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第３ ５卷第１期渔业科学进展Ｖ ０ １． ３５， Ｎ ｏ ． １２ ０１ ４ 年２ 月Ｐ Ｒ Ｏ Ｇ Ｒ Ｅ Ｓ Ｓ ＩＮＦ Ｉ Ｓ Ｈ Ｅ Ｒ ＹＳ Ｃ Ｉ Ｅ Ｎ Ｃ Ｅ ＳＦ ｅ ｂ ． ， ２０ １４半滑舌：螅 ｘ ９ 基因Ｂ Ａ Ｃ 克隆的筛选及Ｂ Ａ Ｃ － Ｆ ＩＳ Ｈ 定位孙建１’ ２陈松林２＋谢明树２邵长伟２（ １大连海洋大学水产与生命学院， １１６ ０ ２３）（ ２农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所， 青岛２６ ６ ０ ７ １）摘要以本实验室构建的半滑舌鳎Ｂ Ａ Ｃ 文库为基。 通过对其进行有序混合， 构建了两步Ｐ Ｃ Ｒ筛选体系； 对性另４ 决定相关的ｓｏ ｚ ９ 基因的序列设计特异性引物， 筛选获得阳性单一Ｂ Ａ Ｃ 克隆。 利用Ｂ Ａ Ｃ —Ｆ ＩＳ Ｈ 技术将包含５０ ２９ 基因的Ｂ Ａ Ｃ 克隆定位在半滑舌鳎染色体上。 结果显示， ５０ ２９ 基因在雌、 雄半滑舌鳎的一对常染色体的长臂上分别存在两个杂交信号位点， 信号稳定且特异。 研究证实了该文库筛选体系的有效性； 首次实现了对性别相关的ｓｏ ｚ ９ 基因在半滑舌鳎染色体上的定位， 其结果为揭示５０ ２９ 基因参与鱼类性别控制的机制提供了重要基础。关键词半滑舌鳎； ｓｏ ｚ ９ 基因； Ｂ Ａ Ｃ 文库； 荧光原位杂交； 染色体中图分类号Ｑ ９ ５９ ． ４ ８ ６文献标志码Ａ文章编号１０００一７ ０７ ５（ ２０１４）０１—００３４一０７Ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉｎ ｇａ ｎ ｄ Ｂ Ａ Ｃ —Ｆ ＩＳ Ｈｌｏ ｃ ａ ｔｉｎ ｇｏ ｆ ｔｈ ｅ ｓＤ ． ｘ ９ｇ ｅ ｎ ｅＢ Ａ Ｃｃ ｌｏ ｎ ｅ ｏ ｆｈ ａ ｌｆ － ｓｍ ｏ ｏ ｔｈｔｏ ｎ ｇ ｕ ｅ ｓｏ ｌｅ（ ≯， ｚｏ ｇ Ｚ Ｄ ｓｓｚｌｓｓＰ ｍ Ｚ Ｚ 口ｅ 访ｓＳ Ｕ Ｎ Ｊｉａ ｎｌ， ２Ｃ Ｈ Ｅ ＮＳ ｏ ｎ ｇ 一１ｉｎ ２。Ｘ Ｉ ＥＭ ｉｎ ｇ —ｓｈ ｕ ２Ｓ Ｈ Ａ ＯＣ ｈ ａ ｎ ｇ —ｗ ｅ ｉ２（ １Ｃ ｏ ｌｌｅ ｇ ｅｏ ｆ Ｆ ｉｓｈ ｅ ｒ ｉｅ ｓａ ｎ ｄＬ ｉｆ ｅ Ｓ ｃ ｉｅ ｎ ｃ ｅ ， Ｄ ａ “ａ ｎ０ ｃ ｅ ａ ｎＵ ｎ ｉｖ ｅ ｒ ｓｉｔｙ ， １１６ ０ ２ ３）（ ２Ｋ ｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔｏ ｒ ｙｏ ｆ Ｓ ｕ ｓｔａ ｉｎ ａ ｂ 】 ｅＤ ｅ ｖ ｅ ｌｏ ｐ ｍ ｅ ｎ ｔｏ ｆ Ｍ ａ ｒ ｉｎ ｅＦ ｉｓｈ ｅｒｉｅｓ， Ｍ ｉｎ ｉｓｔｒｙ 。 ｆＡ ｇ ｒ ｉｃｕ ｌｔｕ ｒ ｅ ，Ｙ ｅ ｌｌｏ ｗＳ ｅ ａ Ｆ ｉｓｈ ｅ ｒ ｉｅ ｓ Ｒ ｅ ｓｅ ａ ｒ ｃ ｈ Ｉｎ ｓｔｉｔｕ ｔｅ ， Ｃ ｈ ｉｎ ｅ ｓｅＡ ｃ ａ ｄ ｅ ｍ ｙｏ ｆＦ ｉｓｈ ｅ ｒ ｙ Ｓ ｃｉｅｎ ｃｅｓ， Ｑ ｉｎ ｇ ｄ ａ ｏ２ ６ ６ ０ ７ １）Ａ Ｂ Ｓ Ｔ Ｒ Ａ Ｃ ＴＡｔｗ ｏ —ｓｔｅ ｐＰ Ｃ Ｒｓｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉｎ ｇ ｓｙ ｓｔｅ ｍ 。 ｆｔｈ ｅ ｈ ａ ｌｆ —ｓｍ ｏ ｏ ｔｈｔ ｏ ｎ ｇ ｕ ｅｓ０ １ｅＣ ｙ ７ ２Ｄ ｇ Ｚ Ｄ ｓ５“ｓ５ｅｍ ｉＺ 口Ｐ 口； ５ Ｂ Ａ Ｃｌｉｂ ｒ ａ ｒ ｙｗ ａ ｓ ｃ ｏ ｎ ｓｔｒ ｕ ｃ ｔｅ ｄｂ ｙａ ｎｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｌｙ ｍ ｉｘ ｉｎ ｇｏ ｆ ｔｈ ｅＢ Ａ Ｃｃ ｌｏ ｎ ｅ ｓ． Ｕ ｓｉｎ ｇｔｈ ｅｓｐ ｅ—ｃｉｆ ｉｃｐ ｒ ｉｍ ｅ ｒ ｓ ｄ ｅ ｓｉｇ ｎ ｅ ｄｔｏ ５０ ２ ９ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ，ｏ ｎ ｅ ｐ 。 ｓｉｔｉＶ ｅ ｓｉｎ ９ １ｅＢ Ａ Ｃｃ ｌｏ ｎ ｅ ｗ ａ ｓ ｓｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｅ ｄ ｏ ｕ ｔｆ ｒ ｏ ｍｔｈ ｅ Ｂ Ａ Ｃｌｉｂ ｒ ａ ｒ ｙ ． Ｉｎｔｈ ｉｓｓｔｕ ｄ ｙ ， ｔｈ ｅ ｓｏ ｚ ９ 一ｃ ｏ ｎ ｔａ ｉｎ ｉｎ ｇＢ Ａ Ｃｃ ｌｏ ｎ ｅ ， Ｐ １７ Ｐ ２１， ｗ ａ ｓ ｍ ａ ｐ ｐ ｅ ｄｔｏｔｈ ｅ１０ ｎ ｇａ ｒ ｍ ｓ ｏ ｆ ａｐ ａ ｉｒｏ ｆｈ ｏ ｍ ｏ ｌｏ ｇ ｏ ｕ ｓｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ｏ ｓｏ ｍ ｅ ｓ ｏ ｆ Ｃ ．５ｅ ｍ ｉ如Ｐ 说ｓｕ ｓｉｎ ｇｔｈ ｅｔｅ ｃ ｈ ｎ ０ １０ ９ ｙｏ ｆＢ Ａ Ｃ —Ｆ ＩＳ Ｈ ．Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓｕ ｌｔ ｓｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｔｈ ａ ｔ ｔｈ ｅ ｒ ｅ ａ ｒ ｅ ｔｗ ｏｈ ｙ ｂ ｒ ｉｄ ｉｚ ａ ｔｉｏ ｎ ｓｉｇ ｎ ａ ｌｓｉｔｅｓ ｉｎ ａｐ ａ ｉｒ 。 ｆａ ｕ ｔｏ —ｓｏ ｍ ｅ ｓ ｏ ｆ ｔｈ ｅ ｆ ｅ ｍ ａ ｌｅ ａ ｎ ｄ ｍ ａ ｌｅ Ｃ ． ｓＰ ７ ＂ｉＺ 口ｇ 训ｉ， ａ ｎ ｄ ｔｈ ｅ ｓｉｇ ｎ ａ ｌｓ ａ ｒ ｅ ｓｔａ ｂ ｌｅ ａ ｎ ｄｓｐ ｅｃｉｆ ｉｃ．Ｔ ｈ ｉｓｓｔｕ ｄ ｙｃ ｏ ｎ ｆ ｉｒ ｍ ｅ ｄ 七ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔｉｖ ｅ ｎ ｅ ｓｓ ｏ ｆ ｔｈ ｅ ｔｗ ｏ —ｓｔｅ ｐ Ｐ Ｃ Ｒｓｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉｎ ｇ ｓｙ ｓｔｅ ｍａ ｎ ｄ ａ ｃ ｈ ｉｅ ｖ ｅ ｄ ｔｈ ｅｐ ｏ ｓｉｔｉｏ ｎ ｉｎ ｇｏ ｆ ｓＤ ｚ ９ ｇ ｅ ｎ ｅ ｏ ｎ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ｏ ｓｏ ｍ ｅ ｓ ｏ ｆＣ ．阳优Ｚ 肠Ｐ 秒ｉ占．Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓｕ ｌｔｓ ｗ ｉｌｌ ｆ ａ ｃｉｌｉｔａ ｔｅ ｆ ｕ ｒ ｔｈ ｅ ｒ ｓｔｕ ｄ ｉｅ ｓ ｏ ｎ ｔｈ ｅ５０ ２ ９ｇ ｅ ｎ ｅｏ ｆＣ ．ｓ已， 儿Ｚ Ｚ 以Ｐ 铆ｉｓ ａ ｎ ｄ ｗ ｉｌｌｐ ｒ ｏ ｖ ｉｄ ｅａ ｎｉｍ ｐ ｏ ｒ ｔａ ｎ ｔｂ ａ ｓｉｓ ｆ ｏ ｒ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ｏ ｓｏ ｍ ａ ｌ ｉｄ ｅ ｎ ｔｉｆ ｉｃａ ｔｉｏ ｎ ｏ ｆｔｈ ｉｓ ｓＤ ｅ ｃｉｅ ｓ．国家自然科学基金重点项目（ ３１１３０ ０ ５７ ）和国家自然科学基金项目（ ４ １０ ０ ６ １０ ７ ）共同资助＊ 通讯作者。 Ｅ —ｍ ａ ｉｌ： ｃｈ ｅｎ ｓｌ＠ ｙ ｓｍ ， ａ ｃ． ｃｎ收稿日期： ２０ １３一０ ３一ｌｏ ； 接受日期： ２０ １３一０ ４０ ９作者简介： 孙建（ １９ ８ ７ 一）， 男， 硕士研究生， 主要从事鱼类遗传育种研究。 Ｅ —ｍ ａ ｉｌ： ｓｕ ｎ ｊｉａ ｎ ＠ １２６． ｃｏ “万方数据