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!""# 年 $$ 月%&’()*(+ !""#色谱!"#$%&% ’()*$+, (- !"*(.+/(0*+1"2!"#$ !, %"$ --.$收稿日 期：!""/0"10"1作者简介： 陈2 红， 女， 硕士， 药师， 30)456： +(789(:,,,; <&9=> 8&)>通讯联系人： 张2 丹， 女， 教授， ?(6： （ "!.） .##",11!， 30)456： @77<9A; $-,> 8&)>高效液相色谱法检测替拉扎明中的有关物质陈2 红$， 2 张2 丹!（ $ $ 成都市药品检验所， 四川 成都 -$""""； !$ 四川 大学华西药学院， 四川 成都 -$""/$ ）关键词： 替拉扎明 （ &’()*)+),’-.） ； 有关物质 （ (.#)&./ 0120&)-3.0） ； 校正因子 （ 3"((.3&’"- 4)3&"(）中图分类号： 5-#.2 2 2 文献标识码： 62 2 2 文章编号：$"""7.B$, （ !""#） "-7"-.$ 7"$2 2 替拉扎明 （ 89:） 是一种 肿瘤放疗增敏剂， 其中 已 知 杂质 ;</,$B 为 89: 的 合成中间 体， ;</,," 为 89: 的 可能降解物。 89: 中有关物质的 检测 目 前尚 未见文献报道。 本文建立的检测 89: 中有关物质的高效液相色谱法 （ =9>?） ， 准确、 灵敏、 快速， 可用 于 89: 原料药的质量控制。!" 实验部分!! !" 试剂、 仪器与色谱条件2 2 89: 原 料 药 （ 共 , 批 ） 、 89: 对 照 品（ 含 量 11C 1@ ） 、;</,$B 对照品 （ 含量 1.C 1@ ） ： 四川 大学华西药学院药化教研室提供； ;</,," 对照品 （ 含量 $""C "@ ） ： 四 川 大学华西药学院生物药分试验室合成。 高效液相色谱仪： 日 本岛 津 >?7,A 型泵， ;9B7$"AC* 型 紫 外 检 测 器， ?857!A 型 柱 恒 温 箱。?D(",8.E 色谱工作站 （ 美国） ， <D."/F-. BB!# 型液相色谱进样器 （ 美国） 。 ;9!!"$ 型 G!7!’0 分光光度计 （ 日 本岛津） 。2 2 >1-)( ?$.柱 （ $#" ,, D /C - ,, ’C /C ， # !,） ； 流动相：甲 醇7#" ,,"#H> 磷酸盐缓冲液 （ 体积比为 !"E ."， 用 氢氧化钠调 *= -C # F "C $ ） ； 流速：$C " ,>H,’-； 检测波长：!## -,。!! #" 有关物质检测法2 2 精密称取适量 89: 原料药， 用 流动相溶解并稀释成 "C #I H> 溶液， 用 "C /# !, 滤膜过滤， 取续滤液作为供试品溶液；精密量取适量对照 品， 用 流动 相 稀释成 # ,I H> 溶液， 作为对照溶液。 取对照溶液 !" !> 注入液相色谱仪， 调节仪器灵敏度， 使主成分峰高 约 为 记录 仪满量程的 !"@ G !#@； 再取上述两种溶液各 !" !>， 分别 注入液相 色谱仪， 记录 色谱图至主峰保留时间 的 # 倍。 用 校正因 子对 ;</,$B 和 ;</,,"的峰面积校正后， 其校正峰面积和其他杂质峰面积的总和与对照溶液的主峰面积进行比较， 不得大于 $C "@。#" 结果与讨论#! !" 校正因子测定2 2 取 89: 及 ;</,$B、 ;</,," 对照 品 适量， 用 甲 醇7水 （ 体积比 为 !" E ." ） 溶 解 并 定 容， 得 到 高（ #C "/， #C !"， 1C 1-,IH>） 、 中（ !C #!， !C -"， /C 1. ,I H>） 、 低（ "C #"/， "C #!"，"C 11- ,IH>） 浓度 ! 的 89:、 ;</,$B、 ;</,," 混合溶液。 取!" !> 注入液相色谱仪， 测 定峰面积 "， 并以 89: 为 参比物<， 各杂质 ; 的校正因子为 #， 则据 #H（ "0H!0） H （ "<H!<） ， 得;</,$B 和 ;</,," 的校正因子分别为 "C .1 和 $C !B。#! #" 流动相干扰考察2 2 精密量取流动相 !" !> 进样， 记录色谱图至主成分峰保留时间的 # 倍。 结果发现流动相仅在 , ,’- 前有较弱吸收，其峰面积仅占对照液主峰面积的 "C #@ 左右， 对有关物质检测基本无干扰。#! $" 线性关系及检测限2 2 精密称取 89:、 ;</,$B、 ;</,," 对照品， 用 流动相配制成系列浓度的混合对照品 溶液， 按前述色谱条件试验， 以各组分质量浓度 （ ,I H>） 为横坐标， 峰面积为纵坐标做工作曲线。 上述 , 种组分依次在质量浓度为 "C #"/ G $!C - ,I H>，"C #!" G $,C " ,I H>，"C 11- G !/C 1 ,IH> 时线性 关系 良好 （ $分别为"C 111 1， "$ 111 $ ，"$ 111 ,） 。 当 %&’ H , 时， , 种 组分的检测限依次为 "C $，"C $，"C ! -I。#! %" 精密度试验2 2 取同一批 89: 原料药 - 份， 按上述试验方法， 以已 知杂质校正峰面积和其他杂质的峰面积的总和考察精密度， 以有关物质含量考察重复性， 结果 ;</,$B 和 ;</,," 的 校正 峰面积平均值依次为$"/ ,$- （ 相 对标准偏 差 （ <;B） 为 !C $ @）和, $## （ <;B 为 /C 1@） ， 其 他 杂 质 的 总 峰 面 积 平 均 值 为." 111 （ <;B 为 !C ,@） ； 有关物 质的 含量为 "C #$ @（ <;B 为,C .@） ， 精密度和重复性良好。#! &" 降解产物的检测2 2 酸 破 坏 性 试 验： 取 89: 原 料 药 $" ,I 溶 于 !" ,>$ ,"#H> 盐酸溶液中， 于 #" J 水浴放置 ! D， 用 $ ,"#H> 氢氧化钠中和 至 中 性， 用 流动 相 定容至 $"" ,>。 取 # !> 进样， 未见明显的酸性降解产物峰。图 !" 加入 "#%$!’、 "#%$$( 对照品的重结晶母液的色谱图2 2 碱破坏性 试验： 取 89: 原料药 $" ,I 溶于 !" ,> "C $,"#H> 氢氧化钠溶液中， 于室 温 （ !# J ） 下放置 ! D， 用 "C #,"#H> 盐酸中和至中 性， 用 流动相定容至 $"" ,>。 取 # !>进样， 碱性降解产物峰与主峰完全分离。2 2 高温、 强光照射、 高湿度试验： 取 89: 原料药适量， 分别在高温 （ -" J ） 、 强光照 （ （ /#"" F #""） #K） 和高湿度 （ 1!C #@<=） 下放置 $" / 后取样检测， 均未见明显的降解产物峰。#! )" 粗品中杂质的检测2 2 在含杂质较多 的 甲 醇二次结晶 母液中 加入 ;</,$B 和;</,," 对照品作为供试品 溶液， 考察主成分与相 邻杂质的分离情况 （ 见图 $） 。 按前述色谱条件测定 , 批 89: 原料药中的 有关 物 质， 发 现 , 批 样品 中 有关 物 质 的 含量 （ 质 量 分数） 均低于 "C ##@。