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研究报告中国酿造2011 年 第 5 期总第 230 期· 87·生长因子和乳化剂对热带假丝酵母产十二碳二元酸发酵的影响王佳新1，丁海燕1，何连芳1，孙玉梅1*，张巨滨2（ 1. 大连工业大学 生物工程学院，辽宁 大连 116034； 2. 哈尔滨啤酒（ 沈阳） 有限公司，辽宁 沈阳 110013）摘要： 通过液体摇瓶分批发酵，研究生长因子和乳化剂对热带假丝酵母（ Candida tropicalis） 利用正十二烷发酵产十二碳二元酸的影响，生长因子为多种氨基酸和维生素，乳化剂为吐温 60 和吐温 80。 研究结果表明，对产酸的促进作用依次为维生素 B2，丝氨酸，维生素 B1和脯氨酸。 添加 60μg/L 维生素 B2可维持较高产酸水平，添加 1. 0g/L 丝氨酸比不添加丝氨酸的产酸量约提高 30% 。 与不添加乳化剂相比，添加吐温的菌体产酸量明显提高，添加 10g/L 吐温 60 和吐温 80 的最大产酸量分别提高 51. 84% 和 48. 14% 。添加吐温 60 还能发酵缩短周期，添加 20g/L 吐温 60 的菌体产酸量最高可达 81. 63g/L。关键词： 热带假丝酵母；十二碳二元酸；生长因子；乳化剂中 图分类号： TQ920． 6文献标识码： A文章编号：0254 －5071 （ 2011 ）05 －0087 －03Influence of growth factor and emulsifier on dodecanedioic acid fermentation by Candida tropicalisWANG Jiaxin1， DING Haiyan1， HE Lianfang1， SUN Yumei1*，ZHANG Jubin2（ 1. School of Bioengineering， Dalian Polytechnic University， Dalian 116034， China；2. Harbin Brewery （ Shenyang） Co. ， Ltd. ， Shenyang 110013， China）Abstract：The influence of growth factor and emulsifier on dodecanedioic acid （ DC12） production from dodecane by Candida tropicalis was studiedby submerged fermentation in shake flask. The growth factors included several vitamins and amino acids， and the emulsifiers were Tween 60 andTween 80. The results indicated that the descending order of promotion effect on DC12production was vitamin B2＞ serine ＞ vitamin B1＞ praline.The DC12productivity could be maintained at a higher level with the addition of60μg/L vitamin B2． Compared with non serine addition， the DC12productivity was increased by 30% with the addition of 1. 0g/L serine. Compared with non emulsifier addition， the DC12productivity was signifi-cantly increased by Tween. The highest DC12productivity was increased by 51. 84% or 48. 14% with the addition of 10g/L Tween 60 or 10g/LTween 80， respectively. Moreover， the fermentation process could be shortened by the addition of Tween 60. When 20g/L Tween 60 was added，the highest DC12productivity was 81. 63g/L.Key words：Candida tropicalis； dodecanedioic acid； growth factor； emulsifier收稿日期：2011 －01 －19基金项目： 大连市科技攻关项目（ 20010618）作者简介： 王佳新（ 1985 － ） ，男，硕士研究生，研究方向为微生物代谢控制发酵；孙玉梅*，教授，通讯作者。长链二元酸是碳链中含有 10 个以上碳原子的饱和与不饱和的脂肪族二羧酸，是制造香料、高性能工程塑料、树脂、热熔胶、纤维、电介质、润滑油、油漆和涂料、医药和农药的重要原料，因此其市场需求很大［1- 4 ］。 化学法制备长链二元酸需要高温高压、防火防爆，而且产品产量及纯度不易达不到工业生产要求。 20 世纪 80 年代成功地开发了微生物发 酵 法生产长链二元 酸， 至 90 年代已 进入大规模生［5- 6 ］。产阶段培养条件对热带假丝酵母发酵产十二碳二元酸（ DC12）有重要影响，在以往考察温度与摇瓶转速以及碳源种类和浓度、氮源种类和浓度对菌体产酸的影响的基础上［7］，本实验通过摇瓶发酵，研究生长因子氨基酸和维生素以及乳化剂吐温 －60 和吐温 － 80 对热带假丝酵母（ Candida tropica-lis） 发酵产十二碳二元酸的影响。1 实验1. 1 材料与方法1. 1. 1 菌种热带假丝酵母（ Candida tropicalis） 126- 1 菌株： 大连工业大学院生物工程学院实验室提供。1. 1. 2 培养基固体斜面培养基：5°Bé 麦芽汁加入 2% 琼脂。液体种子培养基：KH2PO48g/L，蔗糖 5g/L，尿素 3g/L，玉米浆 3g/L，酵母膏 5g/L，正十二烷 85. 5g/L，用自 来水溶解，自然 pH 值。初始发酵培养基： Na2HPO46g/L， KH2PO42g/L， NaCl1g/L，MgSO41. 5g/L，玉米浆 1g/L，酵母膏 5g/L，蔗糖 5g/L，尿素 2g/L，正十二烷 171. 0g/L，自来水溶解，自然 pH 值。以上培养基均于 0. 1MPa 灭菌 20min。 培养基中的尿素和正十二烷在 0. 05MPa 灭菌 20min，接种时加入。1. 1. 3 培养方法种子液制备：于液体种子培养基中（ 25mL/250mL） 接 2环斜面活化培养的种子，于 30℃、210r/min 摇床培养 48h。产酸发酵：在初始发酵培养基中或加有生长因子或乳化剂的初始发酵培养基中（ 25mL/250mL） 接入 6% 液体种子，于 30℃、210r/min 摇床培养 144h，每 24h 用 2. 5mol/L 氢氧化钠调发酵液 pH 值为 7. 5 ～8. 0。