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100 中 国 人 兽 共C h in ese J ou rn al of Z oo noses 患 病杂 志 文章 编 号 ： 1002—2694【 2003)01—01 D0—03 温度对酯酶测定法检测淡色库蚊对 DDV P 的抗药性的影响 * 赵 玉 强 甄 天 民 谭 文 彬 徐 秀 来 刘 仑 华 刘 玉冰 摘 要 ： 目的 用 室内多年选育的抗 DDV P 淡色库蚊抗性株在室内和现场进行试验， 以比较 WHO 标准法和微板测定法 在检测蚊虫对 DDVP 抗药性的差别。方法 微板测定法、 生物测定法。结果 淡色 库蚊 进行 DDV P 抗 药性 检测 ， W HO 法结果 与温度 无 关 ， 而 NSE 法结 果 与温 度 有 关 。为 消 除 温度 对 检 测 的影 响 ， 在 缩 短 孵育 时问后， 在 27～31℃对野外淡色库蚊对 DDV P 抗 性测定， NSE 法测定与 WHO 法结果相 同。结论 DDVP 抗 药性可 随外 界 温度 升高 而增 加， 实 际应用 时应 缩短 孵育 时 间加 以纠正 。 关键 词 ： 温度 ； 酯 酶测 定 ； 淡 色 库蚊 ； 抗 药性 中 图分 类号 ： R384 1文献 标识 码 ： A 用 两种方法在温度为 23～32℃范围内分别对 NSE 法检 测蚊虫 的 T em p er a t ur e e f f ec t o f es ter as e m e ns ur a t i on i n det ec t in g t h e D D V P — r esistance o f C x ． P ip ien s p a l lens Z H A O Y uqiang ， Z H E N T ianm in， T AN W enbin ， et al ( Shandong Institute P arasitic Di seases， J ining 272033 ) A B ST R A C T ： A im T o compar e the di ffer ence of the detection of D D V P res istance of mosqui toes bv W H O standar d m en sur ati on a n d mi cro- board mensur ati on wi th sel ected D D V P — re s ist ant Cx P ipi ens pa Uensin li brar y ． M ethod T o check t he D D V P re s ist ance of Cx ． P ip iens pa Uensby tw o m ethods in the temperature range of 23— 32℃ ． R esult T he re s ult of W HO m en s u r ation had no relat ion tO the temperatu r e， while the re s ult 0f non— specific e s terase( NSE ) men s uration is related to temperature． T he detection re s ult was the sa me of the t w o m ethods w le shor t en the incubate tim e． a n d the D D V P re s istant data of fi el d Ca： ． P ip iens pa l i ens Wa s no statisti cal di f ference be t w een abov e-menti one d regul ated N S E m en su r ation and W H O mensuration in the ra n g e of 2 7 1 2 — 3 1" C ． C on cl usi on N S E det e c ti on in s ecti cide- re s istant l evd Carl increa s e w ith the temperatu r e of anvl ronm ent ． a n d the incubate t i me shou ld be shor ted i n order tO m ini sh th e err or ． K E Y W OR D S ．． T emperatur e ； E steroz e men s u r ati on ； Cx ． P ipl e n s pa li ens ； In s ecti ci de-r e s istance 多年来 一直用 W HO 的生物测定法 来评价蚊虫 对杀虫剂 的敏感 性。 由于该方 法有 其不 足之 处 【 1 j 。 故发展 了一 些生 物化学 快速 检 测方法 来弥 补(2- 5 ] 。 生化微板酶 测定法 为其 中之 一， 其可 测定 单个蚊 虫 酯 酶的含量或活性 。本研 究以微板 比色测定法随受 检定 蚊虫 中酯酶含 量 的增加 ， 颜 色 由粉红逐 渐变 成 紫色 。酯酶水平 的增加标 志着对有 机磷药物的抗性 增加 【 ． 7] 。 因此 ， 能将 蚊虫 媒 介群 体 区分 为 “有 机 磷 敏 感型” ( 粉红 色 ) 与“ 有机 磷抵抗 型 ” ( 紫 色) 。为 使 NSE 微板测定法能够 推广应 用， 使之与 标准法具 可 比性， 本 实验观察不 同温度 下用 已知抗 DDV P 的淡 色库蚊抗性 株 和野 外 淡色 库 蚊对 DDV P 的抗性 进 行测 定。 1材 料与方法 1． 1 淡色库蚊敏感 品系和 室 内选育 的抗 DDV P 品系 。 以 及野外捕获 的淡色库 蚊， 测定所 用为 Ⅲ龄幼虫 ， 雌性 成蚊。 1． 2蚊虫处理将单 只蚊虫 放入 一 离 心管 中加 入 100~IPBS( pH 6． 8) 碾 碎 混 匀， 加入 900>IPBS 稀 释 ， 10 000r／ r a in， 5min。取上清液 ， 待用 。 1． 3测试步 骤 先将 100 l 蚊虫 匀 浆 滴入 微 板 孔 中， 每孔再 加 100 l口醋酸萘 酯( p—N A )溶 液 ( 56r a g／ 10m12一丙 醇／ 90mlPBS ) ， 25℃孵 育 10min， 每 孔 再 加 100~1固牢蓝 B 溶 液 ( 100mg／ 100ml 蒸 馏 水 ) ， 待 反应 5min 后 比色 。将微板置于 酶标仪 上 ， 在 550nm 蚊虫本研 究所用 蚊虫 为本 所养 蚊 室饲 养 的 * 山东省 医 学科 学 院资助课题 ( 010808) 作者单位： 山东省寄生虫病防治研究所( 济宁， 272033) 维普资讯 http://www.cqvip.com