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中国畜牧兽医２０ ０ ８ 年第３５卷第５期遗传繁育?４ ５?朗德鹅肌生成抑制素基因组织分布研究潘英树。 张永宏， 郭丽君， 邢沈阳， 高妍， 廉传江， 牛淑玲（ 吉林大学畜牧兽医学院， 长春１３０ ０ ６ ２）摘要： 采用Ｐ Ｃ Ｒ 和测序的方法检测肌生成抑制素基因在朗德鹅组织中的分布情况， 研究结果表明， 肌生成抑制素基因在大脑、 小脑、 心脏、 肝脏、 脾脏、 肺脏、 肾脏、 胰脏、 腹脂、 皮下脂肪、 骨骼肌中均有表达。 肌生成抑制素基因在组织中广泛分布说明了其功能的重要性。关键词： 朗德鹅； 肌生成抑制素； 组织分布中图分类号： Ｑ ３４ ３． １＋ ２文献标识码： Ａ文章编号： １６７ １—７ ２３６（ ２００８）０５—００４５—０２肌生成抑制素基因（ ｍ ｙ ｏ ｓｔａ ｔｉｎ ， Ｍ Ｓ Ｔ Ｎ ）又称生长分化因子一８ （ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔｈ ｄ ｉｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔｉａ ｔｉｏ ｎ ｆ ａ ｃｔｏ ｒ－ ８ ，Ｇ Ｄ Ｆ 一８ ）， 是１９ ９ ７ 年美国Ｊｏ ｈ ｎ Ｈ ｏ ｐ ｋ ｉｎ ｓ大学医学院的一个研究小组在研究转化生长因子－ ６ （ Ｔ Ｇ Ｆ —ｐ ）时发现的一种新的生长因子， 该因子具有Ｔ Ｇ Ｆ —ｐ 共有的结构特征， 由于Ｇ Ｄ Ｆ 一８ 对骨骼肌的生长具有负调控作用， 被命名为生长／分化因子一８ ， 属于转化生长因子一１３（ ｔｒａ ｎ ｓｆ ｏ ｒｍ ｉｎ ｇ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔｈｆ ａ ｃ ｔｏ ｒｂｅｔａ ， Ｔ Ｇ Ｆ —Ｂ ）超家族成员（ 刘铮铸等， ２０ ０ ６ ； 刘娣等， ２０ ０ ０ ）。 Ｍ Ｓ Ｔ Ｎ主要功能是负向调控肌细胞生长发育（ 胡兰等，２０ ０ ３）。 在哺乳动物中， Ｍ Ｓ Ｔ Ｎ 主要在骨骼肌中表达， 并且在生长期和成熟期的骨骼肌中均有表达。在猪胚胎期２１～３５ ｄ 可以检测到Ｍ Ｓ Ｔ Ｎｍ Ｒ Ｎ Ａ分子， 在４ ９ ｄ 该基因表达水平明显提高， 妊娠１０ ５ ｄ时开始降低， 出生后２周达到最低水平， 在生长期猪的骨骼肌、 心肌和乳腺中一直有表达。 Ｍ Ｓ Ｔ Ｎ 基因在牛的骨骼肌中表达水平较高， 在心肌细胞和蒲肯野氏纤维中有微量表达（ 孙少华等， ２０ ０ １）。 小鼠在交配后９ｄ 就能检测到Ｍ Ｓ Ｔ Ｎｍ Ｒ Ｎ Ａ 的存在， 在发育及成年小鼠的骨骼肌中广泛表达。 鸡的Ｍ Ｓ Ｔ Ｎ 基因除在骨骼肌中表达外， 在心肌、 肠、 脾脏、 脑中也有少量表达（ 胡兰等， ２０ ０ ４ ）。目前有关Ｍ Ｓ Ｔ Ｎ 在朗德鹅组织中分布的报道还比较少。 本试验通过Ｐ Ｃ Ｒ 和测序的方法检测Ｍ Ｓ Ｔ Ｎ 基因在朗德鹅组织中的分布情况， 为进一步收稿日期： ２００７ —１１—２２作者简介： 潘英树（ １９ ７ ７ ～）． 男． 四川人， 硕士， 研究方向： 动物遗传育种。通讯作者： 牛淑玲。基金项目： 吉林大学农学部青年科研基金。研究Ｍ Ｓ Ｔ Ｎ 的生理学功能提供依据。１材料与方法１． １材料１２０ 只朗德鹅的组织样品采集于吉林省德莱鹅业有限公司养殖。 采集的大脑、 小脑、 心脏、 肝脏、 脾脏、 肺脏、 肾脏、 胰脏、 腹脂、 皮下脂肪、 骨骼肌共计１１种， 组织样品迅速置于液氮中， 实验室一７ ０℃保存。１． ２基因组Ｄ Ｎ Ａ 的提取按照Ｔ ＩＡ Ｎ Ｇ Ｅ Ｎ 公司的Ａ ｎ ｉｍ ａ ｌＴ ｉｓｓｕ ｅ Ｇ ｅ ｎ ｏ ｍ ｉｃ Ｄ Ｎ ＡＭ ｉｎ ｉ—ｐ ｒｅｐ Ｋ ｉｔ试剂盒说明进行提取。１． ３引物设计根据Ｇ ｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ 肌生成抑制素序列设计引物， 上、 下游引物分别为： ５Ｌ Ｃ Ｔ Ａ Ａ Ａ Ｃ Ｇ Ｔ Ａ —Ｇ Ｔ Ａ Ａ Ａ Ａ Ｃ Ａ Ａ Ａ Ａ Ｇ Ｇ Ｃ Ａ Ｇ （ 、 － ３ ’ 和５’ 一Ａ Ａ Ｃ Ａ Ｔ Ｔ Ｔ —Ａ Ｔ Ｔ Ｔ Ａ Ｃ Ａ Ａ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ Ｔ Ｇ Ａ Ｔ Ｇ 一３’ ； 引物由Ｔ ａ ｋ ａ ｒ ａ公司合成。１． ４目的片段Ｐ Ｃ Ｒ 扩增的反应体系及条件５０ 弘ｌＰ Ｃ Ｒ 反应体系为： ５． ０ 弘ｌ １０ × ｂ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ ， １． ０ 肛ｌｄ Ｎ Ｔ Ｐ（ １０ ｒｅｔｏ ｏ ｌ／Ｌ ）， 上、 下游引物各２． ０Ｕ Ｉ（ １０ ｐ ｍ ｏ ｌ／ｕ １），基因组Ｄ Ｎ Ａ２． ０ 弘ｌ， Ｅ ｘＴ ａ ｑＥ０ ． ２５ｕ ｌ（ ５ Ｕ ／ｔ，１）， 灭菌去离子水３７ ． ７ ５弘１。 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增条件为： ９ ５℃预变性３ ｍ ｉｎ ； ９ ４ ℃变性４ ５ ｓ， ５７ ℃退火４ ５ Ｓ ， ７ ２℃延伸６ ０ｓ， ３５个循环； ７ ２℃延伸１０ ｍ ｉｎ ， ４ ℃保存。 Ｐ Ｃ Ｒ扩增产物用１． ０ ％琼脂糖凝胶电泳检测。１． ５重组质粒的Ｐ Ｃ Ｒ 鉴定及测序用Ｔ Ａ Ｋ Ａ Ｒ Ａ公司的小剂量快速质粒Ｄ Ｎ Ａ 提取试剂盒提取阳性质粒Ｄ Ｎ Ａ ； 以提取的质粒Ｄ Ｎ Ａ 为模板进行Ｐ Ｃ Ｒ扩增。 将Ｐ Ｃ Ｒ 鉴定正确的重组质粒送上海Ｓ ａ ｎ ｇ ｏ ｎ公司进行序列测定。２结果与分析２． １基因组Ｄ Ｎ Ａ 电泳结果提取的Ｄ Ｎ Ａ 通过琼脂糖凝胶电泳检测（ 图１）， 发现提取到了基因组Ｄ Ｎ Ａ 。２． ２目的片段的Ｐ Ｃ Ｒ 扩增结果从图２可见， 被　万方数据