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《 农 枚 产 品 开 发 》 19 9 9年 第l期·专 题论 述.天然 抗 辐 射 活 性 物 质 研 究 与 开 发徐 战 李 德 远 刘 嘉 麟 张 声 华摘 要本 文 论 述 从 天 然 物 质 中 提 取杭 辐 射 活 性物质 的 途 径 和 方 法,重 点是具有 杭 辐 射性 的 多 糖、皂贰、香 豆 紊、生 物 城 的 提 取 和 确 定。关健 词杭 辐射 活 性物质 天 然产物 提取研究天然产物 中 的 抗 辐 射 活 性 成 分,首先要 选 择 研究 对象,一 般 来 源有 医 学 典籍 记 载、民 间 经 验、临 床 观 察或 文 献 调 查。一 旦 选 定 对 象 后,就 可 收 集 原材料 开 始 研究。研 究 思 路 大体分 为两 种 方 式,一种是 从原 材 料 中直接 提取分离,得 到 纯 品 后,再 进 行 抗 辐 射 活 性 测 试。这 种方 法 测试样 品 的 数 量少,测 试 结果 易 于 判 断,但 有时 在分 离 提取设 计 不 当 时,会 丢 失 活 性 化 合 物,另 一 种 是 在确 认供 试样 品 原 材料 的 抗辐 射 活 性 后,选 择少数 简便 易行、可靠 灵敏 的 活 性判 断 方法,在 原 材 料提取分离的 各个阶段,将各阶 段 中 间 提 取物 进 行抗 辐 射功 效 测定,并一直 追 踪 出活 性 最 强 部分,在最 终 阶 段得 出 该 活 性 最 强部分的 纯 品。后一 种方法 由 于 以 活 性 为判断指标,在 分离过 程 中 一 般 不 易丢失,因 而 往 往会 发 现 新 的化 合物,另 外,当 分离方 法 或材 料 选 择 不 当,导 致 活 性 物 质的 分离 变 化 时,还 能迅 速 查明原 因,但 这种 方法 测 试样 品 的数量 多、工作 量 大,对 研 究人员知 识 技 能 要 求 高。判 断 某 一原 材料或从中 得 到 的纯 品,是 否 具有 抗 辐射 功能,有许多 测 试 指 标 可 供采 用。由 于 电离 辐 射损 伤最易 引起 人 或 动物造 血 功能 的 变 化,因 此 测 定 外周 血 中对 辐 射 敏 感的 白 细 胞、淋 巴 细 胞 是一 个较简便、灵 敏的方 法,若 以 动物 为试验对象 可 测 定L DS 。 或 3 0或半数死亡 平 均 时间。也 可 测定 脾指数、胸 腺指数,脾 细 胞增殖试验,外 周 血淋 巴 细胞 转化率,畸 变率,骨 髓有 核 细 胞数,骨 髓 嗜多染 红细 胞微 核,骨 髓 细胞 或淋 巴 细 胞 染色 体 畸变、精子 畸形及 精母 细 胞染 色 体 变 异,淋 巴 细胞U D S和D N A合成 等。鉴 于 许 多 抗辐 射性 物 质,能 提 高 人 体 或动物 的 免 疫力,一些 免疫学指 标,也 可作为判断的 依 据。目 前,绝 大多 数 研 究 表 明,具有抗辐射功效的 天 然活 性物质,主 要 是多 糖 类,一 般 存 在 于 植 物、真 菌 ( 如 覃菇类 )、细 菌 以 及 藻 类 中。少 数 贰 类,香 豆 素 类 及生 物 碱类,也 具有较 好 的 抗辐射作 用。一、抗 辐 射 活 性 多 糖 的分 离无论是植物、微 生 物还是 藻 类 中 多 糖,绝 大部 分 由十几 个,甚 至 成百上千 个单糖基,通过贰键 连接 而成,除构成 细胞壁 的纤 维素、木质素等外,许多多 糖 能 溶 于 水或 酸、碱、盐溶 液,而不 溶 于 醇、醚、丙酮 等有 机 溶剂。利用 多 糖 的这种特 性,可 以 进 行分离。一 般情 况 下,若 原材料 中 含 有较 多的 脂 类或 色 素类,应 采 用 低 沸 程石 油 醚或正 已 烷 等 回 流 脱 脂 去 色 素,然 后 用 冷 水 ( 或 热水 )、稀 酸、稀 碱、稀盐溶液提取,对 于 极 性 较 强 的 多 糖,尽量 采 用 不同温 度的 水、稀 碱 提取,并尽量避 免在 酸性 条 件 下 提取,因 为酸性条 件 下能 引 起 多糖 中糖 贰键的断裂,稀碱提取时,有时也会 引起 多 糖降解,并 常 在NZ气 流下 进行,或加 入 硼 氢化钾。无 论 采 用 何种方法,提 取 温 度宜低,时 间不宜 太 长,尤 其 是 采 用 酸提 和 碱提时。提取 后 过 滤 分 离,滤渣可 进行 第 二 次、第 三 次 提取,凡 酸提或碱 提,滤液要迅速中 和 或 透 析。而后 加入 一 定的 体 积 的 甲 醇 和 乙 醇、丙酮 使 沉 淀 析 出 多 糖,该 多 糖 经 反 复溶解与醇析,洗涤干 燥,即得 到 多 糖粗 品。多 糖粗 品 中 往往 还 含 有其 它 杂质,如 蛋 白 质。为去除 游 离 蛋 白质,对微 生 物来源的 多 糖 可采 用 s eva ge法或 三 氟 三氯 乙 烷法,对植物多 糖,采 用 三氯醋酸法。结合蛋 白的去除,还 需 与 蛋 白 酶 法结合 进 行。小分子杂 质 的去 除可采 用流水 透 析结合蒸 馏 水透析,或使 用 连 续 透析仪。还可采 用 超过 滤 法 直 接分离得 到 一 定 分 子量范 围 的多 糖。去 除大部 分 杂质的 多 糖还 需要 进 一 步 的纯化,纯化的方法有 很 多,如有 机 溶剂分部沉淀法、盐析 法、金 属络 合 法、十 六 烷基嗅化 按 法,斐 林 试验法、制 备 性 区 域 电泳 法,及D E A E一 纤维素 柱 法 等等,国 外 采 用L K B柱层 析系 统。我 国 常 使 用D E A E一 纤 维 素 柱 ,结合 酚 酸法检 测,比 较方便,成 本 较低。经 过分 部沉 淀或 上 柱 分 离 得 到 的各级分多 糖,一 般 比 较纯净,且 同一 级 分 内 多 糖分子 量一3一