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第” 卷第１ｌ期水产科学ｖ ０ １． ２７ Ｎ 。 ． １ｌ２塑墨生。∏业┠┝咳⒗锒橐宦×慷椋缌恳幻嗣耍≈撩四茫 Ｄ Ｎ Ａ —Ａ Ｆ Ｌ Ｐ 技术筛选与海胆数量性状相关显著的分子标记邹林林１” ， 周遵春２， 董颖２， 闰喜武１（ １． 大连水产学院生命科学与技术学院， 辽宁大连１１６０ ２３； ２， 辽宁省海洋水产科学研究院， 辽宁省海洋环境监测总站， 辽宁省海洋水产分子生物学重点实验室，辽宁大连１１６ ０ ２ ３ ）摘要： 以光棘球海胆（ 辛）× 中间球海胆（ ６ ）的Ｆ 。 代为材料， 利用ｅ Ｄ Ｎ Ａ —Ａ Ｆ Ｌ Ｐ 技术， 采用单因素方差分析方法， 对与海胆壳径、 体质量和生殖腺质量等主要经济性状相关的分子标记进行筛。 并对这些数量性状与分子标记的相关性进行分析。 结果表明， １０ 对引物共筛选出与壳径、 体质量、 生殖腺质量显著相关ｅ Ｄ Ｎ Ａ —Ａ Ｆ Ｌ Ｐ 标记数分别为４ ３、 ４ ８ 和４ ２个； 极显著相关ｅ Ｄ Ｎ Ａ —Ａ Ｆ Ｌ Ｐ 标记数分别为３８ 、 ３８ 和２３个； 与３个数量性状相关显著的分子标记贡献率分别为７ ． ６ ２％一１２． ４ ８ ％、 ８ ． ０ ２％一１４ ． １５％和７ ． ９ ４ ％一１３． ７ １％； 相关极显著的分子标记贡献率分别为１５． ３６％一３４ ． ５５％、 １１． ８ ８ ％一３９ ． ８ ８ ％和１３． ３９ ％一３２． ２６％。关键词： 光棘球海胆； 中间球海胆； 杂交； ｅＤ Ｎ Ａ —Ａ Ｆ Ｌ Ｐ ； 单因素方差中图分类号： ￥ ９ ６８． ９文献标识码： Ａ文章编号： １０ ０ ３—１１１１（ ２０ ０ ８ ）１１－ ０ ５６１－ ０ ５光棘球海胆（ Ｓ ｔｒｏ ｎ ｇ ｙ ｌｏ ｃｅｎ ｔｒｏ ｔｕ ｓ ｎ ｕ ｄ ｕ ｓ）和中间球海胆（ Ｓ ． ｉｎ ｔｅｒｍ ｅｄ ｉｕ ｓ）均属棘皮动物门、 游在亚门、海胆纲、 正形目、 球海胆科…， 是我国北方沿海地区２个重要的增养殖品种。 国内有很多关于２种海胆育种的研究报道［ ２剖， 直接利用杂交优势和杂种Ｆ 。代进行苗种培育的也有报道【５Ｊ， 但利用分子标记进行辅助育种目前尚处于初始阶段。 本试验目的在于通过单因子方差分析， 筛选出与海胆经济性状相关的标记， 进行分子标记辅助育种以提高选择的准确性和效率。Ｂ ａ ｃ ｈ ｅ ｍ 等阳１发明的ｃ Ｄ Ｎ Ａ —Ａ Ｆ Ｌ Ｐ 技术是研究基因表达的一项新技术， 具有重复性好、 稳定、 可靠的特点， 可对生物体转录组进行全面、 系统的分析，广泛应用于基因表达特性研究、 遗传标记分析和基因分离等方面。 该技术是鉴定未知基因的重要手段， 已经成功鉴定了玉米、 向日葵、 百日草基因＂圳。与Ｄ Ｄ —Ｐ Ｃ Ｒ 相比， ｃＤ Ｎ Ａ —Ａ Ｆ Ｌ Ｐ 技术更适合差异表达基因的分离【ｌ０ １。 Ｂ ｒ ｅ ｙ ｎ ｅ 等¨ ¨ 利用ｅ Ｄ Ｎ Ａ —Ａ Ｆ Ｌ Ｐ 技术开展对基因组数量表达分析的研究， 在Ｂ ａ ｃ ｈ ｅ ｍ 等旧’ 经典ｅ Ｄ Ｎ Ａ —Ａ Ｆ Ｌ Ｐ 技术上加以改进建立了对整个基因组表达研究的新技术。笔者对光棘球海胆早与中间球海胆６单对杂交产生的Ｆ 。 代群体体质量、 壳径和生殖腺３个数量性状进行了ｅ Ｄ Ｎ Ａ —Ａ Ｆ Ｌ Ｐ 分析， 以期研究分子标记与数量性状的相互关系， 找出与海胆数量性状相关显著、 且贡献率较大的ｅ Ｄ Ｎ Ａ —Ａ Ｆ Ｌ Ｐ 标记， 为海胆分子标记辅助育种提供参考依据。１材料与方法１． １材料试验材料为２０ ０ ５年ｌＯ 月 配成的单对种间杂交（ 光棘球海胆９ × 中间球海胆６）的Ｆ 。 代一龄海胆， 样本数量为５６ 个， 样本表型测量情况见表ｌ。１． ２试验方法１． ２． １总Ｒ Ｎ Ａ 提取及ｃ Ｄ Ｎ Ａ 合成取杂交海胆的Ｆ 。 代个体， 按说明书用Ｒ Ｎ Ａ ｉｓｏＲ ｅ ａ ｇ ｅ ｎ ｔ（ Ｔ ａ Ｋ ａ Ｒ ａ ）提取总Ｒ Ｎ Ａ 。 Ｄ Ｎ Ａ ｓｅ Ｉ（ Ｔ ａ Ｋ ａ Ｒ ａ ）处理纯化。 纯化后用１％非变性琼脂糖凝胶和Ｏ ｐ ．ｔｉｚｅｎ ２ １２ ０ ｕ Ｖ 紫外／可见分光光度计检测Ｒ Ｎ Ａ 纯度和浓度。以纯化后的Ｒ Ｎ Ａ 为模板， 以Ｏ ｌｉｇ ｏ （ ｄ Ｔ ）， ８ 为锚定引物， 利用Ｍ —Ｍ Ｌ Ｖ 逆转录试剂盒（ Ｔ ａ Ｋ ａ Ｒ ａ ）反收稿日期： ２０ ０ ７ 一１２—０ ２； 修回日期： ２０ ０ ８ —０ ４ 一１６ ．基金项目： 国家“８ ６３” 计划项目（ ２０ ０ ６Ａ Ａ ｌ０ Ａ ４ １１）．作者简介： 邹林林（ １９ ８ １一）， 女， 顶士研究生； 通讯作者： 周遵春（ １９ ６７ 一）， 男， 研究员， 博士， 研究方向： 海洋生物技术； Ｅ —ｍ ａ ｉｌ： 叫ｎ ．ｃｈ ｕ ｎ ｚ ＠ ｈ ｏ ｔｍ ａ ｉｌ． ｏ Ｄ ｍ ．　万方数据