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    188宝金博页面版: 低温脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达 HIGH-LEVEL EXPRESSION OF A COLD-ADAPTIVELIPASE GENE IN PICHIA PASTORIS

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    内容提示： 第２３卷第４ 期２０ １１年１２月极地研究Ｃ Ｈ Ｉ Ｎ Ｅ Ｓ ＥＪ Ｏ Ｕ Ｒ Ｎ Ａ ＬＯ ＦＰ Ｏ Ｌ Ａ ＲＲ Ｅ Ｓ Ｅ Ａ Ｒ Ｃ ＨＶ ０ １． ２３， Ｎ ｏ ． ４Ｄ ｅ ｃ ｅ ｍ ｂ ｅ ｒ２ ０ ｌ １’ ＾——、 一、 —， ～． 、 —～； 研究论文｛’ 、 ——、 ＾—、 ， —、 ， ｖ、 ＾低温脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达王永杰１’ ２沈继红１， ２丛柏林１’ ２林学政１’ ２黄晓航１’ ２（ １国家海洋局第一海洋研究所， 山东青岛２６ ６ ０ ６ １； ２海洋生物活性物质国家海洋局重点实验室， 山东青岛２６ ６ ０ ６ １）提要通过Ｐ Ｃ Ｒ 技术扩增得到南极适冷菌低温脂肪酶基因ｌｉｐ － ９ ４ ８ ， 将其与表达载体ｐ Ｐ ＩＣ ９ Ｋ 连接后转化巴斯德毕赤酵母Ｇ Ｓ ｌｌ５， 通过筛选得到高效表达低温脂肪酶的酵母菌株， 该菌株发酵４ ８ ｈ 后上清液中脂肪酶活力达到２７ ． ５Ｕ ?ｍ Ｌ ～， 普遍高于其他细菌低温脂肪酶在...

    文档格式：PDF | 页数：6 | 浏览次数：15 | 上传日期：2015-04-14 01:38:51 | 文档星级：
    第２３卷第４ 期２０ １１年１２月极地研究Ｃ Ｈ Ｉ Ｎ Ｅ Ｓ ＥＪ Ｏ Ｕ Ｒ Ｎ Ａ ＬＯ ＦＰ Ｏ Ｌ Ａ ＲＲ Ｅ Ｓ Ｅ Ａ Ｒ Ｃ ＨＶ ０ １． ２３， Ｎ ｏ ． ４Ｄ ｅ ｃ ｅ ｍ ｂ ｅ ｒ２ ０ ｌ １’ ＾——、 一、 —， ～． 、 —～； 研究论文｛’ 、 ——、 ＾—、 ， —、 ， ｖ、 ＾低温脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达王永杰１’ ２沈继红１， ２丛柏林１’ ２林学政１’ ２黄晓航１’ ２（ １国家海洋局第一海洋研究所， 山东青岛２６ ６ ０ ６ １； ２海洋生物活性物质国家海洋局重点实验室， 山东青岛２６ ６ ０ ６ １）提要通过Ｐ Ｃ Ｒ 技术扩增得到南极适冷菌低温脂肪酶基因ｌｉｐ － ９ ４ ８ ， 将其与表达载体ｐ Ｐ ＩＣ ９ Ｋ 连接后转化巴斯德毕赤酵母Ｇ Ｓ ｌｌ５， 通过筛选得到高效表达低温脂肪酶的酵母菌株， 该菌株发酵４ ８ ｈ 后上清液中脂肪酶活力达到２７ ． ５Ｕ ?ｍ Ｌ ～， 普遍高于其他细菌低温脂肪酶在毕赤酵母中的表达活性。关键词低温脂肪酶表达载体ｐ Ｐ ＩＣ ９ Ｋ 巴斯德毕赤酵母高效表达ｄ ｏ ｉ： １０ ． ３７ ２４ ／Ｓ Ｐ ． Ｊ． １０ ８ ４ ． ２０ １１． ０ ０ ２８ ３０ 引言脂肪酶（ １ｉｐ ａ ｓｅ， Ｅ Ｃ ３． １． １． ３）是一类酯键水解酶， 广泛地存在于动物组织、 植物种子和微生物中，它能在油水界面催化天然油脂（ 甘油三酯）， 将其降解为甘油和游离的脂肪酸。 目前工业上使用的脂肪酶基本上都是中温酶， 最适酶活温度一般都在５０ ℃左右…。 同中温酶相比， 低温脂肪酶具有较低的活化能和低温下仍具有较高的酶活力， 应用于工业生产可节约能源、 保护环境旧Ｊ， 在某些领域有着中温酶不可比拟的优越性。 近些年来研究的低温脂肪酶一般由低温微生物分泌产生， 酶的最适反应温度一般都低于４ ０ ℃， 在ｏ ℃仍具高活性旧Ｊ。 Ａ ｒｐ ｉｇ ｎ ｙ 等Ｍ １对静止嗜冷杆菌（ Ｐ ｓｙ ｃｈ ｒ ｏ ｂ ａ ｃｔｅｒ ｉｍ ｍ ｏ ｂ ｉｌｉｓ）Ｂ １０ 所产生的脂肪酶进行研究发现， 其低温脂肪酶的最适作用温度在３５℃左右， Ｏ 。 Ｃ 时仍保留酶活的２０％左右。但低温微生物需要在低温的环境下培养而且表达量通常非常低， 这就严重制约了低温脂肪酶的生产和应用。 应用基因重组技术克隆表达低温脂肪酶基因能更便利地开发利用新的低温酶产品， 从而能使其【收稿日期】［ 基金项目］［ 作者简介］［ 联系作者】在洗涤业、 食品加工、 生物制药、 环境生物技术等领域有更加广阔的应用前景。毕赤酵母表达系统是一种良好的外源基因表达系统， 它能稳定地表达外源基因并将外源蛋白分泌到胞外， 有利于产物的进一步纯化； 另外， 毕赤酵母表达系统除具有原核生物的一些特点外， 如细胞生长快、 易于生长， 遗传操作简单等， 还能将外源基因进行糖基化、 蛋白折叠和形成二硫键等翻译后修饰，有利于真核基因的表达ｂＪ。 近年来， 国内对嗜冷微生物产低温脂肪酶的研究报道在逐年增多， 但大部分还都是对嗜冷微生物的选育、 发酵条件和酶学性质等的研究， 另有一些是研究低温酶在大肠杆菌中的表达。 刘胜浩等∞ｏ 报道了一株南极低温脂肪酶基因在大肠杆菌中的表达。 张金伟等川从南极普利兹湾深海９ ０ ０ Ｉｎ 深的沉积物中提取获得宏基因组Ｄ Ｎ Ａ ， 设计引物得到了一种低温脂肪酶， 并实现了在大肠杆菌中的表达。 卜宪娜等旧１从东海深海底泥分离得到一株产低温碱性脂肪酶的海洋细菌Ｅ ａ ｓｔ—Ｓ ｅａ Ｇ ｓ－ １４ １５， 通过构建基因文库筛选得到了该碱性脂肪酶的基因， 并在大肠杆菌中成功将其表达。 低温脂肪酶在真核表达系统中进行成功表达的报道很２０ １１年２月 收到来稿， ２０ １１年６ 月 收到修改稿８ ６ ３计划“极地特殊海洋微生物资源利用的关键技术研究（ ２０ ０ ７ Ａ Ａ ０ ９ １９ ０ ５）” 资助王永杰， 男， １９ ８ ５生。 硕士， 主要从事极地及海洋生物学研究沈继红。 Ｅ － ｉｎ ａ ｉｌ． － ｓｈ ｅｎ ｊｉｈ ｏ ｎ ｇ ＠ ｒｉｏ ． ｏ ｒｇ ． ｃｎ万方数据

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