188宝金博页面版

  • 图案背景
  • 纯色背景
视图
标记
批注
批注本地保存成功，开通会员云端永久保存 去开通
xinkaiyue2..

上传于：2017-05-11

粉丝量：7

该文档贡献者很忙，什么也没留下。


  • 相关
  • 目录
  • 笔记
  • 书签

188宝金博页面版:更多相关文档

  • 传染性支气管炎N基因克隆及在大肠杆菌中的可溶性表达

    星级： 4 页

  • 传染性支气管炎N基因克隆及在大肠杆菌中的可溶性表达

    星级： 4 页

  • 鸡β防御素在大肠杆菌中的高效表达及复性

    星级： 4 页

  • 非洲猪瘟病毒VP73基因克隆及在大肠杆菌中的高效表达

    星级： 6 页

  • A组人轮状病毒VP6基因克隆及在大肠杆菌中的高效表达

    星级： 5 页

  • A组人轮状病毒 VP6基因克隆及在大肠杆菌中的高效表达

    星级： 5 页

  • 鸡β2微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与纯化

    星级： 6 页

  • 鸡β_2微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与纯化

    星级： 4 页

  • 鸡β2微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与纯化

    星级： 6 页

  • 鸡β2微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与纯化

    星级： 4 页

暂无目录

点击鼠标右键菜单,创建目录

    暂无笔记

    选择文本，点击鼠标右键菜单，添加笔记

    暂无书签

    在左侧文档中，点击鼠标右键，添加书签

    188宝金博页面版: 鸡支气管炎病毒N基因克隆及在大肠杆菌中的高效表达

    下载积分： 1500

    内容提示： 　。 为通信作者鸡支气管炎病毒 Ｎ 基因克隆及在大肠杆菌中的高效表达周建杰 　 马文富 　 项 　 勋 　 段 　 纲 　 代飞燕 　 常 　 华 ＊（云南农业大学动物科学技术学院 　 云南 昆明６５０２０１ ）　　 【摘要】依据 Ｇｅｎｂａｎｋ中传染性支气管炎病毒 Ｎ 基因序列，设计引物采用ＰＣＲ方法从本实验室分离到的病毒株中扩增获得约１。玻常埃猓 的 Ｎ 基因，并将 Ｎ 基因片段克隆插入 ｐＭＤ１８ － Ｔ载体获得 ｐＭＤ１８ － Ｔ － Ｎ ；采用酶切（ Ｅｃｏ 。遥 、 Ｘｈｏ Ｉ ）的方法从已构建的 Ｔ克隆质粒 ｐＭＤ１８ － Ｔ － Ｎ上获得 ＩＢＶＮ 基因片段，将其亚克隆插入原核表达载体 ｐＥＴ３２ａ ，成功构建重组原核表达质粒 ｐＥＴ３２ａ－ Ｎ 。将重组质粒转入ＢＬ２１ （ ＤＥ３ ）细胞，经ＩＰＴＧ 诱导表达，可稳定、高效地表达 Ｎ 蛋白。 ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ结果表明，以终...

    文档格式：PDF | 页数：4 | 浏览次数：65 | 上传日期：2017-05-11 21:23:44 | 文档星级：
    　。 为通信作者鸡支气管炎病毒 Ｎ 基因克隆及在大肠杆菌中的高效表达周建杰 　 马文富 　 项 　 勋 　 段 　 纲 　 代飞燕 　 常 　 华 ＊（云南农业大学动物科学技术学院 　 云南 昆明６５０２０１ ）　　 【摘要】依据 Ｇｅｎｂａｎｋ中传染性支气管炎病毒 Ｎ 基因序列，设计引物采用ＰＣＲ方法从本实验室分离到的病毒株中扩增获得约１。玻常埃猓 的 Ｎ 基因，并将 Ｎ 基因片段克隆插入 ｐＭＤ１８ － Ｔ载体获得 ｐＭＤ１８ － Ｔ － Ｎ ；采用酶切（ Ｅｃｏ 。遥 、 Ｘｈｏ Ｉ ）的方法从已构建的 Ｔ克隆质粒 ｐＭＤ１８ － Ｔ － Ｎ上获得 ＩＢＶＮ 基因片段，将其亚克隆插入原核表达载体 ｐＥＴ３２ａ ，成功构建重组原核表达质粒 ｐＥＴ３２ａ－ Ｎ 。将重组质粒转入ＢＬ２１ （ ＤＥ３ ）细胞，经ＩＰＴＧ 诱导表达，可稳定、高效地表达 Ｎ 蛋白。 ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ结果表明，以终浓度为１ｍｍｏｌ ／ ｍＬ的ＩＰＴＧ在３７℃进行诱导， ５ｈ后表达量最高。这一原核表达载体 ｐＥＴ３２ａ － Ｎ 的构建为进一步研究核酸疫苗奠定了前期基础。　　 关键词：鸡支气管炎； Ｎ 基因；原核表达；克隆　　 传染性支气管炎病毒（ ＩＢＶ ）为冠状病毒科冠状病毒属的代表种，基因组为单链正股 ＲＮＡ ， ＲＮＡ在转录过程中可形成６种 ｍＲＮＡ （ ｍＲＮＡ１～ｍＲ －ＮＡ６ ）。该病毒会损害禽类消化系统、呼吸系统和泌尿生殖系统，不同日龄的鸡均有感染。 ＩＢＶ 所致疾病的临床表现差异很大，不同地区、不同时间的地方流行毒株总是不同，甚至在免疫的鸡群中流行，其表现为破坏呼吸道黏膜，以此促使其他条件性致病菌如霉形体、大肠杆菌、葡萄球菌的继发感染或支原体混合感染而导致鸡群的死亡率增大。ＩＢＶ 也可造成产蛋障碍综合征，表现在侵害种鸡生殖系统，使母鸡发生输卵管炎，导致输卵管堵塞，即所谓的“假母鸡”，近年来 ＩＢＶ 在母鸡和产蛋鸡中感染较严重，发病率为１５％～３０％ 。 ＩＢＶ 还可侵害肾脏、肠道、腺胃、肌肉，引起鸡的饲料报酬和增重及生产性能降低，继发或并发感染气囊炎等，使肉鸡在加工过程中淘汰率增加，产蛋鸡的产蛋量和蛋品质下降，给养鸡业带来重大经济损失 〔１～５ 〕 。ＩＢＶ 粒子主要由囊膜和核衣壳两部分组成，最外层的脂质双层囊膜，来自宿主细胞的内膜（高尔基体膜或粗面内质网），其上含有纤突蛋白（ｓｐｉｋｅ ，Ｓ ）和膜蛋白（ ｍｅｍｂｒａｎｅ ， Ｍ ）两种糖蛋白。核衣壳（ Ｎ 蛋白），呈螺旋状、较长，直径约９～１６ｎｍ ，由正链基 因 组 ＲＮＡ 和 多 分 子 磷 酸 化 核 衣 壳 蛋 白 组成 〔６ 〕 。此外还有Ｅ蛋白（小囊膜蛋白）与 Ｍ 蛋白共同构成囊膜。由于囊膜中含有类脂成分，所以病毒粒子对脂溶剂敏感，且 ＩＢＶ 核蛋白 Ｎ 蛋白具有重要的细胞免疫功能 〔７～９ 〕 ，ＩＢＶ ７９３ ／ Ｂ 的 Ｎ 基因存在着较大的变异性 〔１０ 〕 。Ｗｉｌｌｉａｍｓ早在２０世纪６０年代实验表明 Ｎ 基因序列高度保守，试验中将２７个毒株与 Ｈｏｌｌａｎｄ５２（ Ｈ０１１５２）和 Ｇｒａｙ。粒颍耄幔睿螅幔梗菇斜冉，发现其同源性达到９１．１％～９６．５％ 。然而近年研究表明， Ｎ基因在不同毒株之间也存在较大差异。 Ｂｏｃｈｋｏｖ等发现部分意大利分离株的 Ｎ 基因仅有 ８７．７０％～８９．７％ 的同源性。张建臣等对分离毒株的 Ｎ 基因进行了扩增，经克隆、序列测定和分析，证实分离株为肾型 ＩＢＶ 〔１１～１３ 〕 。Ｎ 蛋白主要与病毒核酸结合成为核衣壳，并能特异性结合到引导 ＲＮＡ 上，参与 ＲＮＡ 的合成、转录和翻译 〔１４ 〕 。研究发现Ｎ 蛋白携带的抗原决定簇不但可产生明显高于Ｓ蛋白的交叉反应抗体，还可通过其携带的 Ｔ 细胞抗原决定簇诱导特异性 ＣＴＬ应答 〔１５ 〕 ，且 Ｎ 蛋白的 Ｃ端前１２０个氨基酸是诱导ＣＴＬ的抗原表位，能对急性感染的雏鸡有保护作用 〔１６ 〕 。此外，在细胞免疫和体液免疫中，Ｎ 蛋白起重要作用。另外，病毒形态发生与 Ｎ 蛋白也有密切关系 〔１７ 〕 。 Ｎ 蛋白在 ＩＢＶ进化中高度保守 〔１８ 〕 ，为此本研究从云南分离到的１株 ＩＢＶ 病毒中扩增获得Ｎ 基因，并将其克隆入原核表达载体，转入 ＢＬ２１表达宿主菌获得高效表达，为后续研究该基因的功能奠定基础。１　 材料与方法１．１　 病毒和阳性血清　　 鸡传染性支气管炎病毒（ ＩＢＶ ）由云南农业大学动物医学系实验室分离、纯化和保存。１．２　 实验材料　　 ＩＢＶ 标准核酸是从弱毒苗 ＩＢＶ 。龋保玻 株中提。桑拢 样品核酸从云南农业大学动物医学系实验·２· 《上海畜牧兽医通讯》 。玻埃保纺甑冢财贒OI:10.14170/j.cnki.cn31-1278/s.2017.02.001

    阅读了该文档的用户还阅读了这些文档

    188宝金博页面版:关于我们

    188宝金博页面版:帮助中心

    188宝金博页面版:关注我们

    • 新浪微博

    关注188宝金博页面版公众号

    188宝金博页面版
    阅读
    APP
    阅读
    返回
    顶部
    188宝金博页面版官网登录在线平台入口（2026已更新）—江苏协昌电子科技股份有限公司