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    188宝金博页面版: 小麦高频率分生组织细胞有丝分裂同步化诱导及分裂周期蛋白质组变化分析

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    内容提示： 中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(2): 142?148http://www.cjcb.org收稿日期: 2010-07-15　　接受日期: 2010-10-23天津市科技计划 (No.10ZCKFNC00200)资助项目* 通讯作者。 Tel: 020-23766569, E-mail: wzycell@yahoo.com.cn,pykcell@yahoo.com.cn 小麦高频率分生组织细胞有丝分裂同步化诱导及分裂周期蛋白质组变化分析王　炼　尹凤英　段　爽　甘　富　王振英*　彭永康*(天津师范大学生命科学学院 /细胞遗传与分子调控天津市重点实验室 天津 300387)摘要　　利用 Hu和 APM双阻断法可以提高小麦分生组织细胞有丝分裂同...

    文档格式：PDF | 页数：7 | 浏览次数：6 | 上传日期：2014-12-31 21:53:50 | 文档星级：
    中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(2): 142−148http://www.cjcb.org收稿日期: 2010-07-15　　接受日期: 2010-10-23天津市科技计划 (No.10ZCKFNC00200)资助项目* 通讯作者。 Tel: 020-23766569, E-mail: wzycell@yahoo.com.cn,pykcell@yahoo.com.cn 小麦高频率分生组织细胞有丝分裂同步化诱导及分裂周期蛋白质组变化分析王　炼　尹凤英　段　爽　甘　富　王振英*　彭永康*(天津师范大学生命科学学院 /细胞遗传与分子调控天津市重点实验室 天津 300387)摘要　　利用 Hu和 APM双阻断法可以提高小麦分生组织细胞有丝分裂同步化频率, 其中前期达 20%, 中期达 79%, 后 - 末期达 27%。 双向电泳分析结果表明, 小麦分生组织细胞的有丝分裂周期蛋白质呈现出 明显周期性变化, 与间期细胞相比前期中呈现出 5个差异蛋白质斑点, 这5个蛋白质斑点的分子量和等电点分别为 37 kDa/pI 6.6、 38 kDa/pI 6.8、 34 kDa/pI 7.2、 38 kDa/pI 7.5 和15 kDa/pI 6.9, 到了 中期, 发现有 21 kDa/pI 6.3 的蛋白质斑点存在, 而 51 kDa/pI 7.3 和 23 kDa/pI 6.1 蛋白质斑点消失, 分生组织细胞进入后 - 末期分裂期时, 又发现有 37 kDa/pI 6.6、 51 kDa/pI7.3、23 kDa/pI 6.1、 43 kDa/pI 6.6 蛋白 质出 现, 蛋白 质斑点 21 kDa/pI 6.3 消失。 在整个细胞周期运行中, 蛋白质斑点 37 kDa/pI 6.6、 51 kDa/pI 7.3、 23 kDa/pI 6.1 和 21 kDa/pI 6.3 发生了 明显的周期性变化,其中有 2 个蛋白斑点经质谱鉴定为 chromosome segregation protein SMC 和 helicase。 它们的功能涉及染色体的形成与分离、 DNA复制与能量代谢。关键词　　同步化; 有丝分裂; 蛋白质组; MS/MS; 小麦细胞有丝分裂同步化诱导由于可以得到分裂一致的细胞群体, 便于研究诸如有丝分裂周期、 分裂调控、 染色体显微切割和显微克隆及单条染色体基因文库构建等[1~7]许多细胞及分子生物学中的基本问题, 因此, 一直受到许多研究者的高度重视。 比较细胞有丝分裂周期(间期、 前期、 中期和后 - 末期)中蛋白质的变化, 揭示与调控相关蛋白及结构组份,对了解周期调控生化机理有很重要的意义[8], 但这需要有充足的间期、 前期、 中期和后 - 末期分裂相细胞, 而由于植物有丝分裂细胞的不同步, 不能获得不同分裂期的细胞群体, 故需要诱导出高频率的前期及后 - 末期同步化分裂细胞。 然而, 迄今几乎所有植物材料细胞有丝分裂同步化诱导都是以悬浮细胞系为材料且大多侧重于中期[9~11], 直接以根尖为材料诱导细胞分裂同步化是有一定难度的[12,13]。本工作中, 我们用Hu和APM 2种可以影响细胞分裂的药物诱导小麦分生组织有丝分裂不同时期高频率同步化分裂细胞, 对分裂细胞从间期→前期、前期→中期和中期→后 - 末期时相转换过程中蛋白质组的变化及可能与周期调控相关的蛋白质作了比较分析, 以期从蛋白质组角度, 了解高等植物细胞有丝分裂周期调控的生化机理, 为今后植物细胞有丝分裂周期调控生化及分子机理的研究提供一些帮助, 下面报道的是我们实验所得的初步结果。1 材料与方法1.1 小麦分生组织高频率细胞有丝分裂同步化诱导1.1.1 中期同步化诱导 小麦(Triticum aestivum)野二燕1号种子由贵州农业大学提供, 种子在室温下浸泡 24 h, 1.25 mmol/L Hu中处理16 h~24 h (23 ℃), 蒸馏水彻底冲洗以除去Hu, 23 ℃下水培3.5 h, 4 μmol/LAPM 中处理 4 h~6 h, 切取经中期同步化诱导的根尖, 根尖在 70%(V/V)乙醇中固定, 供细胞学观察用,如用于蛋白质组分析, 则需直接制备各样品。1.1.2 前期和后 - 末期同步化诱导 利用 Hu 将细胞阻断在 G1→ S 期, 然后去除 Hu 作用, 恢复生长后在 1 h~24 h 内连续取材, 检测前期细胞部分同步化

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