?２∞?荷载角质细胞生长因子纳米微囊组织工程皮肤修复裸鼠皮肤缺损杨斌丘日升洪清琦冀晨阳【摘要】目的研究荷载角质细胞生长因子（ ｋ ｅｒ ａ ｔｉｎ ｏ ｃｙ ｔｅ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔｈｆ ａ ｃｔｏ ｒ， Ｋ Ｇ Ｆ ）纳米微囊的新型组织工程皮肤对裸鼠皮肤缺损的修复效果及特点。 方法采用超声乳化一溶剂挥发法及低温干燥法， 制备Ｋ Ｇ Ｆ 纳米微囊， 并构建Ｋ Ｇ Ｆ ． 脱细胞真皮基质（ ａ ｃｅｌｌｕ ｌａ ｒｄ ｅ ｒ ｍ ａ ｌ ｍ ａ ｔｒｉｘ ， Ａ Ｄ Ｍ ）； 分离培养和鉴定人表皮干细胞群和成纤维细胞； 接种表皮干细胞群于Ｋ Ｇ Ｆ ． Ａ Ｄ Ｍ 之上， 观察其生长情况； 将荷载Ｋ Ｇ Ｆ纳米微囊的组织工程皮肤移植于裸鼠皮肤缺损处， 以无Ｋ Ｇ Ｆ 纳米微囊的组织工程皮肤为空白组，以其自体皮肤移植作对照组。 于术后２，６ 周时分别观察修复区组织学愈合及皮片挛缩情况， 并应用抗人角蛋白１０ 及＆． 整合素免疫荧光检测修复区表皮和真皮层细胞来源、 分化及生长情况。 结果表皮干细胞群在Ｋ Ｇ Ｆ － Ａ Ｄ Ｍ 表面生长良好， 粘贴紧密， 可见到多角形的终末表皮细胞及小圆形的表皮干细胞， 活性良好， 有连接成片的趋势， 部分形成克隆团块。 以荷载Ｋ Ｇ Ｆ 纳米微囊组织工程皮肤修复裸鼠皮肤缺损， ２、 ６ 周时修复效果均优于空白组及对照组， 移植的组织工程皮肤边缘可与邻近皮肤完全融合， 但存在一定的挛缩。 镜下可见修复区组织工程皮肤表皮细胞分层良好， 与Ａ Ｄ Ｍ 紧密结合， 能产生正常角质层。 ６ 周时实验组修复区组织工程皮肤切片免疫荧光检测， 基底层仍存有少量Ｂ ． 整合素阳性的表皮干细胞或短暂扩充细胞。 结论所构建的荷载Ｋ Ｇ Ｆ 纳米微囊组织工程皮肤修复裸鼠皮肤缺损的效果， 优于无Ｋ Ｇ Ｆ 纳米微囊的普通组织工程皮肤及裸鼠自体全厚皮片移植修复效果。【关键词】 表皮干细胞角质细胞生长因子脱细胞真皮基质纳米微囊组织工程Ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉｍ ｅ ｎ ｔａ ｌ ｓｔｕ ｄ ｙｏ ｆｔｉｓｓｕ ｅ － ｅ ｎ ｇ ｉｎ ｅ ｅ ｒ ｅ ｄｓｋ ｉｎ ｌｏ ａ ｄ ｅ ｄ ｗ ｉｔｈｋ ｅ ｒ ａ ｔｉｎ ｏ ｃ ｙ ｔｅ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔｈｆ ａ ｃ ｔｏ ｒｎ ａ ｎ ｏ ｃ ａ ｐ ｓｕ ｌｅ ｓｆ ｏ ｒｓｕ ｍｄ ｅ ｆ ｅ ｃ ｔＹ Ａ Ｎ ＧＢ ｉｎ ， Ｑ ｌＵＲ ｉ－ ｓｈ ｅ ｎ ｇ 。 Ｈ Ｏ Ｎ ＧＱ ｉｎ ｇ － ｑ ｉ， Ｊｌ Ｃ ｈ ｅ ｎ —ｙ ａ ｎ ｇ ． Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆＰ ｌａ ｓｔｉｃＳ ｕ ｒ ｇ ｅ ｒ ｙ ． ｔｈ ｅＦ ｉｒ ｓｔ锄曦￡妇ｄ Ｈ ｏ ｓｐ ｉｔａ ｌ， 岛脚增ｚＪｌｏ Ⅱ Ｍ ｅｄ ｉｃａ ｌ Ｃ ｏｌｌｅｇｅ， ‰， 喀ｚｂｕ【Ａ ｈ 砌ｍ ｃｔ】Ｏ ｂ ｊｅｃｔｉｖ ｅ５１０ １２ ０ ， Ｃ ｈ ｉｎ ａＴ ｏｓｔｕ ｄ ｙｔｈ ｅ ｅｆ ｆ ｅｃｔ ｏ ｆｔｉｓｓｕ ｅ—ｅｎ ｇ ｉｎ ｅｅｒ ｅｄ ｓｋ ｉｎ ｌｏ ａ ｄ ｅ ｄ ｗ ｉｔｈｋ ｅｒ ａ ｔｉｎ ｏ ｃｙ ｔｅ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔｈｆ ａ ｃ ｔｏ ｒ （ Ｋ Ｇ Ｆ ）ｎ ａ ｎ ｏ ｃ ａ ｐ ｓｕ ｌｅ ｓ ｆ ｏ ｒ ｓｋ ｉｎ ｄ ｅｆ ｅｃｔ ｏ ｎａ ｔｈ ｙ ｍ ｉｃ ｍ ｉｃ ｅ ． Ｍ ｅ ｔｈ ｏ ｄ ｓＴ ｈ ｅａ ｃｅｌｌｕ ｌａ ｒｄ ｅ ｒ ｍ ａ ｌ ｍ ａ ｔｒ ｉｘ （ Ａ Ｄ Ｍ ）ｌｏ ａ ｄ ｅｄｗ ｉｔｈ Ｋ Ｇ Ｆ － Ａ Ｄ Ｍｗ ａ ｓ ｃ ｏ ｎ ｓｔｒ ｕ ｃ ｔｅ ｄｂ ｙｍ ｅ ａ ｎ ｓ ｏ ｆｐ ｈ ａ ｃｏ ｅｍ ｕ ｌｓｉｆ ｉｃａ ｔｉｏ ｎｓｏ ｌｖ ｅｎ ｔｅ、 ｒａ ｐ ｅｍ ｆ ｉｏ ｎａ ｎ ｄ ｌｏ ｗｔｅ ｍ ｐ ｅ ｒ ａ ｔｕ ｒ ｅ＆ ｙ ｉｎ ｇ ． Ｔ ｈ ｅｈ ｕ ｍ ａ ｎｅ ｐ ｉｄ ｅ ｒ ｍ ａ ｌｓｔｅ ｍｃｅｌｌｓ ａ ｎ ｄ ｆ ｉｂｍ ｂｌｓｓｔｓ ｗ ｅ ｒ ｅｃ ａ ｐ ｔｕ ｒ ｅ ｄａ ｎ ｄｉｄ ｅ ｎ ｔｉｆ ｉｅ ｄ ． ｔｈ ｅ ｎ ｃｕ ｌｔｉｖ ａ ｔｅｄ ｏ ｎ ｔｈ ｅｓｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｅｏ ｆｔｈ ｅ Ｋ Ｇ Ｆ － Ａ Ｄ Ｍ ． Ｔ ｈ ｅｃｅｌｌ伊Ｄ ｗ ｔｈｗ ａ ｓ ｏ ｂｓｅｒｖ ｅｄ ． Ｔ ｈ ｅｔｉｓｓｕ ｅ—ｅｎ ｇ ｉｎ ｅｅｒ ｅｄｓｋ ｉｎ ｗ ｉｔｈ ｏ ｕ ｔＫ Ｇ ＦＷ ｆ ｌ￥ ｕ ｓｅ ｄ 舾ｓｈ ａ ｍｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ． Ｔ ｈ ｅ ａ ｕ ｔ ｏ ｇ ｅ ｎ ｏ ｕ ｓｓｋ ｉｎｇ ｒａ ｆ ｔｗ ａ ｓ ｕ ｓｅ ｄａ ｓｃ ｏ ｎ ｔｒ ｏ ｌｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ． ２ａ ｎ ｄ６ ｗ ｅ ｅ ｋ ｓ ａ ｆ ｔｅｒ ｔｈ ｅ ｓｋ ｉｎＷ ａ ｇｔｒａ ｎ ｓｐ ｌａ ｎ ｔｅｄｔｏ ｔｈ ｅ ｂ ａ ｃ ｋ ｏ ｆａ ｔｈ ｙ ｍ ｉｃ ｍ ｉｃｅ， ｔｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔｒ ａ ｃ ｔｉｏ ｎ ａ ｎ ｄｈ ｉｓｔｏ ｌｏ ｇ ｉｃａ ｌ ｈ ｅ ａ ｌｉｎ ｇｏ ｆ ｔｈ ｅ ｔｒ ａ ｎ ｓｐ ｌａ ｎ ｔｅｄｓｋ ｉｎ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｏ ｂ ｓｅ ｒ ｖ ｅ ｄｒｅｓｐ ｅｃｔｉｖｅｌｙ ． Ｔ ｈ ｅｎｔｈ ｅ ｉｍ ｍ ｕ ｎ ｏ ｆ ｌｕ ｏ ｒ ｅ ｓｃ ｅ ｎ ｃ ｅ ｅ ｘ ａ ｍ ｉｎ ａ ｔｉｏ ｎ ｗ ｉｔｈ ａ ｎ ｔｉ—ｈ ｕ ｍ ａ ｎ Ｋ ｌＯ ?Ｆ Ｔ ｒ ｃ ａ ｎ ｄＡ － ｉｎ ｔｅｇ ｒｉｎ － Ｃ ｙ ３ ｗ ｅ ｒ ｅａ ｐ ｐ ｈ ｅ ｄｔｏ ｄ ｅｔｅｃｔ ｔｈ ｅｏ ｒ ｉｇ ｉｎ ， 乎ｕ ｗ Ｉｌｌａ ｎ ｄ ｄ ｉｆ ｆ ｅｒ ｅｎ ｔｉａ ｔｉｏ ｎｏ ｆｅ ｐ ｉｄ ｅ ｒ ｍ ａ ｌａ ｎ ｄｄ ｅ ｒ ｎ ｕ ｄ ｃｅｌｌｓ ｉｎｔｉｓｓｕ ｅ—ｅｎ ｇ ｉｎ ｅｅｒ ｅｄｓｋ ｉｎ ．Ｒ ｅ ｓｕ ｌｔｓＴ ｈ ｅｅ ｐ ｉｄ ｅ ｒ ｍ ａ ｌｓｔｅ ｍ ｃｅｌｌｓｇ ｒ ｅ ｗｗ ｅ ｌｌ ａ ｎ ｄａ ｔｔａ ｃ ｈ ｅ ｄｔｉｇ ｈ ｔｌｙｏ ｎ Ｋ Ｇ Ｆ － Ａ Ｄ Ｍ ． Ｔ ｈ ｅｒ ｅｗ ｅ ｒ ｅ ８ ｍ ａ ｌｌｒ ｏ ｕ ｎ ｄ ｓｔｅ ｍｃｅｌｌｓａ ｎ ｄｐ ｏ ｌｙ ｇ ｏ ｎ ａ ｌ ｔｅｒ ｍ ｉｎ ａ ｌｌｙ － ｄ ｉｆ ｆ ｅｒ ｅｎ ｔｉａ ｔｅｄ ｃ ｅ ｌｌｓ， ｗ ｈ ｉｃ ｈ ａ ｐ ｐ ｅａ ｒｅｄａＰ ａ ｒｔｌＹ ｃ ｌｏ ｎ ｉｎ ｇｇ ｒ ｏ ｗ ｔｈ ａ ｎ ｄａｔｅ ｎ ｄ ｅ ｎ ｃ ｙｏ ｆｍ ｅ ｒ ｇ ｉｎ ｇ ． Ｔ ｈ ｅ ｔｉｓｓｕ ｅ － ｅ ｎ ｇ ｉｎ ｅ ｅ ｎ ℃Ｍｓｋ ｉｎ ｗ ｉｔｈ Ｋ Ｇ Ｆｎ ａ ｎ ｏ ｃ ａ ｐ ｓｕ ｌｅ ｓ ｇ ａ ｉｎ ｅｄｂ ｅｔｔｅｒ ｒｅｓｕ ｌｔ ｉｎｒ ｅｐ ａ ｉｒ ｉｎ ｇｔｈ ｅ ｓｋ ｉｎ ｄ ｅｆ ｅｃｔｓ∞ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｅ ｄｗ ｉｔｌｌｔｈ ｅ ｂ ｈ ｍ ｋｇ ｒ ｏ ｕ ｐａ ｎ ｄｔｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔｒ ｏ ｌｇ ｒ ｏ ｕ ｐ２ ａ ｎ ｄ６ ｗ ｅ ｅ ｋ ｓａ ｆ ｔｅｒｔｒ ａ ｎ ｓｐ ｌａ ｎ ｔａ ｔｉｏ ｎ ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｔｉｖ ｅｓｋ ｉｎｃ ｅ ｌｌｓ ｃ ｏ ｕ ｌｄｃ ｏ ｎ ｎ ｅ ｃ ｔ ａ ｎ ｄｍ ｉｘｃｌｏ ｓｅｌｙｗ ｉｔｈ ｔｈ ｅａ ｔｈ ｙ ｍ ｉｃｍ ｏ ｕ ｓｅｓｋ ｉｎｃｅｌｌｓ ｏ ｎ ｔｈ ｅｂ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｏ ｆ ｓｋ ｉｎｄ ｅｆ ｅｃｔ． Ｍ ｅａ ｎ ｗ ｈ ｉｌｅ，Ｄ Ｏ Ｉ： １０ ． ３７ ６０ ／ｃｍ ａ ． ｊ． ｉｓｓｎ ． １０ ０ ９ － ４ ５９ ８ ． ２０ ０ ９ ． ０ ３． ０ １３基金项目： 国家自然科学基金项目（ ３０ ７ ７ ２０ ９ ９ ）； 广东省科技计划社会发展项目（ ２０ ０ ７ ８ ０ ３１０ ０ ２０ ０ ８ ）作者单位： ５１０ １２０ 广州医学院第一附属医院整形外科?实验论著?万方数据
