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    188宝金博页面版: 猪圆环病毒2型灭活疫苗的研制

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    内容提示： 病毒。 讨论Ｐ Ｃ Ｖ ２是引起猪的断奶后多系统衰竭综合征（ Ｐ Ｍ Ｗ Ｓ ）， 猪皮炎肾病综合征（ Ｐ Ｄ Ｎ Ｓ ）、 猪呼吸道疾病综合征（ Ｐ Ｒ Ｄ Ｃ ）、 增生性坏死性肺炎（ Ｐ Ｎ Ｐ ）、 先天性震颤（ Ｃ Ｔ ． Ａ １１）等疾病的病原７ ， 给养猪业所造成的直接和间接：薮。 Ｐ Ｃ Ｖ ２主要侵害猪的肺泡巨噬细胞和淋巴细胞， 可致使Ｂ 淋巴细胞凋亡， 影响肺泡巨噬细胞的正常功能， 造成猪体免疫抑制。 当前， 尚没有好的药物可以治疗Ｐ Ｃ Ｖ ２等病毒性疾病感染， 疫苗免疫是防制该病的根本手段和措施。 但是， 由于Ｐ Ｃ Ｖ ２全病毒活疫苗存在散毒和病毒持续性感染的危险， 而灭活疫苗只能诱导机体产生体液免疫应答， 因此迄今为止， 国内外尚没有有效的Ｐ Ｃ Ｖ ２疫苗...

    文档格式：PDF | 页数：2 | 浏览次数：31 | 上传日期：2012-07-16 12:25:40 | 文档星级：
    病毒。 讨论Ｐ Ｃ Ｖ ２是引起猪的断奶后多系统衰竭综合征（ Ｐ Ｍ Ｗ Ｓ ）， 猪皮炎肾病综合征（ Ｐ Ｄ Ｎ Ｓ ）、 猪呼吸道疾病综合征（ Ｐ Ｒ Ｄ Ｃ ）、 增生性坏死性肺炎（ Ｐ Ｎ Ｐ ）、 先天性震颤（ Ｃ Ｔ ． Ａ １１）等疾病的病原７ ， 给养猪业所造成的直接和间接：薮。 Ｐ Ｃ Ｖ ２主要侵害猪的肺泡巨噬细胞和淋巴细胞， 可致使Ｂ 淋巴细胞凋亡， 影响肺泡巨噬细胞的正常功能， 造成猪体免疫抑制。 当前， 尚没有好的药物可以治疗Ｐ Ｃ Ｖ ２等病毒性疾病感染， 疫苗免疫是防制该病的根本手段和措施。 但是， 由于Ｐ Ｃ Ｖ ２全病毒活疫苗存在散毒和病毒持续性感染的危险， 而灭活疫苗只能诱导机体产生体液免疫应答， 因此迄今为止， 国内外尚没有有效的Ｐ Ｃ Ｖ ２疫苗可用。 Ｄ Ｎ Ａ 疫苗能够用于病毒或细菌性传染病、 寄生虫病的免疫预防， 并可诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应， 而且Ｄ Ｎ Ａ 疫苗的免疫效果不受母源抗体或被动抗体的影响，这些优点使得Ｄ Ｎ Ａ 疫苗成为当前使用常规疫苗难以防治的一些疾病疫苗研究的方向。 本研究得到的ｒ ｐ ｃＤ Ｎ Ａ ３． Ｉ／Ｐ Ｃ Ｖ ２－ ｌｉｎ ｋ ｅ ｒ —Ｐ ｏ ｌＬ － ２质粒为主要成分的Ｄ Ｎ Ａ 疫苗免疫猪后可诱导猪产生高水平的抗Ｐ Ｃ Ｖ ２抗体， 这对下一步开展Ｐ Ｃ Ｖ ２攻毒保护性试验奠定了基。 对控匍ＪＰ Ｃ Ｖ ２病具有重要意义。本研究采用Ｓ Ｏ Ｅ ． Ｐ Ｃ Ｒ 技术通过基因ｌｉｎ ｋ ｅｒ将Ｐ Ｃ Ｖ ２的Ｏ Ｒ Ｆ ２基因与Ｐ ｏ ｌＬ ． ２基因构建成嵌合基因。Ｓ Ｏ Ｅ ． Ｐ Ｃ Ｒ 操作时需要进行多次Ｐ Ｃ Ｒ 扩增， 这易造成碱基错配， 因此在研究中我们采用了高保真的Ｐ ｙ ｒ ｏ ｂ ｅ ｓｔＴ ＭＤ Ｎ ＡＰ ｏ ｌｙ ｍ ｅｒ ａ ｓｅ代替Ｅ ｘ Ｔ ａ ｑＤ Ｎ Ａ 聚合酶进行Ｐ Ｃ Ｒ 扩增， 保证了Ｐ Ｃ Ｒ 扩增的忠实性。 为了保ｉ正ｐ ｃＤ Ｎ Ａ ３． １／Ｐ Ｃ Ｖ ２． １ｉｎ ｋ ｅｒ－ Ｐ ｏ ｌＬ ． ２重组质粒在猪体内表达ｆ ｌ勺Ｃ ａ ｐ 蛋白和Ｐ ｏ ｌＬ ． ２蛋白的空间构象不相互影响从而能够正确折叠， 本研究采用（ Ｇ ４ Ｓ ）３柔性多肽接头作为ｌｉｎ ｋ ｅｒ。 由于甘氨酸在１３转角中能很好调整其他残基的空间， 基本上不影响ｐ 折叠片的整体结构， 丝氨酸则常出现在转角或无序结构中，二者组成的接头不会在折叠过程中形成二级结构， 从而不会影响表达蛋白的正确折叠及蛋白功能的发挥。 本研究结果表明所设计的（ Ｇ ４ Ｓ ）３ ｌｉｎ ｋ ｅｒ 不影响嵌合基因表达的融合蛋白中Ｃ ａ ｐ 蛋白和Ｐ ｏ ｌＬ ． ２蛋白各自的生物学活性， 这为以后进行不同基因体外嵌合方面的研究提供了一种新方法。ＩＬ ?２能够激活１１１细胞、 Ｃ Ｔ Ｌ 细胞、 Ｂ 细胞和Ｎ Ｋ 细胞， 提高这些细胞的免疫功能。 表达ＩＬ ． ２的重组质粒能够增强Ｄ Ｎ Ａ 疫苗诱导的特异性体液和细胞免疫反应， 从而增强Ｄ Ｎ Ａ 疫苗的免疫效果。 在已有的报道中， 多是将ＩＬ ． ２与目的Ｄ Ｎ Ａ 共同插入到表达载体中进行共表达或分别构建目的Ｄ Ｎ Ａ 和ＩＬ ． ２各自单独的质粒载体后共同免疫动物从而发挥ＩＬ ． ２的免疫增强作用。 但在同一个质粒中共表达时往往由于表达的蛋白空间构象的相互影响从而影响Ｄ Ｎ Ａ 疫苗的免疫效果； 分别构建目的Ｄ Ｎ Ａ 和ＩＬ ． ２质粒载体在联合应用时往往因为二者使用剂量比例、 注射部位等因素的影响从而降低Ｄ Ｎ Ａ 疫苗的免疫效果。 本研究通过基因柔性ｌｉｎ ｋ ｅｒ将Ｐ Ｃ Ｖ ２的Ｏ Ｒ Ｆ ２基因和Ｐ ｏ ｌＬ ． ２基因构建嵌合基因转入表达质粒中实现Ｐ Ｃ Ｖ ２的Ｏ Ｒ Ｆ ２和Ｐ ｏ ｌＬ ． ２基因的共表达， 从而发挥Ｐ ｏ ｌＬ － ２对Ｐ Ｃ Ｖ ２ Ｄ Ｎ Ａ 疫苗的免疫增强作用。ｒｐ ｃＤ Ｎ Ａ ３． １／Ｐ Ｃ Ｖ ２． １ｉｎ ｋ ｅｒ－ Ｐ ｏ ｌＬ － ２质粒在Ｃ Ｏ Ｓ ． ７ 细胞中成功表达了有生物学活性的Ｃ ａ ｐ 蛋白和Ｐ ｏ ｌＬ ． ２蛋白， 而且ｒｐ ｃＤ Ｎ Ａ ３． Ｉ／Ｐ Ｃ Ｖ ２－ ｌｉｎ ｋ ｅｒ－ Ｐ ｏ ｌＬ － ２质粒在小鼠和猪体内诱导的抗Ｐ Ｃ Ｖ ２抗体水平显著高于ｒＩ∞Ｄ Ｎ Ａ ３． Ｉ／Ｏ Ｒ Ｆ ２质粒， 这说明ｏ ｃＤ Ｎ Ａ ３． Ｉ／Ｐ Ｃ Ｖ ２． １ｉｎ ｋ ｅｒ． Ｐ ｏ ｌＬ ． ２质粒在小鼠和猪体内可表达具有Ｃ ａ ｐ 蛋白和Ｐ ｏ ｌＬ ． ２蛋白双重活性的融合蛋白。本研究成功构建了Ｐ Ｃ Ｖ ２． １ｉｎ ｋ ｅ ｒ － Ｐ ｏ ｌＬ ． ２嵌合基因及其ｐ ｃ Ｄ Ｎ Ａ ３． １真核重组表达质粒ｒｐ ｃＤ Ｎ Ａ ３． Ｉ／Ｐ Ｃ Ｖ ２． １ｉｎ ｋ ｅｒ－ Ｐ ｏ ｌＬ － ２； 重组表达质粒在Ｃ Ｏ Ｓ ． ７ 细胞中表达了具有Ｃ ａ ｐ 蛋白和Ｐ ｏ ｌＬ ． ２蛋白双重生物学活性的融合蛋白， 免疫小鼠和猪后可诱导小鼠和猪产生高的抗Ｐ Ｃ Ｖ ２抗体， 且其诱导的抗体水平明显高于ｐ ｃＤ Ｎ Ａ ３． Ｉ／Ｏ Ｆ Ｒ ２重组质粒。 本研究为Ｐ Ｃ Ｖ ２的Ｄ Ｎ Ａ 疫苗研究奠定了基础。参考文献（ 略）猪圆环病毒２型灭活疫苗的研制刘长明， 危艳武（ 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室， 黑龙江哈尔滨１５０ ０ ０ １）摘要猪圆环病毒２型（ Ｐ Ｃ Ｖ ２）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（ Ｐ Ｍ Ｗ Ｓ ）的重要病原， 以进行性消瘦、 咳嗽．呼吸困难， 腹泻、 皮肤苍白． 淋巴结肿大、 肾脏灰白水肿为主要特征， 给养猪业造成了巨大的经济损失． 此外， 猪皮炎与肾炎综合征（ Ｐ Ｎ Ｄ Ｓ ）． 猪繁殖障碍（ Ｐ Ｒ Ｆ ）． 猪呼吸道疾病复合征（ Ｐ Ｒ Ｄ Ｃ ）、 猪的问质性肺炎及先天性震颤（ Ｃ Ｔ ）４ ７ ０

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