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动物医学进展， ２０１２， ３３（ ２）： ４ ６—５１Ｐ ｒ ｏ ｇ ｒ ｅ ｓｓｉｎ Ｖ ｅ ｔｅ ｒ ｉｎ ａ ｒ ｙＭ ｅ ｄ ｉｃ ｉｎ ｅ三种中药和桦褐孑Ｌ 菌提取物体外抗弓形虫试验王韵篪， 鞠玉琳。 ， 姚琳（ 延边大学农学院， 吉林延吉１３３０ ０ ２）摘要： 为了进一步研究甘草、 黄苓、 马齿苋和桦褐孔茵体外抗弓形虫作用， 本试验将提取的３种中药和桦褐孔菌提取物及其组合分别进行了体外抗弓形虫试验。 结果表明， 甘草和黄芩提取物具有较好的抗虫效果， 且黄芩优于甘草， 马齿苋和桦褐孔茵提取物抗虫效果较弱； 甘草与黄芩组舍、 ４ 种提取物组合的效果优于其他组合和蒿甲醚组。 说明４ 种提取物组成的复方在体外具有良好的抗弓形虫作用。关键词： 中药提取物； 弓形虫； Ｍ Ｔ Ｔ 法中图分类号： ￥ ８ ５９ ． ７ ； ￥ ８ ５２． ７ ３１文献标识码： Ａ文章编号： １０ ０ ７ —５０ ３８ （ ２０ １２）０ ２—０ ０ ４ ６—０ ６弓形虫。 Ｔ ｏ ｘ ｏ ｐ ｌｓｍ ａ ｓｉｓ）是由刚地弓形虫（ Ｔ ｏ ｘ ｏ ｐ ｌａ ｓｍ ａｇ ｏ ｎ ｄ ｉｉ）引起的全身性感染的人兽共患寄生虫。 是全球感染最普遍的人兽共患寄生虫病之一［ １｛ ］。 目前， 该病的治疗主要以西药为主， 但传统的磺胺嘧啶和乙胺嘧啶联合应用表现出了明显的毒副作用。 使其应用受到限制［ ３。 ４ ］。 因此， 探索高效安全的防治药物甚为迫切。 现已证明， 甘草、 黄芩水煎剂在体外具有一定的抗弓形虫作用Ｌ ５剞； 马齿苋和桦褐孔菌水煎剂对小鼠急性弓形虫感染有较好的治疗作用， 桦褐孔菌多糖为体内抗弓形虫作用主要成分¨ ’ ７ ］。 本试验将４ 种提取物及其组合进行抗弓形虫的体外试验， 以探讨其体外抗弓形虫作用效果。１材料与方法１． １材料１． １． １试剂Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ 干粉（ Ｇ ＩＢ Ｃ Ｏ ）； 胎牛血清（ 天津灏阳生物有限公司）； Ｍ Ｔ Ｔ （ Ｓ ｉｇ ｍ ａ ）； 二甲基亚砜（ Ｄ Ｍ Ｓ Ｏ ）（ Ａ ｍ ｒ ｅ ｓｃ ｏ 公司进口分装）； 其他试剂为国产分析纯。１． １． ２仪器二氧化碳培养箱（ Ｎ Ｕ Ａ ＩＲ ， Ｎ Ｕ 一５５０ ０ Ｅ 型）； 倒置显微镜（ Ｎ ｉｋ ｏ ｎ ， ＪＥ ２０ ０ ０ 型）； 旋转蒸发仪（ 上海亚荣生化仪器厂， Ｒ Ｅ － ５２Ａ Ａ 型）； 酶标仪（ 上海科华实验系统有限公司， Ｓ Ｔ ３６ ０ 型）等。１． １． ３试验药材黄芩黄酮（ 乙醇提取物， 总黄酮含量１． ７ ８ ％）； 甘草黄酮（ 乙醇提取物， 总黄酮含量１３． ４ ％）； 马齿苋多糖（ 水提醇沉提取物， 多糖含量８ １． ６％）； 桦褐孔菌多糖（ 水提醇沉提取物， 多糖含量８ １． ２％）。 使用前， ４ 种提取物分别用含１０ ０ ｍ Ｌ ／Ｌ胎牛血清的Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ 培养液按照有效成分含量倍比稀释， 用０ ． ２２ｐ ． ｍ 微孑Ｌ 滤膜过滤除菌， 备用。１． １． ４细胞及虫株非洲绿猴肾细胞（ Ｖ ｅ ｒ ｏ ）由哈尔滨兽医研究所提供； 弓形虫Ｒ Ｈ 株由日本带广原虫病研究所惠赠， 在液氮中保存。１． ２方法１． ２． １４ 种提取物对Ｖ ｅ ｒ ｏ 细胞毒性试验采用Ｍ Ｔ Ｔ 法， 每种药物设试验组、 试验对照组和空白对照组（ 不加细胞）。 取细胞悬液， 计数１０ ５／ｍ Ｌ ， 每孔ｉ０ ０ 肛Ｌ 接种于９ ６ 孑Ｌ 培养板内， 在３７ ℃、 体积分数为５％Ｃ ０ ： 孵育１８ ｈ 。 设５个浓度梯度（ 表１）， 以二倍倍比进行稀释， 加入药物， 各设５个重复孔。 孵育２４ ｈ 、 ４ ８ ｈ 。 试验组每孔加入２０ “ＬＭ Ｔ Ｔ 溶液（ ５ｍ ｇ ／ｍ Ｌ ）， 培养４ｈ ， 吸去孔内培养液。 每孔加入１５０ｔｕ Ｌ Ｄ Ｍ Ｓ Ｏ ， 置摇床上振荡１０ ｍ ｉｎ ， 在酶标仪０ Ｄ 。 。 ： Ⅲ。 。 。 处双波长测量各孔吸光值， 以５孔平均值， 计算各浓度下Ｖ ｅ ｒ ｏ 细胞增殖率。 根据美国药典中关于细胞相对增殖率与细胞毒性分级评价， 将２４ ｈ 、 ４ ８ ｈ 增殖率均在９ ０ ％以上的药物浓度定为安全浓度， 用于体外抗弓形虫试验。 增殖率计算方法：增殖率（ ％）一（ Ｏ Ｄ 值试验组一Ｏ Ｄ 空白对照组）／（ Ｏ Ｄ 值试验对照组一Ｏ Ｄ 值空白对照组）× １０ ０ ％。１． ２． ２４ 种提取物体外抗弓形虫试验参考王海琦等∞１报道的Ｍ Ｔ Ｔ 方法， 每种药物设试验组、 加虫体对照组、 不加虫体对照组和空白对照组。 在底部形成单个细胞层的９ ６ 孔板内接种经５肚ｍ 滤膜纯化后的弓形虫速殖子（ ５× １０ ５个／孔）， 培养４ ｈ 后吸弃－ ●＿ ＿ 一＿ ＿ ＿ ＿ ＿ － ＿ － ＿ ＿ ＿ ＿ ’ ＿ － ＿ ＿ ＿ ●＿ ＿ ＿ ＿ ＿ － － － ， ＿ ＿ ＿ － ＿ ＿ ＾＿ ＿ ●●＿ ＿ 一收稿日期： ２０ １１一０ ８ —１４基金项目： ： 国家自然科学基金项目（ ３０ ８ ６ ０ ２１１）作者简介： 王韵篪（ １９ ８ ６一）， 女， 吉林吉林人， 硕士研究生， 主要从事抗弓形虫中药研究。 ＊ 通讯作者．万方数据