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    188宝金博页面版: 农杆菌介导香菇菌丝的遗传转化

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    内容提示： 农 杆菌 介导 香菇 菌 丝 的 遗传 转化喻 晶 晶 周 雁 边 银 丙`( 华中农业大学应 用 真菌 研究所 湖 北 武 汉4 3 007 )0摘要:本研 究 以 香菇 的 菌 丝体 为 转 化受 体,建立 了 稳 定高效 的农 杆 菌介 导的 遗 传转 化体系。首 先 用 香菇 内源的3’ 一 磷酸甘 油醛 脱 氢 酶基 因( g Pd ) 的 启动 子 替 换ca M V3 5 S 启 动 子 驱 动 潮霉 素基 因,对p c A M B I A 1 3 0 1进行 载体 重 组 改 造,将重组前 后 的 双 元 转 化 载 体 分别进行转化 效 率 的 比 较,结 果 表 明 引 入 g Pd 启动子 后 可以 将转化 效 率提高 一 倍 以 上。然 后,分...

    文档格式：PDF | 页数：1 | 浏览次数：524 | 上传日期：2016-04-03 07:58:55 | 文档星级：
    农 杆菌 介导 香菇 菌 丝 的 遗传 转化喻 晶 晶 周 雁 边 银 丙`( 华中农业大学应 用 真菌 研究所 湖 北 武 汉4 3 007 )0摘要:本研 究 以 香菇 的 菌 丝体 为 转 化受 体,建立 了 稳 定高效 的农 杆 菌介 导的 遗 传转 化体系。首 先 用 香菇 内源的3’ 一 磷酸甘 油醛 脱 氢 酶基 因( g Pd ) 的 启动 子 替 换ca M V3 5 S 启 动 子 驱 动 潮霉 素基 因,对p c A M B I A 1 3 0 1进行 载体 重 组 改 造,将重组前 后 的 双 元 转 化 载 体 分别进行转化 效 率 的 比 较,结 果 表 明 引 入 g Pd 启动子 后 可以 将转化 效 率提高 一 倍 以 上。然 后,分别 对 转化过程 中 农 杆 菌 的 侵 染 时 间、共 培 养温 度 和时 间 等3 个 方面进行 遗传转化条件 的 优化,结果 表 明,农 杆菌侵染 2 0m i n 后,在 2 5℃ 的 条件 下 共 培 养 3 d 后用潮霉 素进 行筛选,筛选到 转 化 子 的效 率 最 高 可 以 达 到30 %。P C R扩 增 验证 为 阳 性 的 转化 子 在 无 选择 压 力 的 固 体 培 养基上 连 续 继 代 培 养5 轮 后 仍能 检 测到潮 霉素基 因 的存 在,说 明 潮 霉 素 基 因 在 转 化 子 在 有 丝 分 裂 过 程 中 可 以 稳定 遗 传。本研究 建 立 的 遗传 转化 体 系 以 菌 丝 体 为受 体 材料,为 香菇功 能基 因 组研 究提 供 了 一 个快捷、稳 定,的 技 术平 台。关 键词:香 菇,农 杆 菌,遗传转 化资 助基 金:国家 自然 科 学基金项 目参 考文献:Bun rsC,Le a e hK,E lli o t tT,C h a l l e nM,F o s t e r q Ba i l e yA,20 0 6.E v a l u a t i o nof A g o r b aee tr i um一 m ei da e tdt ra n sf on 们 i a to no fA g ar i 哪b i s Poosu s i n g aa n rge of P r o mo t e r sli n ke dt oh y g ro n l y e i ne rs i s t a n c e.人 为 l e c u l arb i o e tc h n ol o 舒,32 ( 2 ) : 12 9一1 3 8.D i n g Y, L i an g S,L e i J,C h e n L,Ko h t eE,MaA,2 0 10.Ag or b ac e t r i u mI u oe f ae i en sme di a t e df us e de g 加一 如 hge n eex Pr e s s i o nu nd e r t hec ont ro l of 即 d P r o mo t e ri n p l e u o rf u so s et rau st.九 介 ` o r b i o l o g i ca le s re ac r h,1 66 ( 4 ) : 3 14一 322H i r a noT,S a toT ,a Ye g a s h i K ,E n e i H,20 05.E i f fe i e n tt r a n s f om ra t i o n of h te e dib l eb as i di o m y e e t e L e n r i nu sed o d esw ih ta v e co t ru s i n gag l ye e ra l d e h y d e一 3 ~P h os P h a t ed e h y d rog e n a ser Po m oe t ro th y g r0 1 ny e i n Br e s i s t a n e e.五 夕匕 l ee ua lra n dG e ne a rl G e ne t 止c s 五4G G,2 63 ( 6 ) : 10 47一1 0 52.1 32

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