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188宝金博页面版: 猪精液冷冻技术研究

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内容提示: 4 4     猪业科学  S W IN E   IN D U S T R Y   S C IE N C E     2007 年  第5期FEATURE主题策划猪精液冷冻技术研究朱士恩中国农业大学动物科技学院北京  1000941956  年英国人P o lg e  开始研究猪精液的冷冻保存 后来的研究中 利用牛精液冷冻方法冷冻猪精液 解冻后的精子具有活力 但没有受精能力 虽然在19 7 0  年之前有几例猪冻精成功受胎的报道 但其结果不能被重复 1970  年 P o lg e  利用外科腹腔授精法将解冻后的精子直接注入输卵管 并获得83% 的受精卵 随后C ra bo   和  E in a rsso n 19 7 1   G ra h a m   等 197 1P u rsel  和Jo h n so n 19 7 5 相继报道了以常规的子宫颈输精并成功分娩的冻精技术试验结果 证明超低温冷冻保存后...

文档格式:PDF | 页数:4 | 浏览次数:23 | 上传日期:2015-03-19 01:31:37 | 文档星级:
4 4     猪业科学  S W IN E   IN D U S T R Y   S C IE N C E     2007 年  第5期FEATURE主题策划猪精液冷冻技术研究朱士恩中国农业大学动物科技学院北京  1000941956  年英国人P o lg e  开始研究猪精液的冷冻保存 后来的研究中 利用牛精液冷冻方法冷冻猪精液 解冻后的精子具有活力 但没有受精能力 虽然在19 7 0  年之前有几例猪冻精成功受胎的报道 但其结果不能被重复 1970  年 P o lg e  利用外科腹腔授精法将解冻后的精子直接注入输卵管 并获得83% 的受精卵 随后C ra bo   和  E in a rsso n 19 7 1   G ra h a m   等 197 1P u rsel  和Jo h n so n 19 7 5 相继报道了以常规的子宫颈输精并成功分娩的冻精技术试验结果 证明超低温冷冻保存后猪精子仍具有受精能力 此后各国研究者为了把猪的精液冷冻技术应用到养猪生产实践中作了大量的工作 并对操作程序进行不断优化 但冻精的使用仍没有得到大范围推广 主要原因是繁殖成绩不理想1    猪精液冷冻原理猪精液冷冻技术是指利用干冰( - 7 9   ) 液氮( - 196  )液氦( - 269   )等作冷却源 将精液经特殊处理后 保存在超低温状态下 使精子细胞的代谢完全停止 达到长期保存精液的目的 需要使用时经解冻便可用于输精在冷冻过程中 细胞会受到2方面的损害 冷冻时细胞外溶液首先形成部分冰晶 从而使未结冰的部分溶液浓度增高 形成高渗溶液 这时精子内水分向外渗透 导致精子过度脱水 淹渍而死 这就是冰晶化导致的化学性损伤( 也称为溶液效应) 同时细胞内外形成的冰晶对细胞膜及细胞的内部结构产生机械性损害 导致细胞死亡 这是冷冻的物理损伤 损伤的程度一般由冷冻解冻速率和冷冻解冻温度所决定冷冻过程中 细胞内形成冰晶是不可避免的 控制所形成的冰晶的大小和数量 减少或不形成能够对精子造成物理性损伤的大冰晶 而仅维持在微晶状态 就会减少对精子的损伤 为了减少冷冻解冻过程中冰晶对精子的损伤 在冷冻液中添加冷冻保护剂 如卵黄 D M SO 丙二醇 乙二醇 甘油 蔗糖 聚乙烯吡咯烷酮等 同时控制冷冻解冻时的冷冻解冻速率以减少冰晶的形成 避免冰晶对膜的损伤 使精子安全通过0 - 60   低温区域( 冰晶化危险温度区) 从而保证精子存活2    冷冻保存承载工具早期研究中 猪的精液采用玻璃瓶或玻璃试管和较高浓度的甘油溶液进行冷冻保存 后来 牛的粒状干冰方法被应用到猪上 把甘油溶液浓度降到1% 3% 的范围 可以实行快速冷冻降温操作 随后猪精液冷冻又采用5  m L   大型细管 5  m L 不同类型的塑料袋 45  m L   铝袋 1. 72. 0  m L 扁平细管0. 5  m L   中型细管和0. 25  m L   微型细管保存保存承载工具的优缺点第一 5  m L   的大型细管具有1  头份的输精剂量 方便输精 但其表面积/ 容量比较小 内外温差较大 细管中的精子受冷不均匀 达不到理想的冷冻和解冻速率 冷冻解冻后精子活率较低 限制了理想的冷冻和解冻过程 W eitze  等 19 8 7报道 大型细管冷冻猪精液 管周的冷冻速率是中央的3.7 5  倍冻后精子活率显著低于小直径细管第二 5  m L 塑料袋也含有1  头份的输精剂量 表面积/ 容积的比例较大 在冷冻和解冻过程中能够均匀的进行热传递减少了冷冻及解冻的时间 从而减少了冰晶形成对精子的损伤 所以冷冻解冻后精子活率高 但其体积太大 不适合放置在液氮罐中保存 目前改进后的塑料袋 在不改变冷冻效果的前提下 减少其体积以适应在液氮罐中保存 如 FP Flat-P ack 300  m m 22  m m 0. 2  m m 和M F P a  m ultiple  F lat-P a ck 等 这种改进的保存承载工具目前仍处于验证阶段 尚未完全应用于商业生产第三 颗粒 0. 25  m L 0. 5  m L 小型细管和扁平细管 有较大的表面积/ 容量比 其形状适合低温冷冻保存 但颗粒的冷冻精液较难进行不同头份及来源的标记与区分 容易造成交叉污染 且颗:托⌒拖腹芏炒娴木毫刻 1头份的输精剂量一般需要解冻50颗颗粒 10 20根小型细管或2 3根扁平细管因此不利于输精和生产上普遍推广总之 用表面积/ 容积较大的承载工具冷冻精液 可以达到较好的冷冻和解冻速率 提高冷冻效果 而从生产应用的方面考虑 5  m L   细管 平管和塑料袋是比较好的猪冷冻精液承载工具 更值得深入的研究 目前生产实践中 仍以传统的颗粒冷冻和大的细管冷冻为主3    冷冻稀释液及解冻液3. 1    冷冻稀释液稀释液是精子的保护剂 对精液的冷冻效果起决定性作用 目前在大量科研工作者的努力下 已经研制了多种稀释液在猪精液上因存在多种冷冻方法 所以其冷冻稀释液的组成成份也因冷冻方法的不同而不同万方数据

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