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    188宝金博页面版: miRNA-16对肺腺癌A549细胞增殖和VEGF-A表达水平的影响

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    内容提示： 网络出版时间：网络出版地址：ｍｉＲＮＡ１６对肺腺癌 Ａ５４９细胞增殖和 ＶＥＧＦＡ表达水平的影响徐　胜 １ ，束　军 １ ，李晓峰 １ ，程　宇 １ ，沈继龙 ２２０１６－０１－０８接收基金项目：安徽省自然科学基金面上项目（编号：１３０８０８５ＭＨ１４１）；安徽医科大学科研基金资助项目（编号：２０１０ｘｋｊ１１５）作者单位：１ 安徽医科大学第四附属医院呼吸内科，合肥。玻常埃埃玻玻 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室、安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室，合肥。玻常埃埃常沧髡呒蚪：徐　胜，男，硕士研究生；束　军，男，医学博士，硕士生导师，责任作者，Ｅｍａｉｌ：Ｊ．Ｓｈｕ＠１２６．ｃｏｍ摘要　目的　探讨 ｍｉＲＮＡ１６作用不同时间对体外培养的人肺腺癌 Ａ５４９细胞增殖的影响，以及对 ＶＥＧＦＡ表达水平的影响。方法　将 ５０ｎｍｏｌ／Ｌ的 ｍｉＲＮＡ１６和阴性对照序列用 Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００转染进...

    文档格式：PDF | 页数：4 | 浏览次数：40 | 上传日期：2016-03-09 22:20:57 | 文档星级：
    网络出版时间：网络出版地址：ｍｉＲＮＡ１６对肺腺癌 Ａ５４９细胞增殖和 ＶＥＧＦＡ表达水平的影响徐　胜 １ ，束　军 １ ，李晓峰 １ ，程　宇 １ ，沈继龙 ２２０１６－０１－０８接收基金项目：安徽省自然科学基金面上项目（编号：１３０８０８５ＭＨ１４１）；安徽医科大学科研基金资助项目（编号：２０１０ｘｋｊ１１５）作者单位：１ 安徽医科大学第四附属医院呼吸内科，合肥。玻常埃埃玻玻 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室、安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室，合肥。玻常埃埃常沧髡呒蚪：徐　胜，男，硕士研究生；束　军，男，医学博士，硕士生导师，责任作者，Ｅｍａｉｌ：Ｊ．Ｓｈｕ＠１２６．ｃｏｍ摘要　目的　探讨 ｍｉＲＮＡ１６作用不同时间对体外培养的人肺腺癌 Ａ５４９细胞增殖的影响，以及对 ＶＥＧＦＡ表达水平的影响。方法　将 ５０ｎｍｏｌ／Ｌ的 ｍｉＲＮＡ１６和阴性对照序列用 Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００转染进人肺腺癌 Ａ５４９细胞中，通过ｑＲＴＰＣＲ法检测转染后 Ａ５４９细胞中 ｍｉＲＮＡ１６的表达水平，ＭＴＴ法检测转染 ｍｉＲＮＡ１６后细胞的增殖抑制情况，ＥＬＩＳＡ法检测转染 ｍｉＲＮＡ１６后细胞 ＶＥＧＦＡ表达水平。结果　转染培养 ２４ｈ后，测得转染组 ｍｉＲＮＡ１６表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组（Ｐ＜００５）；转染组细胞增殖抑制率明显高于空白对照组和阴性对照组（Ｐ＜００５）；转染组细胞 ＶＥＧＦＡ表达水平较阴性对照组和空白对照组明显降低（Ｐ＜００５）。结论。恚椋遥危联玻保赌芤鹣赴鲋骋种，并且可能与下调 ＶＥＧＦＡ的表达有关。关键词　肺腺癌；ＶＥＧＦＡ；ｍｉＲＮＡ１６；细胞增殖中图分类号。遥罚常矗参南妆曛韭 Ａ 文章编号 １０００－１４９２（２０１６）０４－０４８９－０４　　肺癌是当今世界男性、发达国家女性癌症引起的死亡原因最高的病种，在发展中国家女性病死率仅次于乳腺癌 ［１］ 。其发病率在中国也呈逐年上升趋势，造成了沉重的社会负担。非小细胞肺癌包括鳞癌、腺癌、大细胞癌等，占肺癌总数的 ８０％。而肺腺癌又是占比最多的非小细胞肺癌类型。微。遥危粒ǎ恚椋遥危粒螅┰谌死喽嘀旨膊√乇鹗前┲⒎⑸、发展过程中扮演重要角色，通过对基因的转录后调节实现对癌细胞增殖、凋亡等进程的影响，从而在肿瘤生长、侵袭及迁移方面发挥重要作用。该研究旨在探讨 ｍｉＲＮＡ１６对血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）Ａ是否存在作用，以及是否通过这种作用引起肺腺癌 Ａ５４９细胞增殖情况发生变化。１　 材料与方法１．１　主要试剂和仪器　人肺腺癌 Ａ５４９细胞株由安徽医科大学基础医学院提供。ｈｓａｍｉＲＮＡ１６ｍｉｍｉｃｓ和阴性对照以及 ｍｉＲＮＡ１６ｑＰＣＲＱｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎＫｉｔ和 Ｕ６ｓｎＲＮＡｑＰＣＲＮｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎＫｉｔ均由上海吉玛制药技术有限公司合成。ｈｓａｍｉＲＮＡ１６ｍｉｍｉｃｓ上游引物：５′ＵＡＧＣＡＧＣＡＣＧＵＡＡＡＵＡＵＵＧＧＣＧ３′，下游 引 物：５′ＣＣＡＡＵＡＵＵＵＡＣＧＵＧＣＵＧＣＵＡＵＵ３′；阴性对照上游引物：５′ＵＵＣＵＣＣＧＡＡＣＧＵＧＵＣＡＣＧＵＴＴ３′，下游引物：５′ＡＣＧＵＧＡＣＡＣＧＵＵＣＧＧＡＧＡＡＴＴ３′。胎牛血清购自杭州四季青生物有限公司；ＤＭＥＭ 培养基购自美国 ＨｙＣｌｏｎｅ公司；ＭＴＴ、ＤＭＳＯ 购 自 美 国 Ｓｉｇｍａ公 司；人 ＶＥＧＦＡＥＬＩＳＡ试剂盒购自上海源叶生物有限公司；Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００转染试剂盒购自美国 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；无菌无酶枪头购自美国 Ａｘｙｇｅｎ公司；ＴＲＩｚｏｌ试剂购自杭州诺唯赞公司；ＣＯ２ 细胞培养箱购自德国Ｈｅｒａｅｕｓ公司；ＥＬＸ８００ＵＶ酶标仪购自美国 ＢｉｏＴｅｋ公司；ＡＢＩＰＲＩＳＭ７３００荧光定量 ＰＣＲ仪购自美国ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司；ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００ｃ超微量紫外分光光度计购自美国 Ｔｈｅｒｍｏ公司；电热恒温水浴锅购自上海天平仪器有限公司；超净工作台购自苏州安泰空气技术有限公司。１．２　细胞培养　人肺腺癌 Ａ５４９细胞株用含 ２ｍｍｏｌ／Ｌ的谷氨酰胺和 １０％胎牛血清的 ＤＭＥＭ培养基，在 ３７℃、５％ ＣＯ２ 及饱和湿度的培养箱内常规传代培养，待细胞生长融合至覆盖瓶底 ８０％ ～９０％时用胰酶消化并反复吹打，分瓶传代培养。１．３。瘢遥元玻校茫曳觳庾 ｍｉＲＮＡ１６后肺腺癌Ａ５４９细胞 ｍｉＲＮＡ１６的表达水平　取对数生长期细胞（２×１０５／孔）接种于 ６孔板，待细胞贴壁且融合度达到 ５０％左右进行转染，转染 ｍｉＲＮＡ１６ｍｉｍｉｃｓ浓度为 ５０ｎｍｏｌ／Ｌ。转染按照 Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００说明书进行。实验分 ３组，转染了 ｍｉＲＮＡ１６ｍｉｍｉｃｓ· ９ ８ ４ · 安徽医科大学学报。粒悖簦幔眨睿椋觯澹颍螅椋簦幔簦椋螅停澹洌椋悖椋睿幔欤椋螅粒睿瑁酰椤。玻埃保叮粒穑颍唬担保ǎ矗2016-03-08 08:29:01 http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160308.0829.014.html

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