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    188宝金博页面版: 黄颡鱼免疫球蛋白M 基因的克隆与组织表达分析

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    内容提示： 第 2 8 卷第 6 期大连海洋大学学报V o l 郾 2 8 N o 郾 62 0 1 3 年 1 2 月J O U R N A LO FD A L I A NO C E A NU N I V E R S I T YD e c 郾 2 0 1 3文章编号:2 0 9 5 - 1 3 8 8 ( 2 0 1 3 ) 0 6 - 0 5 1 5 - 0 7黄颡鱼免疫球蛋白 M 基因的克隆与组织表达分析叶仕根, 费阳春, 李强, 李华( 大连海洋大学 农业部北方海水增养殖重点实验室,辽宁 大连 1 1 6 0 2 3 )摘要: 根据 G e n B a n k 中登录的免疫球蛋白 M提取黄颡鱼 Peltebagrus fulvidraco 脾脏总 R N A ,( I g M )基因编码氨基酸的保守序列以及鱼类密码子的偏好性设计简并引物,经 R T - P C ...

    文档格式：PDF | 页数：7 | 浏览次数：29 | 上传日期：2015-03-06 13:03:20 | 文档星级：
    第 2 8 卷第 6 期大连海洋大学学报V o l 郾 2 8 N o 郾 62 0 1 3 年 1 2 月J O U R N A LO FD A L I A NO C E A NU N I V E R S I T YD e c 郾 2 0 1 3文章编号:2 0 9 5 - 1 3 8 8 ( 2 0 1 3 ) 0 6 - 0 5 1 5 - 0 7黄颡鱼免疫球蛋白 M 基因的克隆与组织表达分析叶仕根, 费阳春, 李强, 李华( 大连海洋大学 农业部北方海水增养殖重点实验室,辽宁 大连 1 1 6 0 2 3 )摘要: 根据 G e n B a n k 中登录的免疫球蛋白 M提取黄颡鱼 Peltebagrus fulvidraco 脾脏总 R N A ,( I g M )基因编码氨基酸的保守序列以及鱼类密码子的偏好性设计简并引物,经 R T - P C R扩增首次获得了黄颡鱼 I g M的部分序列 ( 6 7 5 b p ) 。以 茁- a c t i n 为内参基因,通过 R e a l - t i m e P C R法分析了黄颡鱼 I g M基因的组织分布特点。结果表明,在黄颡鱼肝胰脏、脾脏、头肾、中肾、鳃、肌肉、皮肤和肠道中均检测到 I g M基因的表达,头肾和脾脏是 I g M表达的主要部位,肾脏、鳃、皮肤、肠道和肝胰脏等组织中表达量居中,肌肉中表达量最低。经鮰爱德华菌 Edwardsiella ictaluri 胞外产物免疫后,头肾、脾脏和肝胰脏中 I g M基因 表达呈现不同的变化规律。关键词: 黄颡鱼;I g M ;克隆;组织分布中图分类号:Q 7 8 6 摇摇摇摇 文献标志码:A摇摇免疫球蛋白 ( I m m u n o g l o b u l i n s ,I g )是有颌类脊椎动物所特有的介导体液免疫的重要效应分子,在脊椎动物特异性免疫系统中起着关键作用。I g分子包括重链和轻链两部分,根据重链恒定区化学结构的差异,可将 I g 划分为多种类型。不同动物所拥有的 I g 种类不同,目 前已报道的硬骨鱼类 I g有 I g M 、I g D 、I g Z / T和 I g M- I g Z嵌合体等几种类型[ 1 - 5 ]。有报道指出,病原菌感染可明显提高鳜鱼I g M的表达水平,而 I g D和 I g Z 无明显变化[ 6 ],内毒素刺激则 可增 加 鲤 I g M- I g Z嵌合体基因 的 转录[ 5 ],这说明不同类型的 I g 有不同的免疫应答机制。在这些 I g 分子中,I g M存在于所有有颌类脊椎动物中,其重链代表了从软骨鱼类到哺乳类的一个连续进化的过程[ 7 ]。同时,I g M也是鱼类最先表达的抗体,在体液免疫尤其是抵抗细菌性抗原侵扰方面起着重要作用[ 8 - 9 ]。目 前,诸如模式鱼类斑马鱼 Danio已有多种鱼类 I g M重链基因被克隆鉴定,rerio[ 1 0 ]和一些重要的经济鱼类[ 1 1 - 1 7 ]。这些研究结果显示,不同鱼类的 I g M重链之间存在基因数目差异和序列特异性,同时不同鱼类 I g M基因的组织分布也存在差异。黄颡鱼 Peltebagrus fulvidraco 是重要的经济鱼类之一,然而对其 I g M基因的研究至今尚未见报道。本研究中,作者根据 G e n B a n k 数据库中登录的黄颡鱼近缘物种的 I g M重链序列信息,通过设计简并引物克隆 I g M重链基因的部分片段,同时采用 R e 鄄a l - t i m e P C R方法研究黄颡鱼 I g M重链基因在各组织中的表达情况以及经胞外产物 ( O M P s )免疫刺激后的变化规律,以期为黄颡鱼的抗感染机制和免疫防治技术研究提供理论依据,对了解鱼类免疫应答的分子机制以及免疫系统的起源与进化等具有重要意义。1摇材料与方法1郾 1摇材料试验用黄颡鱼体质量为 3 5 ~ 5 0 g ,购自 辽宁营口 某黄颡鱼养殖场,驯养一周后用于试验。T r i z o l 总 R N A提取试剂盒、M - M L V反转录酶、荧光定量 P C R试剂盒 S Y B R襆G r e e n S u p e r M i x - U D G试剂盒等购自 上海 I n v i t r o g e n 公司;Taq D N A聚合酶、p M D 1 8 - T载体、D N AM a r k e r 均购自 宝生物( 大连)工程有限公司;引物由北京六合华大基因科技股份有限公司合成。1郾 2摇方法1 郾 2 郾 1 摇I g M重链基因 核心序列 的扩增摇黄颡鱼暂摇收稿日 期: 2 0 1 3 - 0 3 - 1 3基金项目: 国家 “ 十二五冶作者简介: 叶仕根 ( 1 9 7 6 - ) , 男,通信作者: 李华 ( 1 9 5 8 - ) , 女,摇科技支撑计划项目 ( 2 0 1 1 B A D 1 3 B 0 3 )副教授。教授。摇E - m a i l :y e d l s y @d l o u 郾 e d u 郾 c n摇E - m a i l : l i h u a @d l o u 郾 e d u 郾 c n

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