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·374· 20 1 j 】Y 2OO5 ， V ol 20 ， No． 4 藏药金腰草中黄酮诱导 K 562 细胞凋亡及其分子机制研究 王玉平 杨 云裳 杨林西 高丽萍 闫 波 【 摘要1 目的研究藏药金腰草中6， 7， 3 ． 三甲氧基一 3， 5， 4 三羟基黄酮对人红白血病细胞株 K562 的凋亡诱导效应及其可能 采用四氮唑蓝( MTT )比色法、 透射电镜、 细胞周期分析法和 DNA 琼脂糖凝胶电泳检测 K 562 细胞凋亡； 采用 流式细胞术(FCM )测定细胞 Bc1 ． 2、 Fas 蛋白表达水平。结果6， 7， 3 ， 三甲氧基． 3， 5， 4 一 三羟基黄酮可以抑制 K 562 细胞增殖 ， 并呈 观典型的凋亡形态改变； 细胞周期分析显示 S 期细胞数明显增多， 出现 S 期阻滞； DNA 琼脂糖凝胶电泳可见明显的梯状条带 ； 6， 7， 3 一 三甲氧基一 3， 5， 4 一 三羟基黄酮作用 72 h 后， Bcl一 2 蛋白阳性表达率由 36． 10％下降到 27． 78％， F as 蛋白阳性表达率由 11． 33％上 升到 32． 76％。结论6， 7， 3"-三甲氧基一 3， 5， 4 一 三羟基黄酮对 K 562 细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用。其诱导凋亡可能与下调 Bcl一 2 和上调 Fas 有关 。 【 关键词】 金腰草； 黄酮； 白血。 K562 细胞； 凋亡 ； Bc1 2 蛋白； Fas 蛋白 中图分类 号： R73— 3 文献标识码 ： A 文章编号 ： i001— 5930(2005)04． 0374— 03 的作用机制。方法K 562 A p optosis I nduc ed by F lavone f rom T ibet an M edicine C hrysosplenium N ud i ca ul e B un ge an d i ts M ol ecu la r M ech a ni sm W_ ANG Y u— ping ， YA NG Y un— sha ng ， Y A NG L in— x i ， et a1． D epartment of Biochernistry and Molecular Biology ， School o f Ba— si c i ca l S ciences ， L a nzhou U ni ver si ty ， L a nzhou ， 7 30 000 【 Abstract】 Objective To study the apoptosis of K 562 cells induced by 6， 7， 3"-trimethoxy一 3， 5， 4"-trioxy— f l avone from T ibetan M edicine C hrysosplenium nudicaule B ung e and t he possible mecha nism ． M ethods M T T colorimetric assay ， electronmicroscope ， cell cy cle analy sis ， and D N A ag arose g el electrophores is w ere used to ex amine apoptosis in K 562 cells． E x pression lev els of B cl一 2 and F as protein w ere measured w ith flow cytometry ． R esults 6 ， 7 ， 3' -trimethox y 一 3， 5， 4 一 triox y — flavone inhibited proliferation of K 562 cells． T ypical morphologic fea tures of a p o ptosis w ere observ ed C ell cycle analysis ind ic ated increa sed S phase proportion ， as w ell as a ppar— ent block age of S phase． A garose gel electrophoresis show ed evident DN A fragm entation ． A fter treated by 6 ， 7 ， 3'-trimethoxy 一 3 ， 5， 4 一 triox y— flavone for 72 h ． the Bcl一 2 p o sitiv e cells decre a sed from 36 ． 10％ to 27． 78 ％ and the F as positive cells incre a sed from 11． 33％ to 32 ． 76 ％ ． C onclusion 6 ， 7 ， 3'-trimet hox y一 3 ， 5 ， 4'-triox y— flav one can inhibit proliferation and induce apoptosis of K 562 cells ， w hose mecha nisms may be carried out via down— reg ulatiov the ex pression of B H一 2 and up— reg ulation the e xpression of F as． 【 K ey words】 Chrysosplenium； Flavone； L eukemia； K 562 cells； A poptosis； Bcl一 2 protein； F as protein ( T he Practical J ournal o f Ca ncer ， 2005， 20： 374- - 376) 金腰草为虎耳草科植物裸茎金腰子的全草_1]， 是 1种产于青藏高原 的中草药 ， 在藏医药 中已经有多年 的使用和研究。近年来发现其中含有包括黄酮类化合 物和一些挥发性化学成分在内的多种有效成分[ ， 使 用药物提取物进行体外实验研究表明对多种肿瘤细胞 有抑制作用[ 。本实验研究了从藏药金腰草 中分离 出 来的 6， 7， 3 一 三 甲氧基一 3， 5， 4 一 三羟基 黄 酮 ( 6， 7， 3 一 trimethoxy一 3 ， 5 ， 4'-trihydroxy— f l avone， T T F ) 对 人 红 白血病细胞株 K 562 的凋亡诱导作用及其可能的作用 机制。 作者单位 ： 730000 兰州大学基础医学 院生物化学与分子 生物学教 研室 (王玉平 、 杨林 西、 高丽萍 、 闫 波 ) ， 730000 中国科学 院化学 物理 研究所 (杨云裳 ) 1材料与方法 1． 1材 料 6， 7， 3 一 三 甲氧基一 3， 5， 4 一 三羟基黄酮由中国科学 院化学物理研究所杨云裳博士提取 、 鉴定并馈赠 。溶 于 5％二甲基亚砜(DMSO)中， 配制成 10 g／ L 的储备 液 ， 超滤 除菌 ， 置 一20 ℃ 冰箱 避 光保存 。实 验 时用 RPMI 1640 培养液稀释至各所需浓度 ， DMSO 终浓度 小于 0． 1％。四氮唑蓝 ( MTT ) 为 A mresco 公司产 品。 琼脂糖为 Serva 公司产品。溴化 乙啶为 F luka 公司产 品。F IT C 标记 鼠 IgG1、 鼠抗人 Bcl一 2 单抗和 F as 单抗 为美国 Caltag 实验室产品。 1、 2细胞株和细胞培养 人红 白血病细胞 K 562 引 自原兰州医学院医学实 维普资讯 http://www.cqvip.com