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188宝金博页面版: 转染细胞的显微镜观测

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内容提示: 转染的细胞荧光观测 Option A :活细胞观测 1、 培养细胞经 Lipofectamine3000 转染后 16-48h 的细胞,直接将培养皿放在荧光/共聚焦显微镜下观测细胞的荧光。 Option B :贴壁细胞固定后观测(需用 4 孔 chamber slide 培养) 1、 准备 15ml DPBS,2ml 4% PFA,2ml mounting medium(封固剂)(含 DAPI 或PI),盖玻片; 2、 将 chamber slide 孔中的培养基吸去,加 1ml DPBS,温和地左右移动两三次洗slide。弃去 DPBS,缓慢加入 500ul 4% PFA,室温下孵育 20min; 3、 轻轻地吸去 PFA,用 1ml DPBS 洗 5min,重复洗 3-4 次; 4、 温和地吸去 DPBS,用封固剂和盖玻片封固滑片,在荧光/共聚焦显微镜...

文档格式:DOCX | 页数:1 | 浏览次数:65 | 上传日期:2017-05-12 19:31:04 | 文档星级:
转染的细胞荧光观测 Option A :活细胞观测 1、 培养细胞经 Lipofectamine3000 转染后 16-48h 的细胞,直接将培养皿放在荧光/共聚焦显微镜下观测细胞的荧光。 Option B :贴壁细胞固定后观测(需用 4 孔 chamber slide 培养) 1、 准备 15ml DPBS,2ml 4% PFA,2ml mounting medium(封固剂)(含 DAPI 或PI),盖玻片; 2、 将 chamber slide 孔中的培养基吸去,加 1ml DPBS,温和地左右移动两三次洗slide。弃去 DPBS,缓慢加入 500ul 4% PFA,室温下孵育 20min; 3、 轻轻地吸去 PFA,用 1ml DPBS 洗 5min,重复洗 3-4 次; 4、 温和地吸去 DPBS,用封固剂和盖玻片封固滑片,在荧光/共聚焦显微镜下观测细胞。 Option C :未贴壁细胞固定后观测(可直接用培养皿培养) 1、 准备 15ml DPBS,2ml 4% PFA,2ml mounting medium(封固剂)(含 DAPI 或PI),poly L-lysine 包被的玻片,盖玻片; 2、 将60mm培养皿中培养基转移到15ml离心管中,420g离心5min。弃去上清,加入 5ml DPBS,用枪吹打两次重悬,再次 420g 离心 5min; 3、 吸去 DPBS,缓慢加入 2ml 4% PFA,重悬细胞,室温下孵育 20min,420g 离心 5min; 4、 离心后,轻轻吸去 PFA,用 1ml DPBS 洗 5min,重复洗 3-4 次。最后一次洗后,用少量 DPBS(10-20ul)重悬细胞,将其滴加到 poly L-lysine 或 poly D-lysine包被的玻片上; 5、 等待 2-3min,使细胞贴到玻片表面,加少量封固剂,轻轻盖上盖玻片。在荧光/共聚焦显微镜下观测细胞。 (注意:对于固定的细胞观测荧光,各步骤容易丢失细胞,故需要起始细胞量大并小心操作,一次实验可以将几个孔细胞收集在一起)

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