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    188宝金博页面版: 双向电泳技术概述及植物蛋白质组学中的研究

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    内容提示： 双向电泳技术概述及植物蛋白质组学中的研究 □□摘□要： 随着人类基因组计划的完成， 生命科学研究进入了后基因组时代， 蛋白质组学应运而生。 双向电泳(Two-dimensional electrophoresis， 2-DE)技术由 O'Farrell[1]介绍以来，以其可在同一块胶上可同时分离数千种蛋白的优势在蛋白质组学研究中一直处于核心地位，特别是与质谱分析技术相结合， 满足了准确、 快速、 高通量的蛋白质组学研究需求[2~4]。 笔者将重点介绍双向电泳检测技术的原理， 各蛋白分离方法以及叙述了该技术在植物蛋白质组学的应用， 并对其今后的发展作了 展望， 为其科研的进一步开发利用提供参考...

    文档格式：DOC | 页数：4 | 浏览次数：21 | 上传日期：2015-03-29 12:19:13 | 文档星级：
    双向电泳技术概述及植物蛋白质组学中的研究 □□摘□要： 随着人类基因组计划的完成， 生命科学研究进入了后基因组时代， 蛋白质组学应运而生。 双向电泳(Two-dimensional electrophoresis， 2-DE)技术由 O'Farrell[1]介绍以来，以其可在同一块胶上可同时分离数千种蛋白的优势在蛋白质组学研究中一直处于核心地位，特别是与质谱分析技术相结合， 满足了准确、 快速、 高通量的蛋白质组学研究需求[2~4]。 笔者将重点介绍双向电泳检测技术的原理， 各蛋白分离方法以及叙述了该技术在植物蛋白质组学的应用， 并对其今后的发展作了 展望， 为其科研的进一步开发利用提供参考。 □□关键词： 双向电泳， 蛋白质， 检测方法 一、 概 述 蛋白质组学的概念是在1994 年由Wilkins首先提出来的， 它是从整体水平上研究细胞内蛋白质的组成及其活动规律。 双向电泳是蛋白质组学研究中分离纯化蛋白质的主要方法之一。 它首先根据样品中蛋白质等电点不同进行等电聚焦(IEF)作为第1向， 然后再按照蛋白质分子量大小不同进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 作为第2向， 经染色后可以在凝胶上得到大量的蛋白质点， 从而得到样品的蛋白质表达图谱。 与单独的IEF或SDS-PAGE 相比(只能分辩几十种到几百种蛋白) ， 可以从组织或细胞提取物中分辨出几千种到几万种蛋白质， 大大提高了对样品的分辨率。 根据双向电泳中第1向等电聚焦方法的不同， 双向电泳主要分为2个主要类型， ISO-DALT(等电点-道尔顿) 和IPG-DALT(固相pH梯度-道尔顿) 双向电泳白质组学研究中均获得了广泛的应用。 但是由于检测方法的限制， 分离后的结果往往因为检测方法灵敏度不高或者由于对后续深入研究的强干扰作用而导致可靠性降低， 甚至出现误判， 可以说检测技术在一定程度上制约了电泳技术的发展， 因此， 对双向电泳后蛋白质的检测一直都是研究人员关注的问题。 双向电泳的检测方法包括有机染料染色法， 金属离子还原法(双向电泳中最常用的是银染法) ， 荧光染色法(是较新的一种染色方法， 它与银染的灵敏度相近， 但是速度快， 时间短， 实验结果较银染可靠) ， 放射自显影法， 还有不常用的基于对盐离子结合能力不同的负染法， 近年来出现的syproruby 系列荧光染色不影响质谱分析而且灵敏度比银染还要高[5]双向电泳技术作为蛋白质分离、 纯化及鉴定的重要手段， 在植物等蛋[4]。 二、 2-DE 分离蛋白的方法 2-DE 面临的挑战是高分辨率和重复性. 高分辨率确保蛋白最大程度的分离，高重复性允许进行凝胶间配比。 对 2-DE 而言， 有 3 种方法分离蛋白： 1) ISO-DALT(isoelectric focus)以 O’Farrell’s 技术为基础。 第一向应用载体两性电解质(carrier ampholyte， CA)， 在管胶内建立 pH 梯度。 随着聚焦时间的延长， pH梯度不稳， 易产生阴极漂移。 2) NEPHGE(non-equilibrium pH gradient electrophoresis) 用 于 分 离 碱 性 蛋 白(pH>7.0)。 如果聚焦达到平衡状态， 碱性蛋白会离开凝胶基质而丢失。 因此， 在等电区域的迁移须在平衡状态之前完成， 但很难控制。

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