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    188宝金博页面版: 兔皮肤病原真菌的分离及其ITS序列的分析

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    内容提示： 动物医学进展， ２０ １ｌ， ３２（ ４ ）： １１８ 一１２ｌＰ ｒ ｏ ｇ ｒ ｅ ｓｓｉｎＶ ｅ ｔｅ ｒ ｉｎ ａ ｒ ｙＭ ｅ ｄ ｉｃ ｉｎ ｅ兔皮肤病原真菌的分离及其ＩＴ Ｓ 序列的分析李明勇１’ ２， 刘敬博１， 牟（ １． 山东农业大学动物科技学院， 山东泰安２７ １０ １８ ； ２． 青岛康大外贸集团公司， 山东青岛２６６４ ０ ０ ；特２， 王召朋２， 周玉法３， 刘长宏４， 周波５， 宋娥５， 柴同杰ｈ３． 泰安市岱岳区畜牧局． 山东泰安２７ １０ １８ ； ４ ． 胶南市畜牧局， 山东胶南２６６４ ０ ０ ； ５． 胶州市畜牧局， 山东２６６３０ ０ ）摘要： 分离发病兔场皮肤真菌病的病原， 并对其内转录间隔区（ ＩＴ Ｓ ）序列进行分析鉴定。 采集病免患病部位的皮屑、 痂皮进行培养， 并根据形态学的特点进行鉴定； 然后采用真菌内转录间隔区通用引物对该区域进行Ｐ Ｃ Ｒ 扩增测序， 并将该区域序列与Ｇ ｅｎ Ｂ ａ ｎ ｋ 中的核酸...

    文档格式：PDF | 页数：4 | 浏览次数：66 | 上传日期：2015-03-15 17:06:49 | 文档星级：
    动物医学进展， ２０ １ｌ， ３２（ ４ ）： １１８ 一１２ｌＰ ｒ ｏ ｇ ｒ ｅ ｓｓｉｎＶ ｅ ｔｅ ｒ ｉｎ ａ ｒ ｙＭ ｅ ｄ ｉｃ ｉｎ ｅ兔皮肤病原真菌的分离及其ＩＴ Ｓ 序列的分析李明勇１’ ２， 刘敬博１， 牟（ １． 山东农业大学动物科技学院， 山东泰安２７ １０ １８ ； ２． 青岛康大外贸集团公司， 山东青岛２６６４ ０ ０ ；特２， 王召朋２， 周玉法３， 刘长宏４， 周波５， 宋娥５， 柴同杰ｈ３． 泰安市岱岳区畜牧局． 山东泰安２７ １０ １８ ； ４ ． 胶南市畜牧局， 山东胶南２６６４ ０ ０ ； ５． 胶州市畜牧局， 山东２６６３０ ０ ）摘要： 分离发病兔场皮肤真菌病的病原， 并对其内转录间隔区（ ＩＴ Ｓ ）序列进行分析鉴定。 采集病免患病部位的皮屑、 痂皮进行培养， 并根据形态学的特点进行鉴定； 然后采用真菌内转录间隔区通用引物对该区域进行Ｐ Ｃ Ｒ 扩增测序， 并将该区域序列与Ｇ ｅｎ Ｂ ａ ｎ ｋ 中的核酸数据库进行比对分析， 确定病原真菌的生物学分类， 最后对其亲缘关系进行系统发育分析。 分离得到的病原真菌经形态学初步鉴定为小孢子菌属； 序列比对和系统发育分析表明， 该茵与舱ｃｒｏ ｓｐｏ ｒ“ｍｇ ｙ ｐ ｓＰ “ｍｓｔｒ ａ ｉｎＷ Ｃ Ｈ —Ｍ Ｇ ０ ０ ｌ（ 序列号： Ｇ Ｕ ３４ ８ ９ ９ ０ ． １）的内转录间隔区（ ＩＴ Ｓ ）序列具有９ ９ ％的同源性， 在系统发育树上属于同一分支， 从而确定该茵为石膏样小孢子菌。关键词： 家兔； 皮肤病原真茵； 石膏样小孢子菌； 内转录间隔区序列中图分类号： Ｓ ８ ５２． ６ ６文献标识码： Ｂ文章编号： ｌ０ ０ ７ ?５０ ３８ （ ２０ １１）０ ４ 一Ｏ ｌｌ８ 一０ ４皮肤真菌病的病原菌主要是毛癣菌属（ １Ｗ ｃ＾ｏ ｐ ＾ｙ 加＂）、 小孢子菌属（ ＾砬ｃｒ Ｄ ｓ户ｏ ｒ “ｍ ）和表皮癣菌属（ 。槿绾。 户＾ｙ￡ｏ 咒）的真菌［ １］。 近年来，该病原菌引起的感染已成为：ι缁峁参郎囊淮竽烟猓 “］， 世界２０ ％～２５％的人群受到该病的困扰［ ７ ］。 这三种菌是人和动物机体应排除的病原菌，不论是从皮肤病灶处或非病灶处分离到这些菌均视为异常‘８ｌ。兔皮肤病原真菌主要为毛癣菌和小孢子菌， 均属于半知菌亚门、 丝孢菌纲、 丝孢菌目、 丛梗孢科。其中小孢子菌属中的有些种已被发现其有性阶段，属于子囊菌亚门、 不整子囊菌纲、 散囊菌目、 裸囊菌科的Ｎ ａ ， ｚ， ｌ娩ｚ妇属［ ｇ ］。 皮肤真菌在兔群中的感染亦相当普遍和严重， 其呈世界性分布， 散发或流行。 在一些发病兔。 仔兔生长速度下降２０ ％～３０ ％， 发病率３０ ％～１０ ０ ％， 死亡率可达２０ ％～４ ０ ％［ １０ ］。 而且， 该病的暴发还导致仔兔的成活率低于７ ０ ％， 所产皮张残次品占６ ０ ％以上［ １¨ 。 ２０ ０ ９ 年下半年， 青岛地区某兔场就发生了以嘴部、 眼周、 耳背及肢端出现皮肤脱毛， 继而出现皮肤破溃、 流出黄色渗出物、日久结痂及鳞屑的皮肤。 给当地兔业发展造成很入的影响。 为此， 本研究通过采集病兔发病部位皮屑、 结痂和被毛等病料， 进行病原菌的分离及鉴定，确定引起该病的病原， 为防治该地区兔皮肤病原真菌的发生提供依据。１材料与方法１． １材料１． １． １主要试剂死ｑ Ｄ Ｎ Ａ 聚合酶、 ｄ Ｎ Ｔ Ｐ 、Ｍ ｇ Ｃ ｌ２ 、 １０ × Ｐ Ｃ Ｒｂ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ 、 Ｄ Ｌ ２ Ｏ Ｏ ＯＤ Ｎ ＡＭ ａ ｒ ｋ ｅｒ 、Ｄ Ｌ５ ０ ０ ０ Ｄ Ｎ ＡＭ ａ ｒ ｋ ｅｒ 均为宝生物工程（ 大连）有限公司产品； Ｅ ａ ｓｙ Ｐ ｕ ｒ ｅＴ ＭＧ ｅ ｎ ｏ ｍ ｉｃ Ｄ Ｎ ＡＥ ｘ ｔｒ ａ ｃ ｔｉｏ ｎｋ ｉｔ和Ｅ ａ ｓｙ Ｐ ｕ ｒ ｅ Ｔ ＭＰ Ｃ Ｒ Ｐ ｕ ｒ ｉｆ ｉｃ ａ ｔｉｏ ｎｋ ｉｔ为北京全式金生物技术有限公司产品。１． １． ２引物合成真菌通用引物ＩＴ Ｓ ｌ和ＩＴ Ｓ ４ 由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。１． ２方法１． ２． １病料的采集和处理病料采自山东青岛某大型兔。 先用７ ５０ ｍ Ｌ ／Ｌ 酒精对患处消毒后， 用无菌手术刀刮取患处及边缘的皮屑、 痂皮和被毛等病料放入无菌的１． ５ ｍ Ｌ 离心管中保存。１． ２． ２病料的镜检将采集到的皮屑、 痂皮和被毛等病料置于载玻片上， 滴加几滴１０ ０ ｇ ／Ｌ Ｋ Ｏ Ｈ 后，加盖玻片， 静置ｌｏ ｍ ｉｎ 使病料透明软化， 然后进行直接镜检。１． ２． ３分离培养将采集到的皮屑、 痂皮和被毛等病料接种沙氏斜面培养基， 放入２６ ℃恒温培养箱培养１周～２周， 观察菌落生长情况。 同时用接种针挑取菌落中部新生菌丝接种于沙氏培养基平皿进行收稿日期： ２０ １１一Ｏ ｌ—０ ５基金项目： ２０ ０ ９ 年国家国际合作项目（ ２０ ０ ９ Ｄ Ｆ Ａ ３２８ ９ ０ ）； 国家自然科学基金项目（ ３０ ５７ １３８ １）作者简介： 李明勇（ １９ ７ ６一）， 男。 山东胶南人， 硕士研究生． 主要从事环境微生物及其病原学研究。 ＊ 通讯作者万方数据

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