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    188宝金博页面版: 活性氧激活线粒体凋亡通路是半边旗5F诱导未分化甲状腺癌细胞凋亡的

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    内容提示： 文章编号: 短篇论著 PsL5F诱导人未分化甲状腺癌FRO细胞凋亡与细胞内ROS水平对JNK信号通路的影响 刘智敏 1,2 ，李 梨 1,2 ，朱小云 1,2 ，宋方洲 1,2 （重庆医科大学： 1 生物化学与分子生物学教研室， 2 分子医学与肿瘤研究中心，重庆 400016） 摘 要： 目的 研究半边旗 5F（Pteris semipnnata L 5F，PsL5F）对人未分化甲状腺癌 FRO 细胞的凋亡诱导及其与细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平升高和丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinases, MAPKs）激活的关系。方法 用 MTT 法测定 P...

    文档格式：DOC | 页数：3 | 浏览次数：93 | 上传日期：2017-05-24 10:31:00 | 文档星级：
    文章编号: 短篇论著 PsL5F诱导人未分化甲状腺癌FRO细胞凋亡与细胞内ROS水平对JNK信号通路的影响 刘智敏 1,2 ，李 梨 1,2 ，朱小云 1,2 ，宋方洲 1,2 （重庆医科大学： 1 生物化学与分子生物学教研室， 2 分子医学与肿瘤研究中心，重庆 400016） 摘 要： 目的 研究半边旗 5F（Pteris semipnnata L 5F，PsL5F）对人未分化甲状腺癌 FRO 细胞的凋亡诱导及其与细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平升高和丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinases, MAPKs）激活的关系。方法 用 MTT 法测定 PsL5F 对 FRO 细胞的生长抑制作用；流式细胞术与 Annexin V-FITC／PI 标记法联用检测 PsL5F 对 FRO 细胞的凋亡诱导；用 ROS 特异反应试剂 CM-H 2 DCFDA 标记在流式细胞仪上分析 PsL5F 对 FRO 细胞内 ROS 水平的影响；Western blot方法分析 PsL5F 处理对 FRO 细胞 ERK、JNK 和 p38MAPK 磷酸化水平的影响。结果 PsL5F 对 FRO 细胞具有显著的生长抑制作用，且呈剂量-时间依赖性；PsL5F 可诱导 FRO 细胞凋亡，表现在 100 mg/L 浓度下，磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine, PS）外翻细胞的比例呈时间依赖性逐渐增加；用 PsL5F 处理 FRO 细胞，在 1 h 时细胞内 ROS 水平就表现出明显的升高，GSH 可抑制 PsL5F诱导的细胞内 ROS 水平升高和细胞凋亡到对照水平；PsL5F 处理可使 FRO 细胞 ERK、JNK 和 p38MAPK 磷酸化而被激活，JNK抑制剂 Dicumarol 可减轻 PsL5F 诱导的细胞凋亡，ERK 和 p38MAPK 的抑制剂 PD098059 和 SB203580 反而加剧 PsL5F 诱导的细胞凋亡。结论 PsL5F 对人未分化甲状腺癌 FRO 细胞的生长抑制作用是通过诱导细胞凋亡进行的；细胞内 ROS 水平升高起到了非常重要的作用；PsL5F 处理可导致 FRO 细胞 MAPKs 信号通路激活，其中 JNK 信号通路是促凋亡信号，而 ERK 和 p38MAPK作为生存信号被激活来对抗 PsL5F 诱导的细胞凋亡。 关键词：半边旗 5F；未分化甲状腺癌；细胞凋亡；活性氧；丝裂原蛋白激酶 中图法分类号： 文献标识码：A 未分化甲状腺癌是恶性程度最高预后最差的恶性肿瘤之一，虽然仅占甲状腺癌的 10%，但其中位生存率仅几个月 [1] 。外科手术、放疗、常规化疗都不能明显提高其生存率。因此，对于未分化甲状腺癌迫切需要寻求新的治疗方案和开发新的治疗药物。 半边旗是一种中草药，属凤尾蕨科植物。半边旗5F（Pteris semipnnata L 5F，PsL5F）是从半边旗中分离出来的一种二萜类化合物，化学名为 11α-羟基-15-氧 -16- 烯 - 对 映 贝 壳 杉 烷 -19 酸 (ent-11α-hydroxy- 15-oxo- kaur-16-en-19-oic acid)，具有显著的体内外抗肿瘤活性，且毒副作用小 [2] ，但它在甲状腺癌治疗及其细胞凋亡诱导机制方面的研究鲜有报道。本研究以人未分化甲状腺癌 FRO 细胞为模型，探讨 PsL5F 对未分化甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响以及细胞内ROS 和 MAPKs 信号通路在其中所起的作用。 ———————————— 作者简介：刘智敏，女，四川省成都市人，博士，教授，主要从事细胞增殖、凋亡及其信号转导方面的研究, 发表论文 40 余篇。电话：13206185238，E-mail: liuzm9999@yahoo.com.cn 收稿日期：2008-09-24；修回日期：2008-11-06 1 材料与方法 1.1 细胞株和主要试剂 人未分化甲状腺癌细胞株FRO由香港中文大学Chen教授惠赠，半边旗二萜类化合物PsL5F(分子式C 20 H 28 O 4 ，相对分子质量332)由广东医学院梁念慈教授提供，四甲基偶氮唑蓝（MTT）、还原型谷胱甘肽（GSH）、Dicumarol购于Sigma公 司 ， PD098059 和 SB203580 购 于 Promega 公 司 ，CM-H 2 DCFDA、Annexin V-FITC／PI试剂盒购于Molecular Probes公司，RPMI1640培养基、小牛血清为Gibco公司产品，鼠抗磷酸化JNK1/2、 ERK1/2 和p38MAPK为Cell Signaling公司产品，羊抗β-actin、HRP标记的羊抗鼠、鼠抗羊二抗为Santa Cruz公司产品。 1.2 细胞培养 人未分化甲状腺癌FRO细胞贴壁培养于含10％小牛血清、100 U/ml 的青霉素和100 μg/ml链霉素的RPMI1640培养基中，置37 ℃，5％ CO 2 饱和湿度孵箱常规传代培养，取对数生长期细胞进行实验。 1.3 MTT法测定细胞增殖抑制率 以5×10 4 ml -1 活细胞数接种于96孔培养板中, 每孔200 μl。待其完全贴壁后，更换含不同浓度PsL5F（0、50、100、150 mg/L）

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