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    188宝金博页面版: 广东1株H3N2亚型犬流感病毒的分离与鉴定(论文)

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    内容提示： Chinese Journal of V eteri nary Medicine 中国兽 医杂志2014 年(第 50 卷 )第 2 期 7 广东1株 H3 N2亚型犬流感病毒 的分离与鉴定 赵明喜 ，赖芳芳 ，贾 坤 ，李华涛 ，李守军 (华南农业大学兽医学院 ，广东 广州 510642) 摘要 ：本试验采集一只具有流感临床症状的病犬鼻咽拭子经常规处理后接种 SPF 鸡胚，分离到一株流感病毒 ，并对其进 行鉴定及生物学特性研究 。结果表明，该毒株对 1％鸡红细胞的血凝价为26，能被 H3亚型流感病毒阳性血清中和，与H1、 H5、H7、H9亚型阳性血清和阴性血清无交叉反应。序列分析显示 ，该毒株的HA 和 NA 基因核苷酸序列分别与犬流感病毒 (CIV) ...

    文档格式：PDF | 页数：3 | 浏览次数：28 | 上传日期：2015-11-18 04:08:36 | 文档星级：
    Chinese Journal of V eteri nary Medicine 中国兽 医杂志2014 年(第 50 卷 )第 2 期 7 广东1株 H3 N2亚型犬流感病毒 的分离与鉴定 赵明喜 ，赖芳芳 ，贾 坤 ，李华涛 ，李守军 (华南农业大学兽医学院 ，广东 广州 510642) 摘要 ：本试验采集一只具有流感临床症状的病犬鼻咽拭子经常规处理后接种 SPF 鸡胚，分离到一株流感病毒 ，并对其进 行鉴定及生物学特性研究 。结果表明，该毒株对 1％鸡红细胞的血凝价为26，能被 H3亚型流感病毒阳性血清中和，与H1、 H5、H7、H9亚型阳性血清和阴性血清无交叉反应。序列分析显示 ，该毒株的HA 和 NA 基因核苷酸序列分别与犬流感病毒 (CIV) H3 和N2 亚型的病毒株同源性最高。确定该毒株为H3N2亚型CIV ，并将其命名为A／canine／Guangdon 叭／20l 1。 关键词 ：犬流感病毒 ；H3N2亚型 ；RT—PCR ；序列分析 中图分类号：$852．65 5 文献标志码 ：A 文章编号：0529—6005(2014)02—0007一()3 I solati on an d id en tifi cation of H 3N2 su bty p e c ani ne in fl u en za v ir us in G u an gdon g ZHAO Ming—xi，LA I Fang—fang ，J IA Kun，LI Hua—tao，LI Shou-jun (South China Agri cultural University，Guangzhou 5 10642，China) A bstra ct：In this study ，an infl uenza virus was isolate d from the allantoic fl uid of affected chick embryos ，which were used for vi— EllS inoculation fr om nasopharyngeal swabs ，and analyzed for its biolog ical characteri stics．T he R BC hemagglutination titer of the iso— lated strain is 26 and was identifi ed as H3 subtype infl uenza virus by hemagglutination inhibition assay with the positive selqlm．S e — quenee analysis showed that the haemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) gene of the isolated virus had the highest sequence identity with the H3N2 subtype canine infl ue nza virus．T hese results suggested that the isolated viru s belonge d to H 3N2 subtype ca - nine infl uenza、viru s and was the cause fo r the decrease of dog． K ey w or ds：C ani ne Infl uenza viru s ；H 3 N2 subtype ；R T —PC R ；Sequence anal ysis Corresponding author：LI Shou-jun A 型流感病毒属于正黏病毒科的成员，是具有 高度传染性的流感病原体之一 ，多种动物包括鸟 类 、哺乳动物和人类都对其易感n 。A 型流感病毒 感染在家畜中研究广泛 ，但在伴侣动物如犬猫中 研究较少 ，伴侣动物与人类和家畜接触紧密 ，因 此 ，研究 A 型流感病毒感染伴侣动物具有更重要 的兽医学和公共卫生学意义 。犬猫本不是流感 病毒的易感动物，但 目前研究表明，犬猫在 自然和 试验条件下对一些亚 型的流感病毒 易感 ，H3N8亚 型犬流感病毒 ( CIV ) 和 H3N2亚 型 CI'v 在美 国和韩 国已引起严重 的经济损失[3-51。 2006年 ，中国广 东首次分离 到禽 源 H3N2 亚型 CIV’，该病毒引起犬发生咳嗽 、喷嚏、脓鼻涕 、低热 等症状 】。2009 年一2010 年 ，浙江 、江苏 、北 京 、辽 宁等地 也先 后分 离到 H3N2亚型 CIV ，CIV 已在 沿海地区广泛存在 ，应 引起研究人员 的高度重 收稿 日期 ：2013- 02- 21 基金项 目：国家自然科学基金(31372448)；广东省 自然科学基金 f$2012020011111、$2013020013858)；广州市科技计划项目( 2011B02 0306007) ；公益性行业(农业)科研专项( 201303042) 作者简介 ：赵明喜(1987一)，男 ，硕士生 ，主要从事犬流感分子生 物学研究，E—mail：4O7848395@qq．COB 通讯作者 ：李守年 ，E—mail ：shoujunli@scau．edu．CB 视。本文从 1只疑似病犬中分离到 1株H3N2亚型 CIV ，并对其进行研究 ，以期为华南地区c I 的检测 和防控提供依据 。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1病例来源2011年 l2月 ，从外院转诊到华 南农业大学动物医院病犬 ，4月龄，前夜呕吐，呕吐 物为绿色 液体 ，次 日腹 泻物呈泥状 ，腹泻次数多 ， 精神沉郁，食欲废绝，体温4O℃，可视黏膜苍白。 1．1．2主要试剂病毒 RNA 提取试剂盒和胶 回收试 剂盒( 均购 自OMEGA 公司 ) ；病毒 DNA 提取试剂盒 (购 白天根生化科技( 北京 )有限公司) ；M—MLV 反转 录酶、RNA 酶抑制剂、dNTPs和 TaqDNA 聚合酶(均 购 自TaKaRa公 司) 。 1．2病原分离和鉴定 1．2．1 引物设 计与 合成 应 用 DNAstar(Versi0n 5．07)及 Primer Premier(V ersion 5．0)基 因分析 软件 ， 对 GenBank 收录的多个犬瘟热病毒( CDV ) 、犬细小 病毒(cpv )、H3N2亚型CIV 的基因序列分别进行 比 较 ，CDV 和 CPV 各设计 1对鉴定 引物 ，CIV 设 计 11 对扩增8 个基因片段的引物 ，其中PA 、PB1和PB2 分两段设计 。引物由上海英潍捷基公司合成。

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