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２０ ０ ９ 年１月Ｊａ ｎ ｕ ａ ｒ ｙ２ ０ ０ ９色谱Ｖ ０ １． ２７ Ｎ ｏ ． １Ｃ ｈ ｉｎ ｅ ｓｅＪｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆＣ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ２ ４ ～２ ８３一氨基－ ９ 一乙基咔唑衍生化寡糖混合物的高效液相色谱分离及激光解吸电离飞行时间质谱分析牟青，张英，黄琳娟，王仲孚＋｝（ 西北大学生命科学学院西部资源生物与现代生物技术省部共建188宝金博页面版部重点实验室， 陕西西安７ １０ ０ ６ ９ ）。 。摘要： 建立了以３－ 氨基一９ 一乙基咔唑（ Ａ Ｅ Ｃ ）为衍生化试剂对寡糖的标记方法。 寡糖的还原端与Ａ Ｅ Ｃ 的伯氨基反应生成烯胺， 再被Ｎ ａ Ｂ Ｈ ， Ｃ Ｎ 还原为二级胺， 使得寡糖被Ａ Ｅ Ｃ 标记。 衍生物通过反相高效液相色谱分离纯化， 采用的色谱柱为Ｗ ａ ｔｅ ｒ ｓ Ｓ ｙ ｍ ｍ ｅ ｔｒ ｙＣ １８ 柱（ ３． ９ｍ ｍｘ １５ ０ｍ ｍ ， ５“ｍ ）， 乙腈和乙酸铵水溶液（ ｐ Ｈ４ ． ５）为流动相， 梯度洗脱， 在２５４ ｎ ｍ 波长处检测， 并以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行分析。 在此衍生化条件和色谱条件下，葡寡糖衍生物分离良好， 并且Ａ Ｅ Ｃ 衍生可显著提高葡寡糖的质谱检测灵敏度。 该方法适用于寡糖的分离纯化和结构分析， 并与生物质谱具有良好的兼容性， 表明该方法在微量寡糖链分析方面有广阔的应用前景。关键词： 高效液相色谱（ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ）； 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱； ３一氨基一９ 一乙基咔唑； 寡糖中图分类号： ０ ６ ５８文献标识码： Ａ文章编号： １０ ０ ０ ． ８ ７ １３（ ２０ ０ ９ ）Ｏ ｌ－ ０ ０ ２４ —０ ５栏目类别： 研究论文Ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉｏ ｎａ ｎ ｄ ｉｄ ｅ ｎ ｔｉｆ ｉｃ ａ ｔｉｏ ｎ ｏ ｆｏ ｌｉｇ ｏ ｓａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉｄ ｅ ８ ｌａ ｂ ｅ ｌｅ ｄ ｗ ｉｔｈ３一ａ ｍ ｉｎ ｏ － ９ 一ｅ ｔｈ ｙ ｌｃ ａ ｒ ｂ ａ ｚ ｏ ｌｅ ｕ ｓｉｎ ｇ ｈ ｉｇ ｈ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍ ａ ｎ ｃ ｅｌｉｑ ｕ ｉｄｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙａ ｎ ｄｍ ａ ｔｒ ｉｘ —ａ ｓｓｉｓｔｅ ｄ ｌａ ｓｅ ｒ ｄ ｅ ｓｏ ｒ ｐ ｔｉｏ ｎ ／ｉｏ ｎ ｉｚ ａ ｔｉｏ ｎｔｉｍ ｅ—ｏ ｆ － ｆ ｌｉｇ ｈ ｔｍ ａ ｓｓｓｐ ｅ ｃ ｔｒ ｏ ｍ ｅ ｔｒ ｙＭ Ｏ ＵＱ ｉｎ ｇ ， Ｚ Ｈ Ａ Ｎ ＧＹ ｉｎ ｇ ， Ｈ Ｕ Ａ Ｎ ＧＬ ｉｎ ｊｕ ａ ｒ ｌ， Ｗ Ａ Ｎ ＧＺ ｈ ｏ ｎ ｇ ｆ ｕ 。（ Ｋ ｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｏ ｆＲ ｅ ｓｏ ｕ ｒ ｃ ｅＢ ｉｏ ｌｏ ｇ ｙａ ｎ ｄＢ ｉｏ ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌｏ ｇ ｙｉｎＷ ｅ ｓｔｅ ｒ ｎＣ ｈ ｉｎ ａ ， Ｍ ｉｎ ｉｓｔｒ ｙ ｏ ｆＥ ｄ ｕ ｃ ａ ｔｉｏ ｎ ，Ｓ ｈ ａ ａ ｎ ｘ ｉ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉｎ ｃ ｉａ ｌＫ ｅ ｙＬ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔｏ ｒ ｙ ｏ ｆＢ ｉｏ ｔｅｃｈ ｎ ｏ ｌｏ ｇ ｙ ， Ｌ ｉｆ ｅＳ ｃ ｉｅ ｎ ｃ ｅＣ ｏ ｌｌｅｇ ｅ，娩Ｎ ｏ ｒ ｔｈ ｗ ｅ ｓｔＵ ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ， 尉’ 描＇ｌ７ １０ ０ ６ ９ ， Ｃ ｈ ｉｎ ａ ）Ａ ｂ ｓｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ａｐ ｒ ｅ —ｃ ｏ ｌｕ ｍ ｎｄ ｅ ｒ ｉｖ ａ ｔｉｚ ａ ｔｉｏ ｎ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｆ ｏ ｒ ｔｈ ｅ ｄ ｅ ｔｅ ｒ ｍ ｉｎ ａ ｔｉｏ ｎｏ ｆｏ ｌｉｇ ｏ ｓａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉｄ ｅ ｓｂ ａ ｓｅ ｄｏ ｎ ａｌａ ｂ ｅ ｌｉｎ ｇ ｒ ｅ ａ ｇ ｅ ｎ ｔ ３一ａ ｍ ｉｎ ｏ ?９ ?ｅ ｔｈ ｙ ｌｃ ａ ｒ ｂ ａ ｚ ｏ ｌｅ （ Ａ Ｅ Ｃ ）Ｗ ａ ｓ ｐ ｒ ｏ ｐ ｏ ｓｅ ｄ ． Ｔ ｈ ｅ ｅ ｎ ａ ｍ ｉｎ ｅ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｇ ｅｎ —ｅ ｒ ａ ｔｅ ｄｂ ｙｔｈ ｅ ｒ ｅ ａ ｃ ｔｉｏ ｎ ｏ ｆｔ ｈ ｅｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ｉｎ ｇｅ ｎ ｄ ｓ ｏ ｆｏ ｌｉｇ ｏ ｓａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉｄ ｅ ｓａ ｎ ｄ ｔｈ ｅｐ ｒ ｉｍ ａ ｒ ｙａ ｍ ｉｎ ｅ ｓ ｏ ｆＡ Ｅ Ｃ ，ａ ｎ ｄ ｔｈ ｅ ｎ ｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｔｏｓｅ ｃ ｏ ｎ ｄ ａ ｒ ｙａ ｍ ｉｎ ｅ ｓｂ ｙ Ｎ ａ Ｂ Ｈ ３Ｃ Ｎ ， ｍ ａ ｋ ｉｎ ｇ ｏ ｌｉｇ ｏ ｓａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉｄ ｅ ｓｌａ ｂ ｅ ｌｅ ｄｂ ｙＡ Ｅ Ｃ ．Ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ ｒ ｉｖ ａ ｔｉｖ ｅ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｓｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔｅ ｄ ｂ ｙ ｒ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓｅ ｄ － ｐ ｈ ａ ｓｅ ｈ ｉｇ ｈ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍ ａ ｎ ｃ ｅ ｌｉｑ ｕ ｉｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ（ Ｒ Ｐ － Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ）， ａ ｎ ｄｔｈ ｅ ｎ ｄ ｉｒ ｅ ｃ ｔｌｙ ａ ｎ ａ ｌｙ ｚ ｅ ｄ ｂ ｙｍ ａ ｔｒ ｉｘ —ａ ｓｓｉｓｔｅ ｄｌａ ｓｅｒｄ ｅ ｓｏ ｒ ｐ ｔｉｏ ｎ ／ｉｏ ｎ ｉｚ ａ ｔｉｏ ｎｔｉｌｄ ｅ － ｏ ｆ －ｆ ｌｉｇ ｈ ｔｍ ａ ｓｓｓｐ ｅ ｃ ｔｒ ｏ ｍ ｅ ｔｒ ｙ （ Ｍ Ａ Ｌ Ｄ Ｉ—Ｔ Ｏ Ｆ —Ｍ Ｓ ）． Ｔ ｈ ｅＨ Ｐ Ｌ Ｃｓｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔｉｏ ｎＷ ａ ｓ ｃ ａ ｒ ｒ ｉｅ ｄｏ ｕ ｔ ｏ ｎ ａＷ ａ ｔｅ ｒ ｓＳ ｙ ｍ ｍ ｅ ｔｒ ｙＣ １８ ｃ ｏ ｌｕ ｍ ｎ （ ３． ９ｍ ｍｘ１５０ｍ ｍ ， ５斗ｍ ）ｗ ｉｔｈａｇ ｒ ａ ｄ ｉｅ ｎ ｔ ｅｌｕ ｔｉｏ ｎ （ ａ ｃｅｔｏ ｎ ｉｔｒ ｉｌｅａ ｎ ｄ ａ ｍ —ｍ ｏ ｎ ｉｕ ｍａ ｃ ｅ ｔ ａ ｔ ｅ ａ ｓ ｍ ｏ ｂ ｉｌｅｐ ｈ ａ ｓｅ ｓａ ｔ ａ ｆ ｌｏ ｗｒ ａ ｔｅ ｏ ｆ １ ｍ Ｌ ／ｍ ｉｎ ）ａ ｎ ｄ ｕ ｌｔｒ ａ ｖ ｉｏ ｌｅ ｔ ｄ ｅ ｔｅ ｃ ｔｉｏ ｎ ａ ｔ ２ ５４ｎ ｍ ． Ｕ ｎ ｄ ｅ ｒｔｈ ｅｏ ｐ ｔｉｍ ｉｚ ｅ ｄｄ ｅ ｒ ｉｖ ａ ｔｉｚ ａ ｔｉｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃｃ ｏ ｎ ｄ ｉｔｉｏ ｎ ｓ， ｔｈ ｅ ｄ ｅ ｒ ｉｖ ａ ｔｉｚ ｅ ｄｏ ｌｉｇ ｏ ｓａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉｄ ｅ ｓｗ ｅ ｒ ｅ ｓｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔｅ ｄ ， ａ ｎ ｄｔｈ ｅ ｄ ｅ ｒ ｉｖ ａ ｔｉｚ ａ ｔｉｏ ｎ ｗ ｉｔｈＡ Ｅ Ｃｉｎ ｃｒ ｅ ａ ｓｅ ｄ ｔｈ ｅｓｅ ｎ ｓｉｔｉｖ ｉｔｙｏ ｆＭ Ｓｄ ｅ ｔｅ ｃ ｔｉｏ ｎ ． Ｔ ｈ ｅｄ ｅ ｖ ｅ ｌｏ ｐ ｅ ｄｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｆ ｏ ｒｔｈ ｅ ａ ｎ ａ ｌｙ ｓｉｓｏ ｆｏ ｌｉｇ ｏ ｓａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉｄ ｅ ｓｉｓｓａ ｔｉｓｆ ａ ｃｔｏ ｒｙ ．Ｋ ｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ： ｈ ｉｇ ｈ ｐ ｅｒｆ ｏ ｒｍ ａ ｎ ｃｅｆ ｉｑ ｕ ｉｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ （ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ）； ｍ ａ ｔｒ ｉｘ —ａ ｓｓｉｓｔｅ ｄｌａ ｓｅ ｒ ｄ ｅ ｓｏ ｒ ｐ —ｔｉｏ ｎ Ｙ ｉｏ ｎ ｉｚ ａ ｔｉｏ ｎｔｉｍ ｅ． ｏ ｆ － ｆ ｌｉｇ ｈ ｔｍ ａ ｓｓｓｐ ｅ ｃ ｔｒ ｏ ｍ ｅ ｔｒ ｙ （ Ｍ Ａ Ｌ Ｄ Ｉ－ Ｔ Ｏ Ｆ —Ｍ Ｓ ）； ３一ａ ｍ ｉｎ ｏ ?９ 一ｅ ｔｈ ｙ ｌｃ ａ ｒ ｂ ａ ｚ ｏ ｌｅ ；ｏ Ｈ ｇ ｏ ｓａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉｄ ｅ ｓ糖类物质在生物体的生命活动中起着重要的作用， 其作为信息分子参与受精、 发育、 分化， 维持神经系统和免疫系统平衡等各个方面； 炎症和自身免疫疾病、 老化、 癌细胞的异常增殖和转换、 病原体感染?通讯联系人： 王仲孚， 教授． Ｔ ｅｌ： （ ０ ２９ ）８ ８ ３０ ３４ ８ ４ ， Ｅ ． ｍ ａ ｉｌ： ｗ ａ ｎ ｇ ｚｈ ｆ ＠ ｎ ｗ ｕ ． ｅｄ ｕ ． ｃｎ ．基金项目： 国家高技术研究发展计划（ “８ ６ ３” 计划）项目（ Ｎ ｏ ｓ． ２０ ０ ６ Ａ Ａ ０ ２２１４ ６ ， ２０ ０ ７ Ａ Ａ ｌ０ ２３３８ 和２０ ０ ７ Ａ Ａ ０ ９ １６ ０ ０ ）收稿日期： ２０ ０ ８ ４ ）９ － ０ ５　万方数据