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    188宝金博页面版: 黄鳝血清转铁蛋白的提取及表征

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    内容提示： 第12卷第 1 期 过 程 工 程 学 报 Vol.12 No.1 2012 年 2 月 The Chinese Journal of Process Engineering Feb. 2012 收稿日期： 2011?06?03， 修回日期： 2011?12?20 基金项目： 国家自然科学基金资助项目(编号： 20872093)； 上海市教委基金资助项目(编号： 1122122)； 上海市重点实验室基金资助项目(编号： 07dZ22303) 作者简介： 王博文(1989?)， 女， 山西省临汾市人， 硕士研究生， 高分子化学与物理专业； 任天瑞， 通讯联系人， Tel: 0...

    文档格式：PDF | 页数：6 | 浏览次数：61 | 上传日期：2015-03-06 13:03:32 | 文档星级：
    第12卷第 1 期 过 程 工 程 学 报 Vol.12 No.1 2012 年 2 月 The Chinese Journal of Process Engineering Feb. 2012 收稿日期： 2011−06−03， 修回日期： 2011−12−20 基金项目： 国家自然科学基金资助项目(编号： 20872093)； 上海市教委基金资助项目(编号： 1122122)； 上海市重点实验室基金资助项目(编号： 07dZ22303) 作者简介： 王博文(1989−)， 女， 山西省临汾市人， 硕士研究生， 高分子化学与物理专业； 任天瑞， 通讯联系人， Tel: 021-64328850, E-mail: trren@shnu.edu.cn 黄鳝血清转铁蛋白的提取及表征 王博文1, 2， 任天瑞1, 2， 董亚明1， 王 丰1, 2 (1. 上海师范大学生命与环境科学学院； 2. 上海师范大学资源化学188宝金博页面版部重点实验室， 上海 200234) 摘 要： 对从黄鳝血液中提取的蛋白层析纯化后进行生物质谱测试， 确定为血清转铁蛋白. 利用十二烷基硫酸钠−聚丙烯酰胺凝胶电泳、 原子力显微镜、 圆二色谱法对蛋白的分子量、 表面形貌、 二级结构进行了表征. 结果表明， 该转铁蛋白分子量为 74 kDa， 含量为 0.750 mg/mL， 含α-螺旋 29.8%， β-折叠 6.6%. 关键词： 黄鳝； 转铁蛋白； 十二烷基硫酸钠−聚丙烯酰胺凝胶电泳； 生物质谱； 原子力显微镜 中图分类号： R284.2； Q956 文献标识码： A 文章编号： 1009−606X(2012)01−0125−06 1 前 言 黄鳝(Monopterus albus)属合鳃鱼目， 合鳃鱼科， 黄鳝属， 亦称罗鳝、 蛇鱼、 长鱼， 为热带及暖温带鱼类，主要分布于中国东南部和泰国、 印度尼西亚等东南亚地区. 黄鳝有补血补气[1,2]、 消 炎消 毒[3]、 除风湿等功效. 其富含二十二碳六烯酸(DHA)和卵磷脂， 这些物质是人类脑细胞生长不可缺少的营养成分[4]. 黄鳝所特有的黄鳝素能调节血糖， 其肉质所含脂肪极少， 是糖尿病人、 体虚、 产后患者的理想食品. 此外， 黄鳝血还可治疗口眼歪斜， 在中医药方面有很多用途. 黄鳝在中医学领域的药用价值很大， 同时随着分子生物学和生物技术的飞速发展, 具有生物活性的黄鳝蛋白和多肽的分离、 纯化和鉴定已有报道. 皮建华等[5]制备了鳝鱼抗 H 血清； 尹绍武[6]观察了黄鳝的红细胞， 测定了 其脱氧核糖核酸(DNA)含量； 李联泰等[7]综述了 黄鳝研究现状及其活性物质研发的前景， 归纳总结了黄鳝遗传学、 分子生物学、 氮代谢及活性物质的最新研究成果； 诸葛燕[8]比较了 7 种淡水鱼中天然色素和酪氨酸酶的活性； Siripan 等[9]比较了亚洲鳗鱼、 鳝鱼的血细胞值，并观察了 其形态； 李连泰[10]从全血中提取出鳝鱼凝血酶， 具有相当高的凝结活性. 血清转铁蛋白(Serotransferrin, Tf)具有很好的增强机体免疫力的生理功能[11]， 能促进婴幼儿对铁及营养物的吸收， 能有效防止贫血[12]、 抑制肠道致病菌和病毒体内自由基的生成[13]、 缓解类风湿关节炎和抗衰老. Tf 是体液中不可缺少的成分， 不仅参与呼吸、 细胞增殖和免疫系统的调节， 还能调节铁离子平衡和能量平衡， 更具有抗菌杀菌的保护功能[14,15]. 龙华等[13]用硫酸铵分级沉淀法及十二烷基硫酸钠−聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS− PAGE)法获得了 含鲤(Cyprinus carpio)血清转铁蛋白的条带， 同时除去 SDS 及考马斯亮蓝， 分离纯化了转铁蛋白， 并进行了铁离子结合实验及光谱分析， 结果表明，转铁蛋白结合铁离子后的特异吸收峰为 467 nm， 说明去SDS 后蛋白仍具有很强的结合能力， 用 SDS−PAGE 法测得鲤血清 Tf 分子量约为 74000 Da. 杨严俊等[16]采用固定化金属螯合亲和色谱法(IMAC)从蛋清中分离和提取卵转铁蛋白(OVT), OVT 纯度达 96%， 远高于商品OVT 纯度， 分子量为 76500 Da. 截至目前， 未见对黄鳝体内 的蛋白 质进行生物质谱鉴定、 原子力显微镜(Atomic Force Microscope, AFM)表面形貌表征及圆二 (Circular Dichroism, CD)色谱测定. 黄鳝在我国南方分布广泛， 人们主要是食用其肉，所以黄鳝血液来源相对丰富且价格便宜， 利用率较低，是一种极为重要的天然药物开发资源， 同时也是一种很好的药物原材料. 本研究通过研究黄鳝血清蛋白， 提取具有药理活性的蛋白质化学组分， 开发黄鳝的药用成分， 提高黄鳝的利用价值. 准确测定了黄鳝血清转铁蛋白的分子量及相对含量， 并对血清转铁蛋白进行表征，首次对黄鳝体内的蛋白质进行了 生物质谱鉴定、 AFM表面形貌的表征及 CD 色谱的测定， 得到的蛋白结构数据可为进一步对其进行药理研究打下基础. 2 实 验 2.1 原料和仪器 实验材料： 新鲜黄鳝购自超市； 硫酸铵、 聚乙二醇(Carbowax 4000W)、 氯化钠、 三羟甲基氨基甲烷(Tris)，十二烷基硫酸钠(SDS)、 过硫酸铵、 甘氨酸、 巯基乙醇、甘油、 溴酚蓝、 考马斯亮蓝 R250、 甲醇、 冰醋酸、 氨水、 氯化钾、 磷酸二氢钾、 浓盐酸购于上海国药有限公司； 丙烯酰胺(Acr)、 双甲叉基丙烯酰胺(Bis)、 四甲基乙二胺溴化乙啶(TEMED)、 预染色蛋白 质分子量标准

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