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福建 中医药 2007 年 4 月 第 38 卷 第 2 期 Fujian J0umal of TCM April 2007， 38 (2) 45 电针治疗血管性痴呆大鼠对海马 CA1 区 p53 表达的影响 朱 燕珍 (福建中医学 院， 福建 福州 350003) 关键词 ： 血 管性痴 呆； 电针 ； 凋亡； p53 图分类号 ： R749． 16 文献标识码 ： A 文章编 号 ： 1000— 338X (2007 )02— 0045— 02 血 管性痴呆 (Vascular dementia， VD ) 是 由一 系 列脑血管因素导致脑组织损害引起 的痴呆综合征的 总称。本实验采用动物实验的方法对 VD 大鼠脑 内 的 p53 的表达进行基础性研究 ，以期探讨血管性痴 呆的发病机理及电针治疗 的作用机制。 1材料 与方 法 1． 1 实验动物 ：选用健康 Wistar 雄性大 鼠 3O 只 ， 9～10 月龄 。 体 重 460± 30 g， 由福 建医科 大学实验 动物中心提供 。 1． 2实验药品与试剂 ： 10％水合氯醛 ，福建 医科大 学附属第一医院提供。 兔抗 p53 抗体购 自Santa Cruz 生物试剂公司 (批号 C14062) 。FITC 标记山羊抗兔 IgG 购 自北京 中山生物试剂公 司( 批号 67905) 。 1． 3主要仪器 ： Morris 系列圆形迷宫(北京新天地科 技公司制造 )， 共聚焦扫描 显微镜 ( 型号 ： Leica— sp5)， 电针仪( 上海 G一 6805 型) 。 1． 4模型制备与分组 ： 经 Morris 水迷宫筛选 出学 习 记忆能力处于正常值范围的 9 月龄雄性 SD 大鼠 24 只。 随机抽取 8 只制备对照组 ， 其余进行造模。术 中 大 鼠用 1O ％的水 合氯醛 3 ml／ kg 腹腔注射麻醉 ． 仰 卧位固定 。 颈前去毛 。 常规 消毒 。 颈正中切 口。 分离双 侧颈总动脉， 并予以双重丝线永久性结扎 ， 缝合切 口 [ 。 至动物清醒后 ， 归笼 ， 自由摄食 和饮水。 将模型制 作存活大鼠按体重 随机分为电针组 (治疗组) 8 只和 模型组 8 只。 对照组除不结扎双侧颈总动脉 。 其余处 理相同 。 对照组也进行同样测试 。 1． 5治疗方法 ： 术后 30 d。 大 鼠饮食正常 ， 无肢体残 疾 ， 体重正常， 给予电针治疗 。 电针组中 ， 穴位定位参 照《 实验针灸学 》 大 鼠的常用针灸穴位[2 】 。造： 1 个月 。电针组大 鼠以 3O号 O． 5 寸 毫针斜刺百会 O ． 5 寸。直刺大椎 O． 5 寸 ，向脊柱方 向斜刺双侧 。 肾俞 6 mm， 将针柄分别连接至电针仪上 ， 采用连续波 ， 频率 4 Hz，强度 以大 鼠安静耐受为度 ， 20 min 后 出针 ， 1 次／ d， 均在上午进行治疗 。 连续治疗 30 d。对照组和 模型组只在同等条件下饲养 ， 未予任何处理。 1． 6行为学检测 ： 以 Morris 水迷宫检测大 鼠学习记 忆能力。试验包括定位航行试验和空间探索实验[3 ]。 收稿 日期 ： 2O o7一 O1— 26 1-7理盐水 100 fnl 和中性福尔马林 200 fnl 经心快速灌 注固定 。开颅取脑 ， 保 留含有海马的组织后 固定 12 h。 经梯度酒精脱水、 透明、 浸蜡 、 包埋后 ， 连续冠状切 片( 片厚 5 m) 。苏木素一 伊红 (HE ) 染色 ， 光镜 下观 察海马的病理变化。 1． 8免疫荧光染色 1． 8． 1 冰冻切片制备 ： 3％的水合氯醛 ( 3 m]／ kg) 麻 醉下 ， 经左心室灌注 300 ml 的生理盐水 ， 取脑 。 进行 连续冰冻冠状切片， 片厚 1O 1． 8． 2染 色 的主要 步骤 ：PBS 洗 3 次 ， 5 r a in／ 次 ， 0． 1％的 tricon 透化 10 min。 PBS 洗 3 次 ． 5 min／ 次 。 正 常兔 血清 20 min， 抗 p53 兔抗多 克隆抗体 ( 1： 300) ， 4℃冰箱过夜 ， PBS 洗 3 次 ， 5 min／ 次 ，荧光抗体 ( 1： 100) ， 37 ℃温箱 40 min， PBS 洗 3 次 ， 5 min／ 次 ， 缓冲 甘油封片。 1． 8． 3激光共聚焦扫描显微镜 观察 ： 在 200 倍镜下 取相 同大小视野 的海马 CA 1 区观察 并计数 p53 染 色细胞数 。 用于 FITC 的激光波长为 488 mm。 1． 9数据处理 ： 数据 以( 统计 软件对平均逃避潜伏期 行单 因素方差 分析和 LSD 检验 ； 对搜索策略结果行卡方检验 ； 对大鼠海马 CA 1 区荧 光染色 阳性 的细胞行 单 因素方差 分析和 LSD 检验 。 2 实验 结果 2． 1行为学检测结果 2． 1． 1 定 向航行实验 ： 从表 1可 以看出 。 对照组、 电 针组平均逃避潜伏期 明显短于模型组。将 3 组大 鼠 平均逃避潜伏期进行组 问比较有显著 性差异 (P< O． O 5) 。并做组问两两 比较 ， 结果 显示 电针组 大鼠平 均潜伏期 明显短 于模型组 (P< O ． 01) ， 而对照组 与电 针组之间的差异无显著性意义 (P> O． 05) ， 这表 明电 针明显改善了 VD 大鼠的学习记忆能力。 石蜡切片制备及苏木素一 伊红 (HE ) 染色 ： 用生 m， 丙酮后 固定 8 min。 ) 表 示 ， 应用 SPSS I3． 0 表 1 3 组大鼠在术后 2 个月平均 逃避潜伏期的 比较 ( + j) 注 ： 与对照组 比较 ， 1) P< O ． 0 1； 与模 型组 比较 ， 2 ) P< O． O1 维普资讯 http://www.cqvip.com