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188宝金博页面版: GUS染色方法(自配型)

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内容提示: GUS 染色方法 1、GUS 染色液的配置 (1)GUS 缓冲液 组分 PBS EDTA 亚铁氰化钾 铁氰化钾 Triton-100 终浓度(mM) - 10 0.5 0.5 0.1% 以 50mL 为例,所需量 至 50mL 50uL 50uL 50uL 50uL 【注意】在配置 GUS 缓冲液前,应配置如下组分的浓缩液: PBS:100mM 磷酸盐缓冲液(PH=7.0) EDTA:配置为 10mM/mL 的浓缩液 亚铁氰化钾:配置为 0.5mM/mL 的浓缩液 铁氰化钾:配置为 0.5mM/mL 的浓缩液 (2)GUS 浓缩液 在 EP 管称取 10mg X-gluc 粉末,加入少量 DMSO 或 N,N-二甲基甲酰胺助溶(一般溶解10mg 粉未约 10~20ul 二甲基甲酰胺)配置为 10 mg/ml 的浓缩液, 然后用 GUS 缓冲液配成终浓...

文档格式:DOCX | 页数:1 | 浏览次数:312 | 上传日期:2023-10-10 21:38:55 | 文档星级:
GUS 染色方法 1、GUS 染色液的配置 (1)GUS 缓冲液 组分 PBS EDTA 亚铁氰化钾 铁氰化钾 Triton-100 终浓度(mM) - 10 0.5 0.5 0.1% 以 50mL 为例,所需量 至 50mL 50uL 50uL 50uL 50uL 【注意】在配置 GUS 缓冲液前,应配置如下组分的浓缩液: PBS:100mM 磷酸盐缓冲液(PH=7.0) EDTA:配置为 10mM/mL 的浓缩液 亚铁氰化钾:配置为 0.5mM/mL 的浓缩液 铁氰化钾:配置为 0.5mM/mL 的浓缩液 (2)GUS 浓缩液 在 EP 管称取 10mg X-gluc 粉末,加入少量 DMSO 或 N,N-二甲基甲酰胺助溶(一般溶解10mg 粉未约 10~20ul 二甲基甲酰胺)配置为 10 mg/ml 的浓缩液, 然后用 GUS 缓冲液配成终浓度为 1 mg/ml 的 GUS 染液,避光保存,现配现用; (3)GUS 工作液 按照以下比例配置即可,现配现用,4℃最多存放 7 天 2、染色步骤 (1)取材:将根茎、叶片、花瓣等组织剪成小片,放到 1.5ml 离心管; 【注意】:染色用植物材料的制备方法根据特定组织和器官类型而有差异。对于拟南芥的根/花/叶片,以及烟草幼苗的根,可以不做任何预处理直接进行染色;但是,对于烟草和马铃薯的茎和叶片需要先剪切成薄片(~1-3mm)再进行染色。而更大的组织样品,需用真空渗透法来促进染色工作液渗入细胞。 (2)染色:加入适量体积现配好的染色工作液,以完全覆盖材料为准。铝箔纸包好,室温孵育 3h-过夜。同时设置阴性和阳性对照实验; (3)脱色:将染色好的材料转入 70%酒精中脱色 2-3 次,直至阴性对照材料变为白色。GUS染色阳性的蓝色斑点非常稳定,不会被酒精脱色。 (4)观察:大部分 GUS 染色阳性的蓝色斑点肉眼能观察到,然而,有些材料可能蓝色斑点很细微,需要显微镜下才能观察到。【注意】:白色背景上的蓝色斑点即为 GUS 表达位点。 组分 GUS 工作液配置总量(mL) 1 5 10 20 50 GUS 浓缩液(uL) 100 500 1000 2000 5000 GUS 缓冲液(mL) 0.9 4.5 9 18 45

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