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论著基础研究中国生化药物杂志2014年第6期总第34卷m i R一181a-5p在非小细胞肺癌中抗癌机制的研究王颖1，郭人花2( 1．新乡医学院第一附属医院肿瘤内科，河南新乡453100；2．南京医科大学附属第一医院肿瘤内科，江苏南京210029)[摘要]目的探索m i R一181a一5p的抑癌机制，探讨其是否可作为临床检测肺癌的标志物。方法采用CCK8法检测非小细胞cel ll ung cancer，N SCLC) 细胞株A549细胞增殖情况；流式细胞术检测细胞凋亡；细胞划痕和Tm nsw el l 实验检测m i R一181a-5p对A549细胞运动的影响；利用双荧光报告基因实验和RT—PCR实验探讨m i R一181a一5p与靶基因的相互作用。结果细胞肺癌细胞株A549中过表达m i R一181a一5p能明显抑制A549细胞株的增殖，促进细胞的早期凋亡( P<0．05) 。细胞划痕和Transw el l 实验结果表明m i R一181a一5p能明显抑制细胞的运动( P<0．05) ；m i R一181a-5p可通过3' U TR靶向下调Kras基因的表达，且在N SCLC中Kras表达与m i R一181a-5p表达有一定关系。结论m i R一181a-5p可显著抑制N SCLC A549细胞的生物进程，是潜在的治疗N SCLC的靶标。肺癌( non—sm al l在非小[ 关键词][ 中图分类号]m i R一18l a-5p；增殖；迁移；凋亡；非小细胞肺癌[ 文献标识码]R655A[ 文章编号]Anal ysi sof m i R- 181a- 5pfuncti on i n non- sm al lcel ll ungcancerW AN GYi n91。G U ORen—hua2( 1．Departnm ntof InternalM edi ci ne—O neol ogy，TheFi rst Affi l i ated H ospi talofXi nxi angM edi calU ni versi ty，H enan453100，Chi na；2．D epartnm nt of InternalM edi ci ne—O ncol ogy，TheFi rst Affi l i atedH ospi talofN anj i ngM edi calU ni versi ty，N anj i ng 210029，Chi na)[ Abstract] O bj ecti veThe ai m s ofm arker fordetecti ngN SCLC．M ethods A549 cel lthi sstudyw eretoexpl ore thebi ol ogi ctuncti ons of m i R．181a- 5Di n N SCLC andi nvesti gatew hether i t can be agrow th and apoptosi s after transfectedm i R．181a- 5pw ere exam i ned bv CCK8 and fl ow cvtoi netry．respecti vel y，them ovem entof A549 cel lw ere detected by Transw el lassayand w oundheal i ng assay．Interacti on of m i R．181a- 5D andi ts D ossi bl e targetgenesw ere detectedbydual l uci terasereporter assay．Resul tsM i R．181a．5pi nhi bi ted A549 cel lprol i terati on，prom otedcel l apoptosi si n vi tro．Transw el lassayand w oundheal i ng assay show ed thatm i R一181- 5p negati vel y regul atedcel lm i grati oni nvi tro．M i R．181a．5p dow n．regul atedKrasexD ressi on bvdi rectl y targeti ngi ts 37U TR．Kras w asi nversel y correl ated w i thm i R．181a．5p expressi oni n N SCLC．Concl usi onM i R．181a．5p m i ght provi de apotenti altreatm entapproachfor N SCLCpati ents．[Keyw ords]m i R-181a-5p；prol i terati on；m i grati on；apoptosi s；nonsm al l cel ll ung cancer在肿瘤的发生发展过程中，m i RN A通过调控基因表达影响细胞功能，起抑癌或促癌作用口。2] 。起抑癌作用的m i RN A主要通过调控功基因来抑制细胞的增殖、迁移或促进细胞的凋亡来抑制肿瘤的发生。3。J 。1材料与方法1．1实验材料非小细胞肺癌细胞株A549购自中科院生化细胞所细胞库。1．2实验仪器FLx8酶标仪( BIO —RAD) ，C1000“ Therm alCycl er PCR仪( BIO —RAD) ，TG L一18000一CR高速台式离心机( 上海安亭科学仪器制造有限公司) ，SW —CJ -2F超净工作台( 苏静安泰有限公司) ，SW —CJ -2F多功能脱色摇床( 上海智成分析仪器制造资助项目：2011年国家自然科学基金( 81172217)作者简介：王颖，女，硕士，主治医师，研究方向：恶性肿瘤的综合治疗E—m ai l ：qchl 821460017@ 163．conl 。有限公司) ，XW 一80A漩涡混合仪( 海门市其林贝尔仪器制造有限公司) ，J Y92—11超声波细胞粉碎机( 宁波新芝生物科技有限公司) ，PK—SZZ电热恒温水浴锅( 上海精宏实验设备有限公司) ，PL203电子分析天平( M ETTLER TO LED O 上海有限公司) ，CFX96qRT—PCR仪( BIO —RAD) ，LRH 一250F CO ，恒温培养箱( SH ELLAB) ，M LS一3708高压灭菌锅( SAN YO ) 。1．3实验方法1．3．1细胞培养：非小细胞肺癌细胞株A549培养在含有10％胎牛血清、青霉素103 IU ／L、链霉素100 m g／L的1640和DM EM 培养基中，培养基于37 oC，5％CO ：的细胞培养箱内培养。细胞融合到85％左右时，用0．25％胰酶消化，传代。9 J 。1．3．2细胞增殖实验：取对数生长期的细胞，以1个／m L的密度接种于96孔培养板中，每孔接种100 txL，培养待细胞贴壁后，再分别加入m i R一181a一5p、anti —m i R一181a一5p，每组设置6个复孔，同时设置不受处理因素的对照组( N C) ，也设置6个复X 104一6一万方数据