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188宝金博页面版: 检测H1~15禽流感病毒亚型的DNA芯片初步研究

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内容提示: 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会论文集检测H1~15禽流感病毒亚型的DNA芯片初步研究王秀荣,于康震,刘丽玲,乔传玲,石 锐,孙凯,孔宪刚,陈化兰( 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨,150001)摘要:本文对流感病毒14个血凝素亚型的基因芯片检测技术进行了初步研究。通过RT-PCR克隆禽流感病毒血凝紊基因片段,获得重组质粒。从重组质粒扩增大约500 bp的DNA片段,浓缩后点到氨基化玻璃载体上,制成芯片。待检病毒样品用Trozol LS提取RNA,反转录过程中用Cy5标...

文档格式:PDF | 页数:4 | 浏览次数:63 | 上传日期:2015-12-29 15:49:14 | 文档星级:
中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会论文集检测H1~15禽流感病毒亚型的DNA芯片初步研究王秀荣,于康震,刘丽玲,乔传玲,石 锐,孙凯,孔宪刚,陈化兰( 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨,150001)摘要:本文对流感病毒14个血凝素亚型的基因芯片检测技术进行了初步研究。通过RT-PCR克隆禽流感病毒血凝紊基因片段,获得重组质粒。从重组质粒扩增大约500 bp的DNA片段,浓缩后点到氨基化玻璃载体上,制成芯片。待检病毒样品用Trozol LS提取RNA,反转录过程中用Cy5标记样品cDNAs。将标记样品与芯片杂交,扫描芯片上待检样品与芯片上捕捉探针的结合位点,杂交信号与预期设想一致。结果显示,DNA芯片技术可以提供一种有效的AIV血凝索亚型鉴别诊断方法。关键词:禽流感病毒;基因芯片;血凝素亚型鉴定流感病毒是属于正粘病毒科的RNA病毒,只有A型流感病毒可以在自然条件下感染鸟类。A型流感病毒基因组含有8个单股负链RNA病毒节段,从禽类中分离到15个血凝索( HA) 、9个神经氨酸酶亚型。流感病毒的HA亚型鉴定方法目前主要依靠血凝抑制试验( HI) ,流感病毒颗粒表面的HA蛋白,具有识别并吸附于红细胞表面受体,凝聚红细胞的功能,HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法,用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定,也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。基因芯片是指将大量的核酸分子以大规模阵列形式排布在很小的载玻片等载体上,通过与标记的样品进行杂交,检测杂交信号的强弱进而判断样品中被检分子的数量。包被在固相载体上的核酸分子有序排列成微点阵( mi cmarray) 。目标是用于DNA序列的测定、基因表达谱鉴定、基因突变体的检测分析,以及基因组的功能研究等。自DNA芯片首次报道以后,芯片技术对不同生物体的基因表达谱研究进行了改革,通过原位合成低聚核苷酸或者基金项目:863项目( 2003AA222006) ;国家十五重点攻关项目:(2004BA519A23);国家自然科学基金项目(30200201).作者简介:王秀荣(1968~),女,黑龙江东宁人,副研究员,博士,主要从事禽流感快速诊断技术研究合成后自动点样技术制成芯片,可以大规模分析基因的表达情况,最近还广泛用于药物筛。槐涞募觳,遗传进化分析和基因组绘图。由于芯片技术允许同时扫描成百上千的核苷酸序列,也显示了作为一种诊断方法的巨大潜能。本研究在基因芯片平台上构建不同HA亚型禽流感病毒( AIV) 的快速鉴定技术模型。通过RT—PCR获得用于制备芯片的核酸分子,被检病毒样品常规处理后,在反转录过程中用cy5荧光标记,杂交后,根据试验结果鉴别AIV的HA亚型。1材料和方法1.1病毒本研究中所使用的毒株由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室提供,在10日龄SPF鸡胚上增殖,病毒序列在GenBank中的相关序列号见表I。表1 本研究中使用的禽流感瘸毒11啦! 塑 坠鲤! ! 丛坠 垡望曼然!!!!!!i!塾凹A/Duck/Al berta/35/76AF09 1 309A/Duck/Germany/1215/73A/Duck/Ukrai ne/1/63A/Ducl dCzech/56A/Turkey/Engl and/N28/73A/Turkey/Carmda/63A/Afri Cal l Starl i ng/983/79A/Turkey/Ontari o/611 8/68Affurkey/Wi sconsi n/1/66PD 384/79删emphis/546/76A/Cml l /Matyl and/704/77A/Mal l ard/Gurj ev/263/82A/D∞k/Austral i a/341/83V01087AF290436AF202232D90304D90305D90308和M26090M35997—39—49658№№№№№MM№啉ⅢⅢ甜跗舷m||{;m啪m姗聃ⅢⅢmmm

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