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    188宝金博页面版: 石蜡切片中组织块过度硬化的补救措施

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    内容提示： ?２６ ?Ｃ Ｈ Ｉ Ｎ Ｅ Ｓ ＥＪ Ｏ Ｕ Ｒ Ｎ Ａ ＬＯ ＦＣ Ｌ Ｉ Ｎ Ｉ Ｃ Ａ ＬＡ Ｎ Ａ Ｔ Ｏ Ｍ ＹＶ Ｏ Ｌ ． ２ ５ Ｎ Ｏ ． ３ ２ ０ ０ ７?技术方法?石蜡切片中组织块过度硬化的补救措施余磊（ 广州南方医科大学临床解剖学研究所， 广州５１０ ５１５）石蜡切片是病理诊断、 教学和科研中最常规的一门技术。 切片质量的好坏将直接影响到病理诊断、 教学和科研的进行。 规范操作是保证石蜡切片、 Ｈ Ｅ 染色质量的前提， 在具体的实验过程， 经常遇到包埋组织块过硬的问题， 本文就常遇到的问题进行了分析和处理， 对组织块过硬的情况提供补救方法。１实验步骤１． １取材按常规方法取材。 在取材时刀、 剪等工具均应锋利， 够长， 切取时应避免挤、 压、 揉、 扯。 取材组织必须新鲜， ...

    文档格式：PDF | 页数：1 | 浏览次数：79 | 上传日期：2013-04-25 01:42:04 | 文档星级：
    ?２６ ?Ｃ Ｈ Ｉ Ｎ Ｅ Ｓ ＥＪ Ｏ Ｕ Ｒ Ｎ Ａ ＬＯ ＦＣ Ｌ Ｉ Ｎ Ｉ Ｃ Ａ ＬＡ Ｎ Ａ Ｔ Ｏ Ｍ ＹＶ Ｏ Ｌ ． ２ ５ Ｎ Ｏ ． ３ ２ ０ ０ ７?技术方法?石蜡切片中组织块过度硬化的补救措施余磊（ 广州南方医科大学临床解剖学研究所， 广州５１０ ５１５）石蜡切片是病理诊断、 教学和科研中最常规的一门技术。 切片质量的好坏将直接影响到病理诊断、 教学和科研的进行。 规范操作是保证石蜡切片、 Ｈ Ｅ 染色质量的前提， 在具体的实验过程， 经常遇到包埋组织块过硬的问题， 本文就常遇到的问题进行了分析和处理， 对组织块过硬的情况提供补救方法。１实验步骤１． １取材按常规方法取材。 在取材时刀、 剪等工具均应锋利， 够长， 切取时应避免挤、 压、 揉、 扯。 取材组织必须新鲜， 不取已自溶或变形坏死的组织。 大小以ｌ。 ５×１． ５× Ｏ ． ３ｃｍ 左右为宜。 夹取组织时应用无齿镊， 动作轻柔并且快速放入固定液中。１． ２固定不同的组织， 不同的染色方法应该选择适当的固定液。 固定液的量与组织块的比例约为２０ ： １的体积量。 一般采用１０ ％甲醛固定液， 按照我们的经验， 一般先固定３０ｒａ ｉｎ ， 再进行修块， 继续固定１２． ２４ｈ ， 蒸馏水略洗即可脱水。 如果不直接脱水则应把组织块块存放于７ ０％酒精中保存。１． ３梯度酒精脱水①７ ０ ％酒精ｌｈ ～２ｈ ； ②８ ０ ％酒精ｌｈ ～２ｈ ； 前面二步在酒精中可以过夜； ③９０％酒精Ｏ ． ５ｈ ，－ 一ｌｈ ； ④９５％酒精０． Ｓ ｈ ； ⑤１００％酒精Ｉ和Ⅱ 各Ｏ ． ５ｈ ＂ｌｈ 。 由低浓度酒精向高浓度酒精过度时， 组织块均应在滤纸中吸于水份才能进入下一浓度梯度的酒精。１． ４ 透明在常规透明的基础上， 我们先采用１： １的二甲苯／纯酒精预先透明３０ ｍ ｉｎ ； 再进入二甲苯Ｉ和ＩＩ， 以组织透明为准， 一般各１５ｍ ｉｎ － － 一２０ｍ ｉｎ 。１． ５浸蜡和包埋先将标本浸在石蜡Ｉ（ 熔点５０ ＂Ｃ ～５６℃）ｌｈ ； 然后转移到２０ ％蜂蜡＋ ８ ０ ％石蜡ＩＩ（ 熔点５６。 Ｃ ～６０ ＇Ｃ ）中包埋ｌ～２ｈ 。 组织过度硬化时， 可将组织块浸泡在香柏油中软化， 用二甲苯洗去香柏油后， 再重新浸蜡和包埋。或者将组织块重新人系列酒精（ 由高浓度到浓度的酒精）直至水化后， 再入ｌ％的冰醋酸软化， 水洗后再重新进行脱水包埋。 或者将组织从石蜡溶解出来， 经二甲苯多次脱蜡后入系列酒精（ 由高浓度到低浓度）水化， 再从低浓度到高浓度系列酒精重新脱水包埋。１． ６切片切片厚３Ｉｘ ｍ ＂１０ １ｘ ｍ ， 切片时组织过硬变脆， 切片时易碎， 是由于组织脱水， 透明， 浸蜡不当所致。 将整体蜡块浸入６０ ％酒精和甘油９ ： １混合液浸泡约１２． ２４ 小时， 再进行切片， 效果有所好转。１． ７ 常规脱蜡， Ｈ Ｅ 染色， 封片。２结果与讨论组织经过以上的脱水、 透明及浸蜡过程后， 利于切片， 尤其易切较薄切片。在脱水过程中经常出现的问题包括脱水不彻底和过度硬化现象， 组织经固定和水洗后含有大量的水份，水与二甲苯、 石蜡不能互溶。 组织脱水不彻底时二甲苯不能渗入， 组织也无法透明， 显现浑浊。 石蜡亦不能渗入组织， 包埋好的蜡块与空气接触后也会因水分蒸发而凹陷， 或组织与蜡分离。 因此， 组织脱水用的各级酒精， 应保证相应浓度， 以便组织脱水彻底。 我们的方法是组织每进入一个递度酒精时都必须用滤纸吸干组织块的水份进入下一个浓度梯度的酒精， 这样可以缩短脱水时间， 同时脱水效果也很好， 从而有效地解决了这个问题。而组织块在高浓度酒精中放置时间又不宜过长，否则组织过度硬化。 二甲苯和纯酒精混合液为过渡液，用酒精和二甲苯的混合液预先透明过渡， 避免组织块周围透明过度， 而组织内部透明不够， 从而引起组织块周围变脆的情况。 我们用加入少量的蜂蜡可以使包埋的蜡块既有硬度又有韧性， 有利于制片。总之， 改进后的技术在常规技术的基础上， 使组织易变脆的脱水、 透明和浸蜡时问较短， 相应缩短了制片时问， 使制备的蜡块易切不碎， 尤其易做较薄切片， 适合教学和科研。 但应注意， 在制作组织蜡块过程中， 如果脱水时间过短（ 低于本操作步骤的最短时间）， 也会造成脱水不净， 而影响以后的制片过程。

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