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安徽农业科学．J ournal of Anhui Agri ．Sci ．2012，40(23)：1 1707。11756责任编辑陈玉敏责任校对卢瑶富甘氨酸果蝇抗菌肽SK砸对子宫颈癌细胞H el a增殖的研究冯志国1” ，刘慧娟1’ -，李涛2?，陈正望2院分子生物物理188宝金博页面版部重点实验室，湖北武汉430074；3．重庆警察学院，重庆401331)( 1．信阳师范学院生命科学学院．河南信阳464000；2．华中科技大学生命科学与技术学摘要SK。是一个编码了N 端为丝氨酸、C端为赖氨酸且含有66个氨基酸残基的富甘氨酸果蝇抗茵肤。sKH 怠吞灭宫颈癌细胞H el a，经SK。处理后子宫颈癌细胞H el a的贴壁性很快被破坏，大量细胞悬浮并死亡。通过盯I’ I' 试验，发现SK“ 能够昱著抑制子宫颈癌细胞H el a的增殖。采用膜片钳技术，研究表明sK*能在DRG细胞上形成阳离子通道。这说明sK。对癌细胞的杀灭机制可能为细胞膜出现大量穿孔、原生质泄漏．细胞破裂死亡。关键词果蝇；富甘氨酸抗茵肽；膜片钳；细胞增殖；阳离子通道中图分类号S188文献标识码A文章编号0517—66l l ( 2012) 23一11707-01．Studyof theGl yci ne．ri ch Antl bacteri al Pe硼deofIkesophna SK_onthe Prol i ferati on of Cervi ces C锄他rCel l s( IM a)FEN GZK- guo et柚(Col l egeof Li feSci ences。Xi nyangN orm alAbstractApol ypepti deSK*，a66一am i no aci dpepti dew i thN —Sefi ne( S) and C-Lysi ne( K) ，i sagl yci ne-ri chanti bacteri all a．SK*coul dki l l cervi cesdependent characteri zati on and di ed．O bserved by^rI．r．SK“ CO ul d rem arkabl y i nhi bi t theprol i ferati onof the cervi ces cancerceU s( H el a) ．U si ngpatch cl am ptechni que。i t w as found out that SKMcoul d f ormcati oni c channel s i n D RGcel l s．The m echani 8mm i Ight be to perforate the础m em -brahe and l ead to protopl asml eak and cancer cel l sruptare anddeath．Key w ordsDrosophi l a；Gl ysi ne．ri ch anti bacteri al pepti des：Patch cl am p；Cel I prol i ferati on；Cati oni c channeIU ni versi ty，Xi nyang，H enan464000)pepti deofD瞄opIl i -cancer ceH s( H el a) ．After treatedby st％，m ostcervi ces cancercel l s( H el a) suspended for thedestroyed anchorage—、昆虫等无脊椎动物不具备特异性免疫系统，但昆虫的脂肪体会产生各种抗菌肽来应对损伤和感染? 。昆虫抗菌肽是一类碱性小分子多肽，来源于不同昆虫的抗菌肽大都具有以下特征：①分子量。嘉2—7 kD；②氨基酸数目为20～60个，其种类和顺序往往具有同源性；③等电点10左右。呈碱性；④N 端亲水，富含色氨酸、赖氨酸和精氨酸残基，c端疏水，富含甘氨酸和脯氨酸，容易插入细胞膜；⑤结构中存在着2个O t螺旋，2个螺旋之间有由甘氨酸和脯氨酸形成的铰链区域；⑥热稳定性强，高温对其抗菌活性影响较。虎叨栽松锵赴泻芨咔夜闫椎纳本钚，而对真核生物细胞无毒性；⑧昆虫抗菌肽是半抗原，无免疫原性"1。昆虫抗菌肽已被证实具有多种生物学活性"’ ，具体包括：①具有抗细菌的作用；②对真菌有杀伤作用；③可以有效地杀灭寄生于人类或动物体内的寄生虫；④抗病毒的作用；⑤对癌细胞也有杀灭作用。Sl ( 66是一个编码了N 端为丝氨酸、C端为赖氨酸且含有66个氨基酸残基的富甘氨酸果蝇抗菌肽H 一” 。基于此．笔者研究了富甘氨酸果蝇抗菌肽SK酌对子宫颈癌细胞H el a增殖的影响，并采用膜片钳技术探讨了其可能的作用机制。1材料与方法1．1材料1．1．1细胞株和试剂。H el a细胞株购自美国菌种保存中心。试验所用化学试剂为分析纯。1．1．2仪器。倒置显微镜。奥林巴斯GX41；酶联免疫检测仪，FLEX STATI O N3；EPC- 9膜片钳放大器和PU LSE+LO CK基金项目国家自然科学基金项目( 30370647) ；信阳师范学院和河南省青年骨干教师项目。作者简介冯志国( 1979一) ，男，河南安阳人，副教授。从事生物活性多肤的教学与科研工作。收稿日期2012-04．1l_二IN 软件。H eka El ectroni cs Lam brechtG erm anyo1．2方法M rr法检测sK酯对子宫颈癌细胞H el a增殖的影响。对子宫颈癌细胞H el a按常规方法进行复苏、培养与传代。当增殖106个细胞时。收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100山，铺板使待测细胞密度为l 000～10000孔，5％C02、37℃条件下孵育。直至细胞单层铺满孔底。加入浓度梯度的药物，5％C02、37℃孵育16-48 h，每孔加入20山M Tr溶液( 5 m g／m l 。即0．5％M ，I-I' )，继续培养4 h。每孔加入100山三联液( 0．012m ol ／L H CI、10％SDS、5％异丁醇) ，放人培养箱于37．℃条件下孵育过夜，在酶联免疫检测仅oDm 。处测定各孔的吸光值。1．2．2全细胞膜片钳技术。采用标准全细胞膜片钳技术，将已知浓度的捌菌肽样品导入细胞，研究其对细胞的影响。膜电位钳制在一60 m V，电极入水电阻2—4 M Q ，90％一95％Rs补偿，试验在室温下( 印一25℃) 进行。采集到的信号用1．2．12．9kH z滤波，采样频率爿15．6 kl -Iz。和膜电位数据用IGO RPro5．03( W aveM etri cs，Lake O sw e，O R) 分析。篓篓篓皂12 h24 h36 h图lSK。对子宫颈癌细胞H da细胞存活率的影响( 下转第11756页)加∞舳回们加0万方数据