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188宝金博页面版: 鸡胚培养和细胞培养(精)

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内容提示: 第一节 鸡胚接种 一、鸡胚的结构 鸡胚是正在发育的活的机体,组织分化程度低,细胞代谢旺盛,适于许多人类和动物病毒的生长增殖,是常用的病毒分离培养方法之一(衣原体、立克次体的分离亦用鸡胚)。目前,鸡胚在正粘病毒、副粘病毒、痘病毒、疱疹病毒及脑炎病毒,尤其在禽类病毒的研究上应用较多。可用于病毒的分离、鉴定,抗原和疫苗制备,以及病毒性质的研究等。虽然随着组织培养技术的不断发展,不少病毒已不再用鸡胚来分离培养,但对某些病毒来说,鸡胚仍是一种不可缺少的培养手段。鸡胚培养的优点是,来源充足,价格低廉,操作简单,无需特殊设备或条件,易感病毒谱较广,对接种的病毒...

文档格式:DOC | 页数:31 | 浏览次数:34 | 上传日期:2015-08-11 07:49:48 | 文档星级:
第一节 鸡胚接种 一、鸡胚的结构 鸡胚是正在发育的活的机体,组织分化程度低,细胞代谢旺盛,适于许多人类和动物病毒的生长增殖,是常用的病毒分离培养方法之一(衣原体、立克次体的分离亦用鸡胚)。目前,鸡胚在正粘病毒、副粘病毒、痘病毒、疱疹病毒及脑炎病毒,尤其在禽类病毒的研究上应用较多。可用于病毒的分离、鉴定,抗原和疫苗制备,以及病毒性质的研究等。虽然随着组织培养技术的不断发展,不少病毒已不再用鸡胚来分离培养,但对某些病毒来说,鸡胚仍是一种不可缺少的培养手段。鸡胚培养的优点是,来源充足,价格低廉,操作简单,无需特殊设备或条件,易感病毒谱较广,对接种的病毒不产生抗体等。当然,鸡胚培养也有其缺点,即除痘斑和鸡胚死亡是特异性感染指征外,多需用第二试验系统来测定病毒存在与否;非 SPF 鸡胚,亦可能含有对某些家禽病毒的母源抗体,甚至还可能带有鸡白痢沙门氏菌、霉形体、鸡白血病等病毒。因此,用鸡胚分离培养病毒时,必须考虑这些问题。原则上应使用非免疫蛋来孵鸡胚,最好用 SPF 鸡胚。 一般说来,孵育至 8-14 天的鸡胚最有利于病毒的生长,因为此阶段鸡胚发育日趋完善,各种脏器均已形成,已能经受接种物的适当刺激,同时胚胎细胞幼嫩,骨胳不健全,还未长出羽毛,很利于病毒在胚胎中增殖,同时也有利于收获高滴度的病毒, 14 天以后,胚胎骨骼硬化,胚皮表面羽毛渐生,已不便感染病毒,特别是已不利于收获病毒材料。在操作鸡胚时)一定要注意到这一点。 孵育至 21 天左右,羊水和尿囊液已全部被胚胎吸收,一部分卵黄陷入胚胎腹部,另一部分则仍留在体外,胚胎已发育成小鸡,破壳而出。鸡胚的基本结构如图,从图中可以看出,鸡胚的最外层为石灰质的卵壳,上有气孔供气体交换,卵壳之下为壳膜,很易与卵壳分离,其功能是使气体分子与胚胎内的液体分子在内外进行交换,因此在孵育时需要有一定的湿度和空气。如果湿度太低,鸡胚就容易脱水、引起鸡胚死亡。气流不通,鸡胚缺氧,同样会造成鸡胚死亡。鸡胚的钝头(俗称“大头”),是气室,其功能是呼吸和调节胚内压力。壳膜之下为血管丰富的绒毛尿囊膜,其外层为绒毛膜,系外胚层形成,内层为尿囊膜,系内胚层形成,两膜所夹为中胚层。由于胚胎的肺发育不完善,此时绒毛尿囊膜代行胚胎呼吸器官的作用,气体的交换是在绒毛尿囊膜的血管内通过卵壳进行的。尿囊腔是胚胎的排泄器官,内含的尿囊液初为透明液体,成分极类似于生理盐水溶液,以后则尿酸盐含量增高。尿囊液量在 11-13 日龄时最高,平均达 6 毫升左右。 羊膜是胚胎的最内层包被,系外胚层和中胚层形成,羊膜腔内含羊水,胚胎浸于其中,羊水在起初是单纯的生理盐水溶液,以后蛋白质含量增加。羊水量在 8-15 日龄时最高,平均约为 1 毫升左右。附着于胚胎上的是卵黄囊,其膜系由内胚层和中胚层形成,内包卵黄,是胚胎发育的养料。卵的尖端(俗称“小头”)是卵白,是胚胎发育晚期的养料。

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