188宝金博页面版

农业生物技术学报J ournal ofAgri cul tural Bi otechnol ogy 2008，16(1)：163～168动物转基因技术研究新进展·综述·施振旦怫，李万利-，张永亮-，陈学进z( 1．华南农业大学动物科学学院，广州510642；2．上海交通大学医学院附属新华医院发育生物学实验室，上海200092)摘要：动物转基因的关键限制因素是制备效率和基因表达的精确调控。综述了近年发展的提高转基因效率的非定点整合转基因方法，如睾丸转基因法和卵巢转基因法；提高转基因精确性的定点整合转基因的基因打靶法；调控外源基因表达的时空表达和可控表达转基因策略；通过转基因对特定基因的进行表达时空和可逆的RNA干扰灵活精细调控。对这些新的转基因方法的优缺点进行了讨论。并探讨如何利用这些方法进行转基因动物的制备。关键词：转基因方法；效率；时空表达；可控表达；RNA干扰中图分类号：S188 文献标识码：A文章编号：1006．1304(2008)01-0163．06An Update on the Devel opment ofTechni quesforProduci ng Transgeni c Ani mal sSHIZhen- dan怫，LI Wan· l i l ，ZHANG Yong—l i ang’ ，CHEN Xue-j i n2“ ．Department of Ani mal Sci ences, South Chi na Agri cul tural Uni versi ty, Gtmngzhou 510642, Chi na；2．Laboratory of Bi ol ogyResearch Center, Xi nhua Hospi tal , School ofMedi ci ne, Shanghai J i aotong Uni versi ty, Shanghai 200092, Chi na)A址a瞳：Efficiency and speci fi ci ty are key l i mi ti ng factors on preparati on of transgeni c ani mal s．Thi s revi ew descri bes the re·centl y devel oped ani mal gene transfer techni ques，i ncl udi ng gene transfer i nto the testi s and ovary for easi l y maki ng non-si te speci fi cmethods；gene targeti ngi n embryoni c stem cel l s，somati c cel l s and pri mordi algerm cel l sfor si te speci fi cmethods；and si te—and ti me—speci fi c gene targeti ng and control l ed expressi on of transferred genes．In addi ti on，methods of uti l i zi ng newl y devel oped RNA i nter-ference，combi ned wi th the above gene expressi on control l i ng techni ques，to produce transgeni c ani mal s toSpati otemporal l ) andre—versi bl y knockdown speci fi cgenes areal so di scussed．The meri ts anddi sadvantagesfor each method are al sodi scussed，as wel laspotenti al s of usi ng these methods to devel op transgeni c ani mal s for breedi ng of new ani mall i nes，studyi ng of di sease model sand pro·ducti on of therapeuti c medi ci nes．K巧words：gene transfer method；effi ci ency；spati o-temporal expressi on；i nduci bl e expressi on；RNA i nterference动物转基因技术是将外源基因移人动物细胞并整合到基因组中，从而使其得以表达。自从Bergand Eckardt( 1970) 仓IJ 立DNA重组技术、J aeni sch andMi ntz( 1974) 首次利用反转录病毒感染胚胎的方法进行动物转基因以来，动物转基因技术得到不断完善和发展。利用逆转录病毒介导、显微注射、电穿孑L、脂质体介导、精子载体等转基因方法，制备了小鼠、大鼠、兔、猪、绵羊、山羊、鸡、蛙、鱼类等多种转基因动物。而近几年来动物转基因的方法和转基因的内涵又有了新进展，包括通过简便的性腺注射介导的转基因、转入RNA干扰基因、基因打靶结合克隆的定点整合转基因和基因的条件表达转基因技术等，本文对这些新近发展的技术作详细的介绍，并探讨如何利用这些技术更好地服务于动物新品种培育、医学疾病模型研究、生物制药等领域。1性腺转基因方法早期的动物转基因研究中，大量应用了利用逆转录病毒介导、显微注射、电穿孑L、脂质体介导、精子载体法等方法( 魏平华和陈清轩，1996；陈永福，2002) ，这些方法需要复杂的操作仪器和胚胎体外培养等复杂的实验过程，同时获得转基因动物的效率很低，一般不到10％。Ki m etal ．( 1997) 根据精子作为外源基因载体转基因的原理，及一般细胞都能够吸收外源DNA的原理，把外源基因用脂质体转染精原细胞，再将被转’ 通讯作者。Author for correspondence．教授，主要从事动物分子遗传与基因工程研究。E—mai l ：<zdshi @scau．edu．CII>收稿日期：2007-05．15 接受日期：2007-06-13