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第 27 卷第 2 期2 0 1 2 年 4 月大连 海 洋 大 学 学 报JOURNAL OF DALIAN OCEAN UNIVERSITYVol.27 No. 2Apr . 2 0 1 2文章编号:2095-1388(2012)02-0158-04叉尾斗鱼遗传多样性的 RAPD 分析刘宏毅1、2, 黎明星1、2、3, 肖俊1、2、3, 黄愉淋1、2、3, 张明1、2, 甘西3(1. 广西大学 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室, 广西 南宁 530004; 2. 广西大学 动物繁殖研究所,广西 南宁 530004; 3. 广西水产研究所 广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室, 广西 南宁 530021)摇 摇 摇摘要: 采用 RAPD 标记技术对叉尾斗鱼 Macropodus opercularis 5 个地理群体 (南宁群体、 桂林群体、 龙岩群体、 福州群体和广州群体) 的遗传多样性进行了检测。 结果表明: 从 40 个随机引物中筛选出 11 个有效引物, 对每条叉尾斗鱼的基因组 DNA 进行扩增, 共扩增出 139 条片段; 各群体的多态位点比例为 26郾 44% ~40郾 95%, Nei 基因多样性指数为 0郾 1042 ~0郾 1457, Shannon 指数为 0郾 1543 ~ 0郾 2176; 而总体的多态位点比例、 Nei 基因多样性指数和 Shannon 指数分别高达 84郾 89%、 0郾 3110 和 0郾 4606。 研究表明, 叉尾斗鱼的遗传变异主要来自群体间, 而群体内部的遗传多样性水平较低。关键词: 叉尾斗鱼; 遗传多样性; 随机扩增多态 DNA中图分类号: Q951摇 摇 摇 摇 文献标志码: A摇 摇 叉尾斗鱼 Macropodus opercularis 隶属于鲈形目Perciformes、 斗鱼科 Belontiidae、 斗鱼属 Macropo鄄dus, 是一种广泛分布于中国南方地区的小型淡水鱼类[1]。 1868 年 Carbonier 从中国将叉尾斗鱼引入法国, 因其体形美观, 色彩艳丽, 故而将其驯化为著名的热带观赏鱼种, 并得名 “天堂鱼冶。 随后叉尾斗鱼作为观赏鱼类, 在日本、 南美洲以及西欧等地广为流传。 中国南方地区是叉尾斗鱼的主要产地, 有着丰富的种质资源, 但因环境破坏等因素的影响, 野生叉尾斗鱼数量正在不断减少。 为了合理保护和利用叉尾斗鱼资源, 可以采用先进的分子标记技术对其遗传结构进行研究, 开展选育工作, 培育出更能迎合市场需要的新品种。随机扩增多态 DNA (Random amplified poly鄄morphic DNA, RAPD) 技术具有快速、 简便、 敏感、 产率高等特点, 目前已在品种品系遗传多样性分析、 物种亲缘关系和进化关系分析等多方面得到广泛应用[2]。 一些学者采用 RAPD 分子标记技术对鱼类的遗传多样性及群体间的遗传差异进行了研究[3-10]。 本试验中, 作者采用 RAPD 技术对叉尾斗鱼 5 个群体的遗传多样性进行分析, 旨在初步了解叉尾斗鱼种质资源的状况, 并为该鱼的资源保护和开发提供参考资料。1摇 材料与方法1郾 1摇 材料1郾 1郾 1摇 样品的采集摇 叉尾斗鱼样本于 2009 年 7 月至 10 月分别采自广西南宁心圩镇 (15 尾)、 桂林七星公园风景区 (15 尾)、 福建龙岩新罗区雁石镇厦老村 (10 尾)、 福州闽侯上街镇 (15 尾) 及广州萝岗开发区华峰寺 (15 尾) 的天然水域, 分别称为南宁群体 (NN)、 桂林群体 (GL)、 龙岩群体(LY)、 福州群体 (FZ) 和广州群体 (GZ), 体长为 4郾 9 ~ 7郾 4 cm, 采回后暂养在 5 个水族箱内备用。1郾 1郾 2摇 主要试剂摇 基因组 DNA 提取试剂盒、 Taq聚合酶、 dNTP 购自天根生化科技 (北京) 有限公司, 40 条10 bp 随机引物购自北京三博远志生物技术有限责任公司, DSTM2000 Marker 购自广州东盛生物科技有限公司。1郾 1郾 3摇ENT), 离心机 (Sigma 1 - 14), 凝胶成像系统(Gene Genius)。主要仪器 摇PCR 仪 ( Biometra TGRADI鄄摇 收稿日期: 2011-05-03摇 基金项目: 广西自然科学基金资助项目 (桂科自 0991008/ Z); 中国博士后科学基金资助项目 (20110490867); 广西壮族自治区直属公益性科研院所基本科研业务费资助项目 (2060302 CXIF-2011-04)摇 作者简介: 刘宏毅 (1984 -), 男, 硕士。 E-mail: 1290zxnm@163郾 com摇 通信作者: 张明 (1959-), 女, 博士, 教授, 博士生导师。 E-mail: mingzhang@ gxu郾 edu郾 cn;甘西 (1956-), 男, 研究员。 E-mail: ganxicn@126郾 com