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188宝金博页面版: PEI 转染法

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内容提示: PEI 转染法材料:质粒 DNA指数生长的真核细胞PEI (聚乙烯亚胺)1×HBS (pH7.4)配方:PEI 储存液(100 μ M): 称取 125 mg PEI 粉末溶解于 50 ml 1×HBS (pH7. 4)中,0. 2 μ m 滤膜过滤, 储存于 4℃备用。1×HBS (pH7. 4):将 8. 76 g NaCl 溶解于 900 ml 超纯水, 加入 20 ml 1 M 的HEPES, 调 pH 值到 7. 4, 定容至 1 L, 过滤(0. 2 μ m 滤膜) 后储存于 4℃备用。方法:1. 细胞分盘:通过胰酶消化收集细胞, 用适当的完全培养基以 4×105至 8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于 60 mm 组织培养皿上(根据实验需要选择培养皿,使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的 70-90%)。 根据细胞贴壁情况于...

文档格式:PDF | 页数:2 | 浏览次数:48 | 上传日期:2019-05-24 14:23:35 | 文档星级:
PEI 转染法材料:质粒 DNA指数生长的真核细胞PEI (聚乙烯亚胺)1×HBS (pH7.4)配方:PEI 储存液(100 μ M): 称取 125 mg PEI 粉末溶解于 50 ml 1×HBS (pH7. 4)中,0. 2 μ m 滤膜过滤, 储存于 4℃备用。1×HBS (pH7. 4):将 8. 76 g NaCl 溶解于 900 ml 超纯水, 加入 20 ml 1 M 的HEPES, 调 pH 值到 7. 4, 定容至 1 L, 过滤(0. 2 μ m 滤膜) 后储存于 4℃备用。方法:1. 细胞分盘:通过胰酶消化收集细胞, 用适当的完全培养基以 4×105至 8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于 60 mm 组织培养皿上(根据实验需要选择培养皿,使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的 70-90%)。 根据细胞贴壁情况于含 5% CO2的 37℃温箱中孵育 8-24 h, 当细胞贴壁完全后即可开始转染。 转染前换入 2 mL 预热的无血清培养基。2. 制备 PEI-DNA 混合物: 以 60 mm 组织培养皿用 420 μ L 反应总体积为例。 准备两支 1. 5 mL 离心管, 一管将质粒 DNA(总量 2-8 μ g 为佳) 加入 240 μ L HBS中, 混匀。 另一管中则用 HBS 将 100 μ M 的 PEI 储存液稀释成 10 μ M, 充分混合。 然后取 180 μ L 10 μ M PEI 溶液加入含有 DNA 的 HBS 中, 充分混匀后室温静置 20-30 min。 最后将这 420 μ L 的 PEI-DNA 混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中, 轻轻摇动平皿混匀, 置于含 5%~7% CO2的 37℃ 温箱孵育。注: 每次用 100 μ M 的 PEI 储存液前都需要先将其充分混匀, 保证所取的浓度一致。3. 培养 6-10 h 后更换为 37℃预热的含有血清的培养基, 继续培养, 16 h 左右

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