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中国农业科学 2011,44(11):2387-2397 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.11.023 收稿日期： 2011-04-08； 接受日期： 2011-05-19 基金项目： 国家“十一五” 科技支撑计划重大项目（2006BAK02A21） 联系方式： 王爱萍， Tel： 0371-65728928； Fax： 0371-67783235； E-mail： pingaw@126.com。 通信作者李发弟， Tel： 0931-7632636； E-mail： lifd@gsau.edu.cn 新霉素免疫膜层析检测方法研究 王爱萍1, 李发弟1, 胡骁飞2, 史兆国1, 周景明2, 杜晓明2, 王林林2, 禹乐乐2, 刘明阳2 (1甘肃农业大学动物科学学院， 兰州 730070；2河南省农业科学院免疫学重点实验室, 郑州 450002) 摘要：【目 的】 研制新霉素（neomycin， NEO） 免疫膜层析快速检测试纸。【方法】 建立分泌抗新霉素单克隆抗体(NEO mAb) 杂交瘤细胞株， 用胶体金免疫膜层析试验(GICA) 制备NEO残留快速检测试纸(NEO-Strip) ， 并对其性能进行鉴定。【结果】 抗新霉素单克隆抗体的亲和力常数为 3. 75× 1010 mol·L-1； 制备的 NEO-Strip目 测限为 50 ng·mL-1； 试纸可特异性检测NEO， 与庆大霉素、 链霉素、 妥布霉素、 紫苏霉素、 莱克多巴胺、 沙丁胺醇、 泰乐菌素和氯霉素等其它药物均无交叉反应性； 就定性检测而言， 其结果与高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS-MS） 完全一致； 不同的基质液对试纸的敏感度影响甚微。【结论】 建立了特异的NEO免疫层析检测方法。 关键词： 新霉素； 单克隆抗体； 胶体金； 试纸条 Development of an Immunochromatographic Strip Test for Detection of Neomycin WANG Ai-ping1, LI Fa-di1, HU Xiao-fei2, SHI Zhao-guo1, ZHOU Jing-ming2, DU Xiao-ming2, WANG Lin-lin2, YU Le-le2, LIU Ming-yang2 (1College of Animal Science, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070; 2Henan Key Lab for Animal Immunology, Zhengzhou, 450002) Abstract: 【Objective】 The objective of this experiment is to develop an immunochromatographic strip for rapid detection of neomycin (NEO). 【Method】 The monoclonal antibodies (mAb) against neomycin were generated and labeled with colloidal gold particles. Then the immunochromatographic strips for detection of NEO were developed and identified.【Result】 Ka of NEO monoclonal antibody was 3.75×1010 mol·L-1. The detection limit of the strip was 50 ng·mL-1 by naked eyes. The cross-reactivity with other antibiotics, such as gentamicin, streptomycin, tobramycin, sisomicin, ractopamine, salbutamal, tylosin, chloramphenic, was not detected. In parallel experiments, the test strip gave the same results as HPLC-MS-MS did. 【Conclusion】 An immunochromatographic strip test method was established and the strip can be used to detect NEO residues rapidly with high specificity, sensitivity and simplicity in different samples. Key words: neomycin; monoclonal antibody; colloidal gold particles; test strip 0 引言 【研究意义】 新霉素（neomycin， NEO） 是由链霉菌分泌的氨基糖苷类抗生素[1]， 由氨基环醇和氨基糖以苷键相连接而成， 呈碱性。 由于新霉素广谱高效的抗菌作用及其低廉的价格， 被广泛应用于畜牧养殖业； 因此， 近年来新霉素在动物源性食品中的残留问题也日益突出。 新霉素主要损害第Ⅷ对脑神经从而造成不可逆性耳聋， 且有较强的肾毒性， 亦可引起维生素A及B12吸收不良而引发相关症状[2-3]。 世界各国先后制定了动物产品中新霉素严格的限量标准， 中华人民共和国农业部2002年发布的第235 号公告中规定动物的肌肉、 肝脏、 脂肪、 牛奶、 羊奶及禽蛋中新霉素含量不能超过 500 µg·kg-1[4-5]。 【前人研究进展】 为了加