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188宝金博页面版: [精品]类胡萝卜素的测定方法

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内容提示: 类胡萝卜素的测定方法(高效液相色谱法) 本方法适用于各类食品中以羟基类胡萝卜素为主的多种类胡萝卜素的测定。 本方法最低检出量为: α-胡萝卜 素为 5ng/mL, β-胡萝卜 素为 4.3ng/mL, γ-胡萝卜 素为3.5ng/mL, 番茄红素为 2.7ng/mL, 斑蝥黄素为 1.0ng/mL。 1. 方法提要 样品以丙酮-石油醚 (1+1 体积比)混合溶剂反复萃取使类胡萝卜素与其他成分分离, 在 450nm波长条件下进行 HPLC 分析检测, 通过外标法计算各种类胡萝卜素的含量。 2. 仪器 (1) 高效液相色谱仪。 (2) 冷凝回流皂化装置。 (3) 旋转蒸发仪。 (4) 离心机(5000r/min)。 3. 试剂 本方法所使...

文档格式:DOC | 页数:2 | 浏览次数:874 | 上传日期:2015-03-09 03:53:39 | 文档星级:
类胡萝卜素的测定方法(高效液相色谱法) 本方法适用于各类食品中以羟基类胡萝卜素为主的多种类胡萝卜素的测定。 本方法最低检出量为: α-胡萝卜 素为 5ng/mL, β-胡萝卜 素为 4.3ng/mL, γ-胡萝卜 素为3.5ng/mL, 番茄红素为 2.7ng/mL, 斑蝥黄素为 1.0ng/mL。 1. 方法提要 样品以丙酮-石油醚 (1+1 体积比)混合溶剂反复萃取使类胡萝卜素与其他成分分离, 在 450nm波长条件下进行 HPLC 分析检测, 通过外标法计算各种类胡萝卜素的含量。 2. 仪器 (1) 高效液相色谱仪。 (2) 冷凝回流皂化装置。 (3) 旋转蒸发仪。 (4) 离心机(5000r/min)。 3. 试剂 本方法所使用试剂除特殊注明外, 均为分析纯; 所用水为重蒸馏水。 (1) 丙酮-石油醚(1+1 体积比) 混合溶剂: 取相同体积的丙酮、 石油醚混匀。 (2) 50% KOH 甲醇-水溶液: 称取 250g 氢氧化钾, 用 50mL 适量水溶解后, 用甲醇定容至500mL 容量瓶, 备用。 (3) 无水硫酸钠(Na-2SO4)。 (4) 二丁基羟基甲苯(BHT)。 (5) 无水乙醇(C2H5OH)。 (6) 流动相使用液: 按乙腈+二氯甲烷+甲醇(85+10+5) 比例准确量取各溶剂, 并充分混匀, 经.45μm 微孔膜过滤后使用。 (7) 类胡萝卜素标样: α-胡萝卜素、 β-胡萝卜素、 γ-胡萝卜素、 番茄红素、 斑蝥黄素。 (8) 标准溶液: 准确称取 α-胡萝卜素、 β-胡萝卜素、 γ-胡萝卜素、 番茄红素、 斑蝥黄素一定量, 先分别用少量的乙酸乙酯溶解, 再用甲醇配制成 60~80ng/L 的标准储备液(于-30℃冻箱保存), 使用时再配成 3.5~16.5mg/L 的标准使用液。 4. 测定步骤 (1) 样品处理: a. 皂化提取法(如牛奶等脂肪含量较高的样品): 取 250L 鲜牛奶于 2℃、 5000r/min 冷冻离心 30min, 取上层油脂于 250mL 皂化瓶中, 加入 50mL 乙醇、 40mL 50% KOH 甲醇溶液、0.1g BHT, 65~75℃回流皂化 30min, 用石油醚反复提取皂化液, 多次水洗至中性后用无水硫酸钠脱水, 定容至 25mL 容量瓶中, 备用。 b. 直接提取法(如番茄等脂肪含量较低的样品): 适量新鲜成熟番茄匀浆后称取 5~10mg 于小烧杯中, 加入 0.1g BHT, 用丙酮-石油醚(1+1 体积比) 混合溶剂提取 3 次, 合并、 收集

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