｔｉｔｕ ｔｅｏ ｆ Ｄ ｅｒｍ ａ ｔｏ ｌｏ ｇ ｙ ， Ｃ ｈ ｉｎ ｅｓｅ Ａ ｃ ａ ｄ ｅ ｍ ｙｏ ｆ Ｍ ｅｄ ｉｃａ ｌ Ｓ ｃ ｉｅ ｎ ｃ ｅ ｓ＆ Ｐ ｅ ｋ ｉｎ ｇＵ ｎ ｉｏ ｎ Ｍ ｅ ｄ ｉｃａ ｌ Ｃ ｏ ｌｌｅｇ ｅ， Ｎ ａ ｎ ｊｉｎ ｇ２１００４ ２， Ｃ ｈ ｉｎ ａ ）Ａ ｂ ｓｔｒ ａ ｃｔ： ０ ｂ ｊｅｃｔｉｖ ｅＴ ｏ ｄ ｅ ｔｅ ｒ ｍ ｉｎ ｅｔｈ ｅｋ ｅ ｒ ａ ｔｉｎ ｏ ｌｙ ｔｉｃａ ｃｔｉｖ ｉｔｉｅｓ ｏ ｆｆ ｕ ｎ ｇ ａ ｌ ｓｐ ｅ ｃ ｉｅ ｓｉｓｏ ｌａ ｔｅｄ ｆ ｒ ｏ ｍｏ ｎ ｙ ｃｈ ｏ ｍ ｙ ｃｏ ｓｉｓ． Ｍ ｅｔｈ ｏ ｄ ｓＴ ｈ ｅｔｅ ｓｔｅ ｄ ｓｔｒ ａ ｉｎ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｉｎ ｏ ｃ ｕ ｌａ ｔｅ ｄ ｏ ｎ ｍ ｅ ｄ ｉｕ ｍ ｓｃ ｏ ｎ ｔａ ｉｎ ｉｎ ｇｎ ａ ｉｌ ｔｏｐ ｒ ｏ ｍ ｏ ｔｅｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔｉｏ ｎｏ ｆｋ ｅ ｒ ａ ｔｉｎ ａ ｓｅ ｓ． Ｋ ｅ ｒ ａ ｔｉｎ —ａ ｚ ｕ ｒ ｅ ｗ ａ ｓ ｕ ｓｅ ｄ ｔｏ ｖ ａ ｌｕ ｅｋ ｅ ｒ ａ ｔｉｎ ｏ ｌｙ ｔｉｃ ａ ｃ ｔｉｖ ｉｔｙ ． Ｋ ｅ ｒ ａ ｔｉｎ ｄ ｅ ｇ ｒ ａ ｄ ａ ｔｉｏ ｎｗ ａ ｓ ｍ ｅ ａ ｓｕ ｒ ｅ ｄ ｉｎ ａｓｐ ｅ ｃ ｔｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｔｏ ｍ ｅ ｔｅ ｒａ ｔ ５ ９ ５ ｎ ｍｕ ｓｉｎ ｇｕ ｎ ｉｎ ｏ ｃ ｕ ｌａ ｔｅ ｄ ｓｕ ｂｓｔｒａ ｔｅ ｂ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ ａ ｓ ａｎ ｅ ｇ ａ ｔｉｖ ｅｃ ｏ ｎ ｔｒ ０ １． Ａ ｎｉｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓｅ ｏ ｆ０ ． ０ １ ｉｎ ｔｈ ｅａ ｂ ｓｏ ｒ ｂ ａ ｎ ｃｅ ｗ ａ ｓ ｃ ｏ ｎ ｓｉｄ ｅ ｒ ｅ ｄｅ ｑ ｕ ａ ｌｔｏｏ ｎ ｅ ｋ ｅ ｒ ａ ｔｉｎ ａ ｓｅｕ ｎ ｉｔ． Ｒ ｅｓｕ ｌｔｓ（ 。 ｅｒｍ ａ ｔｏ ｐ ｈ ｙ ｔｅｓｄ ｉｄｎ ｏ ｔ ｓｈ ｏ ｗａｈ ｉｇ ｈ ｅ ｒ ｋ ｅ ｒ ａ ｔｉｎ ｏ ｌｙ ｔｉｃ ａ ｃｔｉｖ ｉｔｙｔｈ ａ ｎ ｔｈ ａ ｔ ｏ ｆｎ ｏ ｎ ｄ ｅｒ ｍ ａ ｔｏ ｐ ｈ ｙ ｔｅｓ（ Ｐ ＝ Ｏ ． １２）． ＠ Ｈ ｉｇ ｈ ｅｒｋ ｅ ｒ ａ ｔｉｎ ｏ ｌｙ ｔｉｃ ａ ｃｔｉｖ ｉｔｙｗ ａ ｓｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓｓｅ ｄ ｂ ｙＴ ｒ ｉｃ ｈ ｏ ｐ ｈ ｙ ｔｏ ｎｌ＇ｕ ｂ ｒ ｕ ｍｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｅ ｄｗ ｉｔｈ ｔｈ ａ ｔｏ ｆｏ ｔｈ ｅ ｒ ｓｐ ｅｃｉｅｓ（ Ｐ ＜ ０ ． ０ ０ １）． ③Ｔ ｈ ｅｒ ｅｗ ａ ｓｎ ｏ ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｌａ ｔｉｏ ｎ ｂ ｅ ｔｗ ｅ ｅ ｎｋ ｅ ｒ ａ ｔｉｎ ｏ ｌｙ ｔｉｃ ａ ｃｔｉｖ ｉｔｙａ ｎ ｄ ｔｈ ｅＳ ｃ ｏ ｒ ｉｎ ｇＣ ｌｉｎ ｉｃａ ｌ Ｉｎ ｄ ｅ ｘｆ ｏ ｒＯ ｎ ｙ ｃｈ ｏ ｍ ｙ ｃｏ ｓｉｓ（ Ｓ Ｃ ＩＯ ）（ Ｐ ＝ ０ ． ６ ８ ）． Ｃ ｏ ｎ ｃｌｕ ｓｉｏ ｎＫ ｅ ｒ ａ ｔｉｎ ａ ｓｅ ｓｐ ｌａ ｙａ ｎｉｍ ｐ ｏ ｒ ｔａ ｎ ｔｒ ｏ ｌｅ ｉｎｔｈ ｅ ｖｉｒ—ｕ ｌｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆｐ ａ ｔｈ ｏ ｇ ｅ ｎ ｓｏ ｆｏ ｎ ｙ ｃ ｈ ｏ ｍ ｙ ｃ ｏ ｓｉｓ ｅ ｓｐ ｅ ｃ ｉａ ｌｌｙｆ ｏ ｒＴｒ ｕ ｂ ｒ ｕ ｍ ， ａ ｎ ｄｏ ｔｈ ｅ ｒ ｆ ａ ｃ ｔｏ ｒ ｓ ａ ｒ ｅａ ｌｓｏ ｉｎ ｖ ｏ ｌｖ ｅｄ ．Ｋ ｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ：Ｏ ｎ ｙ ｃ ｈ ｏ ｍ ｙ ｃ ｏ ｓｉｓ； Ｋ ｅ ｒ ａ ｔｉｎ ａ ｓｅ ｓ与其他感染性疾病相同， 甲真菌病的发病是真菌毒力因子与宿主屏障结构和免疫系统相互作用的结果。 通常认为与角蛋白降解有关的酶是甲真菌病致病菌的重要毒力因子。 皮肤癣菌是目前公认的溶角质性真菌（ ｋ ｅｒａ ｔｉｎｏ ｌｙ ｔｉｃ ｆ ｕ ｎ ｇ ｉ）， 但临床发现不同的皮肤癣菌对甲的致病性不尽相同， 例如小孢子菌罕见甲板感染的报道， 即使是小孢子菌引起的头癣亦甚少累及甲； 红色毛癣菌是最常见的病原菌， 但同种内的不同菌株其致病能力也有所差异； 甲真菌病分离出的非皮肤癣菌究竟是溶角质性， 还是单纯的嗜角质性真菌（ ｋ ｅｒａ ｔｉｎ ｏ —ｐ ｈ ｉｌｉｃ ｆ ｕ ｎ ｇ ｉ）尚有争议。 本研究对甲真菌病的常见致病菌及污染菌进行体外降解角蛋白能力的比较， 以初步探讨上述复杂的临床表现与真菌毒力因子的相关性， 为该病发病机制及治疗新途径的研究提供参考。［ 作者单位］中国医学科学院、 中国协和医科大学皮肤病研究所真菌科， 江苏南京２１０ ０ ４ ２［ 作者简介］李筱芳（ １９ ７ ８ 一）， 女， 白族， 云南省昆明市人， 医学博士生， 主要研究方向为医学真菌学。［ 通讯作者］刘维达， Ｅ － ｍ ａ ｉｌ： ｌｉｕ ｍ ｙ ｃｏ ＠ ｈ ｏ ｔｍ ａ ｉｌ． ｃｏ ｎ ｌ１材料和方法１． １主要试剂及菌株角蛋白降解底物采用ｋ ｅｒａ ｔｉｎ —ａ ｚｕ ｒｅ（ Ｓ ｉｇ ｍ ａ ）。 实验所用参照菌株红色毛癣菌（ Ｔ ， 。 ）、须癣毛癣菌（ Ｔ ； 。 ）、 同心毛癣菌（ Ｔ 。 。 ）、 犬小孢子菌（ Ｍ 。 。 ）、 絮状表皮癣菌（ Ｅ 。 。 ）、 白念珠菌（ Ｃ 。 。 ）、 烟曲霉（ Ａ ， ）、 短帚霉（ Ｂ 。 。 ）、 茄病镰刀菌（ Ｂ Ｍ ）、 岛青霉（ Ｂ ” ）、枝顶孢（ 临床分离株）由中国微生物菌种保藏管理委员会医学真菌中心提供。 甲真菌病的临床分离菌株共１８ 株， 均为红色毛癣菌。 其中甲真菌病临床严重程度评分（ ｓｃｏ ｒｉｎ ｇｃｌｉｎ ｉｃａ ｌ ｉｎ ｄ ｅｘｆ ｏ ｒｏ ｎ ｙ ｃｈ ｏ ｍ ｙ ｃｏ ｓｉｓ， Ｓ Ｃ ＩＯ ）１—５分者４ 株， 远端侧缘甲下型（ ｄ ｉｓｔａ ｌｌａ ｔｅｒ ａ ｌｓｕ ｂ ｕ ｎ ｇ ａ ｌｏ ｎ ｙ ｃｈ ｏ ｍ ｙ ｃｏ ｓｉｓ， Ｄ Ｌ Ｓ Ｏ ）和浅表白色型（ ｓｕ ｐ ｅｒｆ ｉｃｉａ ｌｗ ｈ ｉｔｅｏ ｎ ｙ ｃｈ ｏ ｍ ｙ ｃｏ ｓｉｓ， Ｓ Ｗ Ｏ ）甲真菌病各２例； Ｓ Ｃ ＩＯ５～１５分者７ 株（ ２例为Ｄ Ｌ Ｓ Ｏ 与Ｓ Ｗ Ｏ 的混合型， 其余为Ｄ Ｌ Ｓ Ｏ型）； Ｓ Ｃ ＩＯ １５～３０ 分者７ 株， ２例为全甲毁损型（ ｔｏ ｔａ ｌｄ ｙ ｓｔｒｏ ｐ ｈ ｉｃ ｏ ｎ ｙ ｃｈ ｏ ｍ ｙ ｃｏ ｓｉｓ， Ｔ Ｄ Ｏ ）， ５例为Ｄ Ｌ Ｓ Ｏ 型。１． ２受试菌株的培养１． ２． １收集健康成年人的正常甲， 将其剪碎后， 用无菌生理盐水清洗２次， ７ ５％乙醇洗一次， 再用无菌蒸馏水洗２次后， 紫外线照射灭菌３０ｍ ｉｎ 备用。 将受试菌　　万方数据