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2005；31（3） 蚕!业!科!学 CANYE KEXUE收稿日 期：2005 - 01 - 19资助项目： 国家 863 计划 （ 编号 2004AA2z1020） ； 188宝金博页面版部博士点基金（ 编号 20040625011 ） ； 重庆市自 然科学基金项目（ 编号2004-8571） 。作者简介： 段军 （1981 - ） ，男，四川，硕士研究生。E-maiI： duanjunhyg@ 163. com通讯作者： 夏庆友，教授，博士生导师。TeI：023- 68250099，E-maiI： xiagy@ swau. cg. cn与家蚕细胞凋亡相关的 Caspase 基因 Bmlce 的克隆和序列分析段 军 朱 虹 查幸福 赵 萍 夏庆友（ 西南农业大学蚕学与生物技术学院，农业部蚕桑学重点开放实验室，重庆 400716）摘 要 Drlce 基因在果蝇的细胞调亡代谢途径中起着重要作用。 采用 tbIastn 程序将 DPICE 在家蚕 EST 数据库中进行同源性检索，检索到的 EST 序列进行电子延伸， 根据延伸结果设计引 物， 用 RT-PCR 检测和克隆测序验证， 成功地克隆到家蚕第二种 Caspase 基因的全长 cDNA（ GenBank 登录号为： AY885228） 。 克隆的 cDNA 长 1 410 bp，ORF 长 825 bp，编码 275 个氨基酸残基，预测分子量为 31. 8 kD，等电点为 6. 15，基因名定为 Bmlce。 将 Bmlce 的 cD-NA 与家蚕基因组序列进行比对， 结果表明该基因具有 6 个外显子， 外显子/内 含子边界处均符合 GT-AG 规则。BmICE 在氨基酸水平上与果蝇 DPICE、线虫的 CED-3 的一致性分别为 34% 和 29% ，在第 169 个氨基酸残基处具有@ACRG 的五肽活性位点，该活性位点是 Caspase 家族的典型结构。 与果蝇 Caspase 家族聚类分析中，BmICE 与果蝇中具有短的 N 端结构域的 DPICE、DCP-1 及 DECAY 聚为一类，根据其结构分析和聚类分析，推测家蚕 Bmlce 基因可能参与细胞凋亡的执行作用。关键词 细胞凋亡； Caspase； 白细胞介素-1! 转换酶； 家蚕中图分类号 @785； @255； S881. 2 文献标识码 A 文章编号 0257 - 4799 （2005） 03 - 0261 - 07Cloning and Seguence Analysis of the Caspase Gene， ， Related to the Apoptosis in the SilkwormDUAN Jun ZHU Hong ZHA Xingfu ZHAO Ping XlA Oingyou＊（ The Key Sericultural Laboratory of Agricultural Ministry； College of Sericulture and Biotechnology，Southwest Agricultural University， Chongcing 400716，China）Abstract The Drlce plays an important role in the progress of apoptosis in Drosophila. The animo acid se-guence of Drosophila DrlCE was searched against the silkworm EST database with tBLASTn program. The ES-Ts with high score were clustered and assembled to a consensus seguence. By using the primers based onthe consensus seguence， we cloned the second Caspase gene of Bombyx mori， termed it as Bmlce（ Gene-Bank accession number： AY885228） . The length of the Bmlce cDNA was 1 410 base pairs in length and en-coded 275 amino acids， with the predicted molecular weight of 31. 8 kD and isoelectric point of 6. 15. An a-lignment of the cDNA seguence with the silkworm genome seguences revealed that there were 6 exons in Bm-lce and all of them conformed the GT-AG rule. The deduced amino acid seguence of the Bmlce shares 34% i-dentity with Drosophila DrlCE and 29% with C. elegans CED-3. There is an active site of pentapeptideOACRG （ Gln-Ala-Cys-Arg-Gly） in BmlCE， which was an important site for Caspase involved in catalysis activi-ty. A clustering analysis showed that the BmlCE wasclassified into a cluster of the short prodomain familywith DrlCE， DECAY， DCP-1 . These results of thestructure and cluster information for Bmlce indicatedthat this gene is likely to involve in the process of ap-optisis effect function.Key words Apoptosis；moriCaspase；lCE；Bombyx 1 62