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中华消化杂志 2002 年 【月第 22 卷第 【 期Chin I u 』 uary 2002，V。 l 22．N 3353 5 H ill P A ．D w ye r K M ，P ow er D A C he m ic ia tesl in al 11sr Ll(k 1( )h 【 ru 1ion in sy ste mi c lupu~ ery the ma t~ us duc L0 in1 es tinal s?” h m uscle ( 收藕 日期 ： 200 【07 23 J ( 本史编辑 ： 夏维新) 大 鼠 胃 溃 疡 及 自愈 过 程 中 胃 泌 素 、生 长 抑 素 与 G 、 D 细胞变化关 系的实验研 究 孙 风蓬 宋于刚程蔚赵彤 胃泌 素 、 牛 长抑 素等调控着 消化道 的分泌 、 运 动 、 吸 收 血流和细胞营养 等功 能。肖溃疡 愈合 过程 中， 神经 、 内分泌 系统参与并调 控 着 炎性侉 }}{ 物 吸收 、 肉芽 增 生和 卜皮 再生 等 本实验 ， 检测大 鼠胃溃疡 段 自愈过程中血蔽 、 胃液 、 胃安 黏膜组织中 的胃泌素和生 长抑索 ． G、 D 细胞数 目和面积 ， 并 分析 其动态变化 规律 厦关系 ．时植删 胃窦黏膜 组织 中 、材料与方法 1 动物及分组 ： 雄性 W istar 大 鼠 49 只 ． 体 重 200～260 g ( 中山医科大学实验动物 中心) ． 随机分为 7 组 ， 每组 7 只 ． 分 别为造模手 术 后 第 4 、 7 、 10 14 、 21、 28 天取 材 组 和 正 常 对 照 组 2 方法 ： ( 【 ) 造模 ： 6 个 取材组 大鼠采 用冰 己酸性溃疡 制 作方法 ， 建立 胃溃疡模型 ． 正常对照组 大 鼠不做任 何处理? (2 ) 皿浆样 本处理 ： 开腹 ， 外胸 ． 直 视下 心室 内取m 4 n 】 ， 加 人 4 】 1 50 万 U 抑肤 酶 60 uI 10 ％ EDT A ， 3 500 rprn 离心 I 5 min， 取上清液置 70。 C 冻存 ：( 3) 胃液样 本处理 ： 开腹 后 ， 分 别从幽门端 和由口腔经食 管向 胃内插 ^ 塑料管 ， 用 pH 7 0 、 35。 C 左右生理 盐水 、 12 rrll／ h 流速灌 胃 2 ml， 加 ^ 40 f 1 50 万 u 抑肽酶 ， 3 500 rpm 离心 l 5 r a in ． 取上清液 置冻存 ，【 4) 胃窦黏膜组织浸 出踱样本处理 ： 分剐在 胃赏溃疡 部位和非溃疡部位荆取黏膜组织约 0 【g． 分析天平 称 热煮沸后 ， 将组 织分别放人 盛有 1 mot／ l 乙酸 1 rni 的组织匀 70℃ ， 加 浆器 中匀装 ． 再用 1 mol／ L 15 raln， 取上清液置a0 H 1 r,-d 中和 ， 3 500 rpm 离心 70。 C 球存 (5 ) 胃室标本处理 ： 分别在 胃窭溃 疡部位和 非溃疡 部位剪 取约 1． 0 cm × 0 5 cm 组 织 ， 4 - 多聚 甲醛固 定 24 h． 常规 脱 水 ． 沿纵 轴方 向石蜡包 埋 ， 4 m 厚莲续切 片。( 6) 胃泌素 、 生 长抑素检 测 ： 采 用放免法 检 测( 胃泌素放免试剂盒 趵 自天 津 干时生 物公 司 、 牛 K 抑索放 免试 剂盎购 自第 二军 医大学神 经生 物学教 研室 ) ， 操稍按说 明书进行。( 7) G、 D 细胞数和面积检测 与定量 分析 ： 采用 免 疫组化 SA BC 法检测 G 、 D 细胞 ( 胃泌素抗体 购 白美 国Sigma 公司 生长抑 素抗 体购 自美 国 Zymed 公 司、 SAHC 试剂 盒购 自武沮博士德生物工程有限公司 ) 。经免疰组化标 记 G 细胞 基金项 目： 广东省重点科技攻关项 目： 1 999] 13 号 作者 峰位 ： 510282广州． 第 军 医大学珠江 医院消化科 ( 孙 蓬 宋 于刚) ， 棱 医学科( 程蔚) ； 第军 医太学病理 学教研 室f赵彤 ) 的每张切片在高倍 镜下 ． 随机将 个视野 的图像 输^ Quar t timct 500 图像分析系统 ( 德 国 [,eica 公 司) 取 5 个视 野的均 数作为这张切 片的 G 、 D 细胞 数 目 面积 。G,q3 细胞 数及 G／ D 细胞 面积为 其比值。 3 统计方洼 ： 备组计量资料数据描 述采用 j ± 。 二 、 结 果 1 血浆 、 胃液 、 胃窦 黏膜组 织 中 胃泌 素 、 生长抑 素 水平 ： 胃溃疡时 ． 大 鼠血浆 、 胃液 、 胃襄黏 膜组织 中 胃泌索均 增 多， 而生 长抑素均减少 ． 随溃疡逐渐 自愈 ． 胃泌素 、 生长抑索 向正 常水平迓 渐饿 复 2 胃窦黏膜 G、 D 细 胞数 目 面积 ， 以及 G ,q3 细胞 数 目、 面积 比值 ： 胃溃疡时 ， 大鼠胃窦黏 膜 G 细胞数增 加 ， D 细胞数 减少 ， G D 细胞面积都有 所减少 ， 随溃疡 白愈， ( 、 D 细胞数 、 面积皆向正常水平逐渐恢 复 溃疡天 鼠 胃蜜 黏膜 (2 -／ 1 9 细抱 数和面积 比值增大 ， 随溃疡 白愈 ． 增大 的 G／ D 细 胞数和 面积 比值逐渐 向正常水平恢 复。 讨论 胃泌素主要 山胃窦及小肠 上部黏膜 的 G 细 胞分 泌 ， 有多种不同的分 子形 式 、 陈存在于血清 和组织外 ． 也存在 于胃液和肠液 中。生 长抑 素为 l4 个氯基 酸组成 的 环肽 ， 亦 有多种分子形式 ， 在体 内分 布 1‘ 分r 泛 。生 长抑素 由 D 细胞 分泌 ． 主要 存在干晒壁 神经 丛 、 胃及胰腺 ． 也存 在于 胃液和肠 液中。胃泌索水平上升可导致基础 胃酸及高峰 酸排量 增加 、 胃萤 白酶和内埘子分 泌增 加 、 上消化 道黏膜 血流 量增加 、 胃 黏膜细胞 营养 及增殖能 力增加 。生长 抑素可抑 制基础 胃酸 和胃蚩 白酶 的分 泌 ， 也 可抑 制 胃泌 素对 胃酸 分泌 的刺 激作 用 G D 细胞在功能 上相互协蒯 ， 在形志上相互联 系和 影 响 在 lF 常大鼠胃肠 黏膜 中 G／ D 细胞 数 目和面积的 比值 是 相对稳定 的， 有利于维持 胃翰道 的正常 功能 ， 故 0 ／ [3细胞 比 值日 T作 为一项重要指标 ， 以了解这两种细 胞功能 的相对 变化 和这种变化对局部 内分泌水 平 的影响” J。率实验 从多 角度 揭示 胃溃疡 时 胃泌 素 、 生 长抑 素的变 化 ， 同时从形 态学 方面 人手 ， 用免症 化方法标记 G 、 f] 缅胞 ， 甩医学 图像分析 系统 对 G D 细胞进行定 量分析 。结 果 提示 ． 胃溃疡 时 G 细 胞合 成分 泌功能九进 ． D 细胞合成分 泌功能 减弱 表 明大 鼠 胃溃 疡是 引起其 G 、 D 细胞 和 胃泌 索 、 ， E 长 抑索 变化 的始 发因素 之一 ， 溃疡 的 白愈过程 与这 些变化之间具有 直接的联系 维普资讯 http://www.cqvip.com